內(nèi)毒素及葡聚糖檢測(cè)

內(nèi)毒素及葡聚糖檢測(cè)第一頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日主要內(nèi)容來(lái)源及結(jié)構(gòu)生物學(xué)活性檢測(cè)的臨床應(yīng)用檢測(cè)方法及參考范圍標(biāo)本采集及影響因素第二頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日

內(nèi)毒素第三頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的生物學(xué)活性發(fā)熱反應(yīng)1激活血管活性物質(zhì)的釋放2激活凝血和纖溶系統(tǒng)3激活補(bǔ)體4直接或間接損害肝臟5激活白三烯、前列腺素及單核巨噬系統(tǒng)6第四頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)特異性多糖核心多糖類脂A外層菌體多糖（O抗原），與細(xì)菌侵襲力有關(guān)。中層同一種屬之間是相同的。內(nèi)層特殊的糖磷脂，起毒性作用，而無(wú)種屬特異性。第五頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素概述

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中的脂多糖（LPS），這些成分只在細(xì)菌死亡裂解后才釋放到菌體外或活菌以發(fā)泡形式將其釋出。第六頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的有益作用增加機(jī)體非特異性免疫力1防御放射性損傷，促進(jìn)粒細(xì)胞生成2增加網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能3抗腫瘤，免疫佐劑作用4第七頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生原因內(nèi)毒素血癥內(nèi)源性外源性腸道內(nèi)毒素的吸收1敗血癥時(shí)血中細(xì)菌的釋放23有效的抗菌治療后，細(xì)菌崩解輸入了含有細(xì)菌的藥物、血液或者體液等。第八頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日各類疾病內(nèi)毒素血癥的發(fā)生率肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、燒傷85%、急性胰腺炎90%、敗血癥70%、急性肝炎37-64%、暴發(fā)性肝炎58-100%、丙肝60%、膽石癥伴急性梗阻性化膿性感染85%、多器官功能衰竭100%。第九頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素檢測(cè)的臨床應(yīng)用在肝膽疾病中的應(yīng)用1在呼吸系統(tǒng)感染中的應(yīng)用2在胰腺疾病中的應(yīng)用3在潰瘍性結(jié)腸炎中的應(yīng)用4在全身性細(xì)菌感染中的應(yīng)用5在不明原因發(fā)熱中的應(yīng)用6第十頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素檢測(cè)在醫(yī)院中的應(yīng)用在醫(yī)院滅菌制劑檢驗(yàn)中應(yīng)用1對(duì)注射器、輸液器等醫(yī)療器械的內(nèi)毒素檢測(cè)2在透析站和血站中的應(yīng)用3在臨床醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用4第十一頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素血癥的臨床癥狀內(nèi)毒素血癥臨床癥狀主要決定于宿主對(duì)內(nèi)毒素的抵抗力。癥狀和體征有：發(fā)熱，白細(xì)胞數(shù)變化，出血傾向，心力衰竭、腎功能減退、肝臟損傷、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，以及休克、血壓下降、組織灌流不足、缺氧及酸中毒等。

▲最嚴(yán)重的后果：致死性感染性休克，多器官功能衰竭，DIC等。病死率極高。第十二頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的檢測(cè)方法

鱟試驗(yàn)是1968年由Levin和Bang建立。其原理是利用鱟的變形細(xì)胞與微量?jī)?nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的現(xiàn)象，作為判斷試劑中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的一種方法。第十三頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的檢測(cè)方法1.凝膠法：鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來(lái)定性檢測(cè)或半定量?jī)?nèi)毒素的方法2.濁度法：利用檢測(cè)鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過(guò)程中的濁度變化而測(cè)定內(nèi)毒素含量3.比色法：利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團(tuán)的多少而測(cè)定內(nèi)毒素含量4.流式細(xì)胞術(shù)：測(cè)內(nèi)毒素的量而不是活性5.化學(xué)發(fā)光測(cè)定法第十四頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素的檢測(cè)原理革蘭陰性菌脂多糖檢測(cè)試劑盒（光度法）檢測(cè)原理：革蘭陰性菌脂多糖能激活酶反應(yīng)主劑中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起凝固蛋白原轉(zhuǎn)變成凝固蛋白從而引起吸光度變化，根據(jù)檢測(cè)其溶液吸光度變化對(duì)革蘭陰性菌脂多糖濃度進(jìn)行測(cè)定。第十五頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日

第十六頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)第十七頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素檢測(cè)的參考值檢測(cè)值﹤10pg/ml,陰性。檢測(cè)值介于10～20pg/ml之間，臨床觀察期，建議動(dòng)態(tài)采血檢測(cè)。檢測(cè)值﹥20pg/ml，陽(yáng)性，建議臨床結(jié)合癥狀進(jìn)行治療。

第十八頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法的局限性只能檢測(cè)革蘭陰性菌脂多糖含量，不能區(qū)分細(xì)菌種屬。

第十九頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)樣本的采集與保存檢測(cè)樣本：血液采集要求：采樣過(guò)程要求無(wú)菌操作，用專用的無(wú)熱原真空采血管（肝素類抗凝）。常規(guī)病人早上用藥治療前空腹采血/取樣（血透患者透析前采血）。樣本保存：樣本采集后應(yīng)在3000轉(zhuǎn)/分進(jìn)行離心，若不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)將血漿轉(zhuǎn)移至無(wú)熱原試管內(nèi)，在-30℃冰箱中冷凍保存，一周內(nèi)使用。特殊標(biāo)本處理：對(duì)一般黃疸、溶血、乳糜血標(biāo)本，稀釋2-5倍后進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于嚴(yán)重的黃疸、溶血、乳糜血標(biāo)本，應(yīng)重新采血。第二十頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日干擾因素1.應(yīng)用某些抗生素如β-酰胺內(nèi)酯類、喹諾酮類等患者；2.一些蛋白：陽(yáng)離子蛋白如溶菌酶、核糖核酸酶A及人免疫球蛋白G均能與內(nèi)毒素形成細(xì)菌內(nèi)毒素--蛋白復(fù)合體，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素有顯著的屏蔽作用，而影響測(cè)定內(nèi)毒素結(jié)果；3.操作環(huán)境及操作過(guò)程中的污染，可能造成假陽(yáng)性。第二十一頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日(1-3)--D-葡聚糖第二十二頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日1-3-β-D-葡聚糖本質(zhì)及特點(diǎn)真菌細(xì)胞壁成分，占50%以上1其他微生物、動(dòng)物及人的細(xì)胞不含該成分2用于侵襲性真菌感染的早期診斷3第二十三頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日(1-3)-β-D-葡聚糖特性1.對(duì)熱極為穩(wěn)定，高壓21℃并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細(xì)胞壁中含量較多，對(duì)G試驗(yàn)靈敏。2.當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來(lái)，從而使血液及其它體液中含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時(shí)，機(jī)體免疫系統(tǒng)可將其清除。3.在淺部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來(lái)，故其在體液中的量不增高。第二十四頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性真菌感染的定義侵襲性真菌感染(invasivefungalinfection,IFI)定義:指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜、肌肉和內(nèi)臟器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性較大。第二十五頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性肺部真菌感染侵襲性真菌感染的發(fā)病率逐年上升,其中又以侵襲性肺部真菌感染最常見,大約占50%～60%。未經(jīng)及時(shí)治療的肺部真菌感染患者的病死率可高達(dá)30%～80%。第二十六頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性肺部真菌感染臨床表現(xiàn)：缺乏特異性,多表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咳痰、咳血、胸悶、呼吸困難等?，F(xiàn)狀：兩高兩低一快高院內(nèi)感染率和病死率，低臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷率，患者病情惡化快。（檢測(cè)方法相對(duì)滯后,早期診斷和治療仍存在困難,副作用小的新型抗真菌藥物價(jià)格昂貴,導(dǎo)致病死率高。）第二十七頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性真菌感染的誘因內(nèi)源性誘因：影響機(jī)體抵抗力的各種疾病，如白血病、癌癥、結(jié)核、肺膿腫、糖尿病、肝臟疾病以及維生素缺乏等。外源性誘因：

▲廣譜抗生素，抗腫瘤藥物和免疫抑制劑；

▲插管等侵襲性治療，骨髓和實(shí)體器官移植；

▲免疫缺陷綜合癥。第二十八頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性真菌感染診斷困難的原因診斷困難的主要原因：臨床表現(xiàn)不典型，易被基礎(chǔ)疾病所掩蓋確診常需侵入性手段獲得組織標(biāo)本，侵入性操作常因患者的病情所限難以實(shí)施真菌檢測(cè)項(xiàng)目開展相對(duì)不足或滯后第二十九頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日第三十頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性真菌感染的特點(diǎn)不產(chǎn)生內(nèi)毒素和外毒素，致病機(jī)理不明；致病力一般較弱，機(jī)體免疫低下時(shí)發(fā)生；感染菌種變化：白色念珠菌感染下降，曲霉菌感染增長(zhǎng)趨勢(shì)上升明顯；早期癥狀無(wú)特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)較晚，死亡率高。第三十一頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日主要可引發(fā)侵襲性真菌感染的疾病呼吸系統(tǒng)疾?。悍窝住⒎卫w維癥感染及寄生蟲?。悍谓Y(jié)核、腹腔內(nèi)膿腫、AIDS循環(huán)系統(tǒng)疾?。耗X出血、腦梗塞、硬膜下血瘤術(shù)后、胸部大動(dòng)脈瘤術(shù)后內(nèi)分泌疾?。禾悄虿⊙杭霸煅鞴偌膊。涸偕系K性貧血、DIC腫瘤類：胃癌，肝癌，肝內(nèi)膽管癌，肺癌，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，惡性淋巴瘤第三十二頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日“G”試驗(yàn)1-3-β-D-葡聚糖可特異性激活鱟變形細(xì)胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故稱G試驗(yàn)。第三十三頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日G試驗(yàn)檢測(cè)評(píng)價(jià)BG值在侵襲性真菌感染臨床表現(xiàn)出現(xiàn)之前就已經(jīng)高于正常值相關(guān)報(bào)道5例確診IFI及3例臨床診斷的IFI患者，發(fā)現(xiàn)BG值升高出現(xiàn)在發(fā)熱、咳嗽、胸痛等癥狀和肺部CT檢查發(fā)現(xiàn)以前。平均早于發(fā)熱5d早于呼吸道癥狀10d第三十四頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日G試驗(yàn)臨床應(yīng)用

1明確診斷（抗真菌藥物治療前）

2治療效果監(jiān)測(cè)（抗真菌藥物治療后）

3連續(xù)2次采血進(jìn)行G試驗(yàn)第三十五頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日侵襲性真菌感染的臨床檢測(cè)方法直接培養(yǎng)真菌法--敏感性低，耗時(shí)長(zhǎng),培養(yǎng)陽(yáng)性率低。培養(yǎng)結(jié)果是定性的，有些標(biāo)本采集困難G試驗(yàn)：通過(guò)檢測(cè)(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判斷是否有真菌感染。耗時(shí)短，靈敏度高，特異性強(qiáng)，定量檢測(cè)可判斷感染嚴(yán)重程度PCR技術(shù)：真菌的抗原、抗體及代謝產(chǎn)物的血清學(xué)檢查和真菌核酸檢測(cè)第三十六頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日真菌1-3-β-D葡聚糖檢測(cè)原理真菌1-3-β-D葡聚糖檢測(cè)試劑盒（光度法）檢測(cè)原理：真菌1-3-β-D葡聚糖能特異性激活反應(yīng)主劑中的G因子、凝血酶原等，發(fā)生酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)從而引起吸光度變化，根據(jù)檢測(cè)其溶液吸光度變化對(duì)真菌1-3-β-D葡聚糖濃度進(jìn)行定量。試劑中添加的兩性電解質(zhì)甘氨酸、氨基糖苷類抗生素及表面活性劑可抑制脂多糖對(duì)B、C因子的激活，對(duì)革蘭陰性菌脂多糖有特異性屏蔽作用。第三十七頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)第三十八頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日真菌1-3-β-D葡聚糖參考值檢測(cè)值﹤60pg/ml,陰性。檢測(cè)值介于60～100pg/ml之間，臨床觀察期，建議動(dòng)態(tài)采血檢測(cè)。檢測(cè)值﹥100pg/ml，陽(yáng)性(深部真菌感染)，建議臨床結(jié)合癥狀進(jìn)行治療。第三十九頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)方法的局限性只能檢測(cè)真菌1-3-β-D葡聚糖的含量，不能區(qū)分真菌種屬，不能檢測(cè)結(jié)合菌和隱球菌。第四十頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日內(nèi)毒素與β-葡聚糖的檢測(cè)比較已知能與鱟試劑發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)有細(xì)菌內(nèi)毒素和真菌1-3-β-D葡聚糖，但它們的反應(yīng)曲線不一樣。內(nèi)毒素反應(yīng)曲線為S型特征曲線，而β-葡聚糖反應(yīng)曲線為經(jīng)過(guò)0點(diǎn)的斜線。第四十一頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日念珠菌顯色培養(yǎng)基的菌落顏色對(duì)于念珠菌血癥,G試驗(yàn)檢測(cè)是首選檢查熱帶念珠菌----灰藍(lán)色白色念珠菌----綠色克柔念珠菌----粉紅色光滑念珠菌----紫紅色第四十二頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日標(biāo)本采集及保存檢測(cè)樣本：血液、肺細(xì)胞灌洗液采集要求：1.采樣過(guò)程要求無(wú)菌操作，用專用的無(wú)熱原真空采血管；2.常規(guī)病人早上用藥治療前空腹采血，血透析患者透析前采血第四十三頁(yè)，共四十六頁(yè)，2022年，8月28日標(biāo)本采集及保存及時(shí)送檢，及時(shí)檢測(cè)：2-3h內(nèi)檢測(cè)不合格標(biāo)本：嚴(yán)重黃