免疫分析技術生化分析優(yōu)秀課件

免疫分析技術生化分析第一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

脊髓灰質炎Polio

狂犬病Rabies

風疹Rubella肝炎HepatitisA

肝炎HepatitisB

流感Influenza白喉diphtheria

天花Smallpoxvirus輪狀病毒RotavirusPertussis百日咳第二頁，共四十一頁，2022年，8月28日Comparisonofmaximumandcurrentmorbidityforvaccine-preventablediseases

DiseaseMaximumcasesYear1992Percentagechange白喉Diphtheria麻疹Measles腮腺炎Mumps百日咳pertussis脊髓灰質炎

Polio(paralytic)風疹RubellaCRS破傷風Tetanus乙型流感HeamophilusinfluenzaetypeB乙型肝炎HepatitisB206,939694,134152,209265,26921,26957,68620,0001,56020,00026,6111921194119681934195219691964,6519231984198542,2372,5724,083416011451,41216,12699.9999.7598.3198.4699.9899.7299.9597.1292.9439.40第三頁，共四十一頁，2022年，8月28日疫苗的原理疫苗是將病原微生物及其代謝產物，經過人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預防傳染病的自動免疫制劑。疫苗保留了病原菌刺激動物體免疫系統(tǒng)的特性。當動物體接觸到這種不具傷害力的病原菌后，免疫系統(tǒng)便會產生一定的保護物質，如免疫激素、活性生理物質、特殊抗體等；當動物再次接觸到這種病原菌時，動物體的免疫系統(tǒng)便會依循其原有的記憶，制造更多的保護物質來阻止病原菌的傷害。

免疫分析法是利用抗原抗體特異性結合反應檢測各種物質（藥物、激素、蛋白質、微生物等）的分析方法。第四頁，共四十一頁，2022年，8月28日

第一節(jié)抗原第五頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗原(Antigen，Ag)：能夠刺激機體產生免疫應答，并且能與免疫應答產物(抗體或免疫效應細胞)特異性結合的物質。第六頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗原的兩種基本特性：（1）免疫原性(immunogenecity)：指抗原分子能夠誘導機體產生免疫應答(產生特異性抗體及免疫效應細胞)的性質。

（2）抗原性(antigenicity，又稱免疫反應性)：指抗原分子與免疫應答產物(抗體或免疫效應細胞)發(fā)生特異性結合的性質。第七頁，共四十一頁，2022年，8月28日

完全抗原（completeantigen)：具有免疫原性和抗原性的物質，如：異種動物的血清、細菌、病毒等。半抗原（hapten，又稱不完全抗原incompleteantigen）：無免疫原性，只有抗原性的物質，如：多為某些簡單的小分子物質，如青霉素、磺胺。載體（carrier）：賦予半抗原以免疫原性的蛋白質。半抗原+蛋白質完全抗原第八頁，共四十一頁，2022年，8月28日半抗原

+載體抗體BT完全抗原BBBT在青霉素進入體內后，如果其降解產物和組織蛋白結合，就獲得了免疫原性，并刺激免疫系統(tǒng)產生抗青霉素抗體。當青霉素再次注射人體內時，抗青霉素抗體立即與青霉素結合，產生病理性免疫反應，出現皮疹或過敏性休克，甚至危及生命。

第九頁，共四十一頁，2022年，8月28日第一部分抗原的類型一．根據抗原性質：完全抗原、半抗原第十頁，共四十一頁，2022年，8月28日

二．根據與人體的親緣關系：

1.異種抗原（xenogenicAg）：來源于不同物種的抗原，如微生物、動物蛋白對于人是異種抗原；

2.同種異型抗原（allogenicAg）：來源于同一物種的不同個體的抗原，如來自于另一個個體的血型抗原，主要組織相容性抗原等；

3.自身抗原（autoantigen）：來自于自身的抗原，如眼晶狀體蛋白等。第十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

三．根據抗原的合成方式：天然抗原：異己抗原自身抗原人工抗原：人工結合抗原人工合成抗原基因工程抗原第十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二部分醫(yī)學上重要的抗原一.病原微生物：

1.細菌性抗原：細胞壁：蛋白質、脂多糖等。鞭毛：蛋白質夾膜：多糖

2.病毒性抗原：衣殼：蛋白包膜：糖蛋白

3.其它：螺旋體、真菌等。第十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日痢疾桿菌

霍亂弧菌傷寒桿菌鏈球菌大腸桿菌第十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒病毒（viruses）流感病毒第十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)瘧原蟲第十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日二．細菌的外毒素與類毒素

外毒素：某些病原菌生長繁殖過程中分泌到菌體外的一種代謝產物，為次級代謝產物。其主要成分為可溶性蛋白質。

類毒素：經0.3%～0.4%甲醛處理過的失去毒性保留免疫原性的外毒素。仍然具有刺激人體產生抗毒素，以起到機體從此對某疾病具有自動免疫的作用。它們廣泛地應用于預防某些傳染病、注射到動物體內用于制備抗毒素。第十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日

三．異種動物血清異種動物的血清蛋白對人具有免疫原性。如：馬的血清進入人的體內，馬血清中的許多蛋白質就成為人的抗原物質。

第十八頁，共四十一頁，2022年，8月28日四．血型抗原：

——已經發(fā)現并為國際輸血協會承認的血型系統(tǒng)有30種

1.ABO血型系統(tǒng)：血型抗原（RBC）抗體（血清）

———————————————————A型A抗原抗B抗體

B型B抗原抗A抗體

AB型AB抗原無抗A、抗B抗體

O型無A、B抗原抗A、抗B抗體

———————————————————第十九頁，共四十一頁，2022年，8月28日2.Rh血型系統(tǒng)：

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名稱的頭兩個字母。蘭德斯坦納等科學家在1940年做動物實驗時，發(fā)現恒河猴和多數人體內的紅細胞上存在Rh血型的抗原物質，故而命名的。凡是人體血液紅細胞上有Rh抗原（又稱D抗原）的，稱為Rh陽性。

第二十頁，共四十一頁，2022年，8月28日

實際意義新生兒溶血癥孕婦(Rh-)→胎兒(Rh+)

↓↓抗Rh抗體+新生兒RBC(Rh+)↓

溶血反應

第二十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

第二節(jié)抗體第二十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗體（antibody,Ab）:

機體免疫細胞被抗原激活后，由分化成熟的B細胞分泌的一類能與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）:

具有抗體活性或化學結構與抗體分子相似的球蛋白。

所有抗體都是Ig，但并非所有Ig都具抗體活性。第二十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日血清療法：一種利用被動免疫的療法。將已被免疫的動物血清（抗血清）注射到相應疾病的患者身上以達到治療的目的。這種血清稱為治療血清?；謴推诓∪说难逡部芍委熎渌∪?。

第二十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日第一部分免疫球蛋白的結構

第二十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日N端C端可變區(qū)恒定區(qū)VHVLCH1CH2CH3CL鉸鏈區(qū)V區(qū)：和抗原特異性結合的關鍵部位C區(qū)：決定抗體分子的異種抗原性第二十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二部分單克隆抗體和基因工程抗體抗原決定簇：決定抗原性的特殊化學基團。大多存在于抗原物質的表面，有些存在于抗原物質的內部，須經酶或其他方式處理后才暴露出來。一個天然抗原物質可有多種和多個決定簇。如白喉類毒素有8個抗原決定簇，流感病毒有40多個抗原決定簇。

第二十八頁，共四十一頁，2022年，8月28日一.多克隆抗體病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質，此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體，即針對多種抗原決定簇的抗體。易出現非特異性交叉反應。第二十九頁，共四十一頁，2022年，8月28日二、單克隆抗體單克隆抗體是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的B淋巴細胞克隆產生的。所有制備抗體的細胞都是同一個細胞的拷貝，因此其產生的抗體完全相同。第三十頁，共四十一頁，2022年，8月28日雜交細胞設計方案：

一個B淋巴細胞---只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞---能無限增殖第三十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日單克隆抗體是大規(guī)模細胞培養(yǎng)的產物，而不是直接來自于動物血清。制備單克隆抗體的過程涉及到細胞培養(yǎng)、細胞融合等多種步驟。第三十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日雜交瘤技術產生的3個技術關鍵1.B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的特性：

B淋巴細胞（Blymphocytes）：

接受抗原刺激后，能分泌針對該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。

B淋巴細胞本身是一種終末分化細胞，通常不再進行細胞分裂，存活一段時間后便會死亡---短命細胞第三十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日骨髓瘤細胞（myelomacells）：惡性增殖的轉化細胞，只要營養(yǎng)條件適合可永遠分裂和存活---長命細胞。

經篩選與馴化，現已建立多種骨髓瘤細胞株---沒有抗體分泌物。第三十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日2.細胞融合技術：第三十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日3.雜交瘤細胞的篩選：不能合成

DNA死亡不能合成

DNA死亡第三十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日單克隆抗體的應用1．檢驗醫(yī)學診斷試劑

作為檢驗醫(yī)學實驗室的診斷試劑，單克隆抗體有著特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，并且很大程度上促進了商品化試劑盒的發(fā)展。目前，應用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應用于：病原微生物抗原、抗體的檢測腫瘤抗原的檢測免疫細胞及其亞群的的檢測激素測定細胞因子的測定

第三十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日1)乙肝表面抗原檢測試紙條乙型肝炎是一種廣泛的傳染病。據報道,全世界感染該病的人在兩億以上,我國乙肝表面抗原陽性者占人口的10%左右。該測試