標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB 15193.20-2003是一項(xiàng)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱為《食品安全性評(píng)價(jià)程序和方法 第20部分：TK基因突變?cè)囼?yàn)》。這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了在評(píng)估食品及其原料、食品添加劑、食品相關(guān)產(chǎn)品安全性時(shí)，如何進(jìn)行TK（Thymidine Kinase，胸苷激酶）基因突變?cè)囼?yàn)的具體方法和要求。TK基因突變?cè)囼?yàn)是一種體外遺傳毒性測(cè)試，用于檢測(cè)受試物是否能引起哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA的損傷，進(jìn)而導(dǎo)致基因突變，是評(píng)價(jià)物質(zhì)潛在致癌性的重要手段之一。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容概覽：

  1. 范圍：明確了該標(biāo)準(zhǔn)適用于食品及相關(guān)產(chǎn)品的TK基因突變?cè)囼?yàn)，用以評(píng)估這些物質(zhì)對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的遺傳毒性潛力。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了執(zhí)行該試驗(yàn)所需遵循的其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文件，確保試驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)化和一致性。

  3. 術(shù)語(yǔ)和定義：對(duì)試驗(yàn)中涉及的關(guān)鍵術(shù)語(yǔ)進(jìn)行了明確界定，如TK基因、基因突變、體外試驗(yàn)系統(tǒng)等，以便讀者準(zhǔn)確理解。

  4. 試驗(yàn)原理：簡(jiǎn)述了TK基因突變?cè)囼?yàn)的基本科學(xué)原理，即通過檢測(cè)受試物處理后細(xì)胞中TK基因的突變頻率，來(lái)判斷其是否有誘導(dǎo)基因突變的能力。

  5. 試驗(yàn)材料：詳細(xì)規(guī)定了試驗(yàn)所需的細(xì)胞系、培養(yǎng)基、受試物處理?xiàng)l件及對(duì)照組設(shè)置等，確保實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

  6. 試驗(yàn)方法：

    • 預(yù)試驗(yàn)：確定受試物的最大無(wú)毒作用濃度。
    • 正式試驗(yàn)：包括試驗(yàn)設(shè)計(jì)、細(xì)胞處理、細(xì)胞培養(yǎng)、突變檢出及結(jié)果分析等步驟，具體描述了操作流程和技術(shù)要點(diǎn)。

  7. 結(jié)果判定與評(píng)價(jià)：提供了判定受試物遺傳毒性（陽(yáng)性、陰性）的標(biāo)準(zhǔn)，以及如何根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)的指導(dǎo)原則。

  8. 試驗(yàn)報(bào)告：規(guī)定了試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包含的內(nèi)容，如試驗(yàn)?zāi)康摹⒎椒?、結(jié)果、結(jié)論及必要的討論，確保試驗(yàn)信息的完整傳遞。

注意事項(xiàng)：

  • 試驗(yàn)過程中需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，保證數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性。
  • 結(jié)果解釋需謹(jǐn)慎，考慮試驗(yàn)的局限性和可能的干擾因素。
  • 本標(biāo)準(zhǔn)是食品安全性評(píng)價(jià)體系的一部分，與其他毒性測(cè)試結(jié)合使用，共同評(píng)估物質(zhì)的安全性。

該標(biāo)準(zhǔn)為科研人員、食品安全監(jiān)管機(jī)構(gòu)及企業(yè)提供了一套統(tǒng)一、科學(xué)的方法，用以評(píng)估食品及相關(guān)產(chǎn)品中可能存在的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)，是保障公眾健康安全的重要技術(shù)支撐。


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  • 被代替
  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替
  • 2003-09-24 頒布
  • 2004-05-01 實(shí)施
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ICS07.100C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.20—2003TK基因突變?cè)囼?yàn)TKgenemutationtest2003-09-24發(fā)布2004-05-01實(shí)施中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB15193.20—2003本標(biāo)準(zhǔn)全文強(qiáng)制。本標(biāo)準(zhǔn)參考美國(guó)FDA營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑與食品安全中心食品添加劑安全辦公室發(fā)布的“食品成分安全評(píng)價(jià)毒理學(xué)原則2000年版紅皮書(2001年9月發(fā)布)：IV.C.1.c.小鼠淋巴瘤胸腺喀啶激酶基因突變?cè)囼?yàn)(IV.C.1.c,MouselymphomaThymidineKinaseGeneMutationAssay)”。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口.本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張立實(shí)、張建清、帥培強(qiáng)、王怡凈。本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。

GB15193.20—2003TK基因突變?cè)囼?yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了體外哺乳類細(xì)胞TK位點(diǎn)基因突變?cè)囼?yàn)的基本技術(shù)要求與方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)生物和物理因素的遺傳毒性，檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑(含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑)、食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設(shè)備、洗滌劑、消毒劑、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等。2原理TK基因突變?cè)囼?yàn)的檢測(cè)終點(diǎn)是胸苷激酶(thymidinekinase,TK)基因的突變。在人類，TK基因定位于17號(hào)染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端;在小鼠則定位于11號(hào)染色體。故TK基因的突變屬于常染色體基因TK基因的產(chǎn)物胸苷激酶在體內(nèi)催化從脫氧胸苷（TdR)生成胸苔酸（TMP)的反應(yīng)。在正常情況下,此反應(yīng)并非生命所必需，原因是體內(nèi)的「MP主要來(lái)自于脫氧尿喀啶核苷酸(dUMP).即由胸苷酸合成酶催化的dUMP甲基化反應(yīng)生成TMP。但如在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入胸苷類似物（如三氟胸苷,即TFT一trifluorothymidine),則TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸,進(jìn)而摻入DNA,造成致死性突變，故細(xì)胞不能存活。若TK基因發(fā)生突變,導(dǎo)致胸苷激酶缺陷,則TFT不能磷酸化，亦不能摻入DNA,故細(xì)胞在含有TFT的培養(yǎng)基中能夠生長(zhǎng)，即表現(xiàn)出對(duì)TFT的抗性。根據(jù)突變集落形成數(shù),計(jì)算突變頻率，以判定受試物的致突變性。3試劑與材料3.1細(xì)胞：15178Y「k+-3.7.2C小鼠淋巴瘤細(xì)胞。為清除自發(fā)突變的k--基因型細(xì)胞,在正式實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)使用含3g/mL胸甘,5g/mL次黃驃嶺,0.1Pg/mL氮甲碟嶺和7.5g/ml甘氮酸的THMG培養(yǎng)基中處理24h,離心、洗滌后在不含氨甲碟嶺的THMG培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天.3.2試劑：PBS磷酸鹽緩沖液，三氟胸香（trifluorothymidine）,次黃原吟（hypoxanthine）.甘氨酸（gly-cine），氨甲碟嶺(methotrexate),胸腺喀啶核苷(thymidine),陽(yáng)性對(duì)照物(MMS,MMC,環(huán)磷酰胺等)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)-般應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞毒性預(yù)試驗(yàn)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，在相對(duì)存活率(relativesurvival,RS)為陰性對(duì)照組的20%～80%范圍內(nèi)設(shè)3個(gè)～4個(gè)劑量(濃度)水平。每次試驗(yàn)均需設(shè)陰性(雙蒸水)對(duì)照.通常亦需設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照通常使用MMS、EMS、MMC、CP(環(huán)磷酰胺)等。如使用非水溶劑,則亦需設(shè)溶劑對(duì)照。5操作步驃5.1培養(yǎng)液和培養(yǎng)條件：含10%馬血清和適量抗菌素的RPMI1640培養(yǎng)液(96孔板培養(yǎng)時(shí)使用含20%馬血清的RPMI1640培養(yǎng)液).5%二氧化碳、37℃、飽和濕度條件下作常規(guī)懸浮培養(yǎng)。5.2處理:取生長(zhǎng)良好的細(xì)胞.調(diào)整密度為5×10°/mL,按1%體積加入受試物.3

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