組織培養(yǎng)第十章常見植物脫毒與快繁

第十章常見植物脫毒與快繁技術(shù)

宜職院08.9

目的與要求了解農(nóng)作物、果樹、花卉、藥用植物的脫毒和快繁的生產(chǎn)意義與基本技術(shù)，根據(jù)地方特點(diǎn)和組培技術(shù)現(xiàn)狀，例舉部分植物進(jìn)行講授，并結(jié)合學(xué)生查閱資料共同探討。具有農(nóng)作物、果樹、花卉、藥用植物快繁基本技術(shù)，具備馬鈴薯、草莓等植脫毒技術(shù)，進(jìn)行微型薯生產(chǎn)基本知能，有利用圖書及網(wǎng)絡(luò)資源收集相關(guān)資料，了解相關(guān)行業(yè)信息的能力，并具備一定交流探討能力。

第一節(jié)農(nóng)作物的脫毒與快繁

植物組織培養(yǎng)技術(shù)已廣泛運(yùn)用于農(nóng)作物育種和良種繁育，尤其是許多無(wú)性繁殖類農(nóng)作物脫毒及良種快繁，對(duì)提高農(nóng)作物生產(chǎn)的產(chǎn)量和品質(zhì)發(fā)揮了極其重要的作用。一、馬鈴薯的脫毒和快繁

（一）莖尖培養(yǎng)脫毒

1、取材生產(chǎn)大田頂芽，或塊莖，預(yù)培養(yǎng)抽生的枝條污染較少。供試材料存在病毒可結(jié)合熱處理脫毒。

2、消毒自來(lái)水沖洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，無(wú)菌水沖洗2～3次。

3、接種解剖鏡下，解剖刀切取0.1～0.3mm帶有1～2個(gè)葉原基的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。

4、培養(yǎng)條件MS、Miller，25±2℃，1000lx，4周后增至2000～3000lx，光照16h。

5、病毒鑒定目測(cè)法和指示植物鑒定法。（二）微型薯生產(chǎn)技術(shù)

由試管苗生產(chǎn)的重1～30g的微小馬鈴薯被稱為微型薯。不帶病毒，增產(chǎn)效果一般在40%以上。

1、試管生產(chǎn)微型薯一般只有1～5g。用組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)微型薯分以下兩個(gè)步驟：

（1）單莖段擴(kuò)大繁殖

（2）微型薯的誘導(dǎo)。

2、溫室多層架盤工廠化生產(chǎn)

3、低網(wǎng)畦生產(chǎn)二、甘薯的脫毒與快繁（一）莖尖培養(yǎng)1、莖尖培養(yǎng)脫毒取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)母株枝條，切成帶1芽小段。自來(lái)水流水沖洗，70%酒精10s，0.1%的升汞10min，無(wú)菌水4～5次，或2%次氯酸鈉5min，無(wú)菌水3～4次。2、莖尖剝離和培養(yǎng)解剖鏡下剝?nèi)パ可陷^大幼葉，切取0.3～0.5mm含1～2個(gè)葉原基的莖尖分生組織，迅速接種到制備好的培養(yǎng)基上。3、病毒檢測(cè)

目測(cè)法和指示植物鑒定法。

（二）脫毒苗擴(kuò)繁和種薯的生產(chǎn)

通過(guò)病毒檢測(cè)的脫毒苗先在試管內(nèi)進(jìn)行切段快繁。30d左右長(zhǎng)成有6～8片展開葉的試管苗。待試管苗繁殖到一定數(shù)量后，即可在防蟲條件下于無(wú)菌基質(zhì)中進(jìn)行栽培繁殖。所結(jié)小薯即為原原種薯。以原原種（苗）為種植材料，在防蟲條件下的無(wú)病毒土壤上培育出的薯塊即為原種。以原種苗在大田條件下生產(chǎn)所結(jié)薯塊即為生產(chǎn)用種薯（良種）。

紅薯原原種種煉苗第二節(jié)果果樹脫毒毒快繁利用組織培培養(yǎng)方法繁繁殖果樹植植株具有占占地面積小小，繁殖周周期短，全全年都能進(jìn)進(jìn)行繁殖，，繁殖系數(shù)數(shù)高等特點(diǎn)點(diǎn)。還可以以消除果樹樹的某些病病毒病，適適應(yīng)果樹向向品種更新新快、矮化化密植以及及無(wú)病毒栽栽培方向發(fā)發(fā)展的需要要。一、草莓（一）草莓莓離體快繁繁技術(shù)1、外植體體6～7月份份匍匐莖15～20cm長(zhǎng)時(shí)時(shí)取材。2、培養(yǎng)基基初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA0.2mg/L增殖MS+6-BA0.5～～1.0mg/L。。3、生根和和馴化1/2MS+IBA0.2～～1.0mg/L根2～3cm時(shí)煉苗苗，一周后后發(fā)新根，，四周后可可移栽。（二）花藥藥培養(yǎng)脫毒毒1、花藥培培養(yǎng)脫毒技技術(shù)春季取單核核期花蕾（（直徑約4mm），，4～5℃℃低溫處理理24h。。浸入70%酒精30s，漂漂白粉或0.1%氯氯化汞10～15min。剝剝?nèi)』ㄋ幏欧旁谂囵B(yǎng)基基上。誘導(dǎo)培養(yǎng)基基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L，繼代培養(yǎng)基基為MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L2、脫毒苗苗的檢測(cè)指示植物小小葉嫁接鑒鑒定法和電電子顯微鏡鏡鑒定法。。草莓小葉嫁嫁接法二、柑橘1、莖尖微微芽嫁接砧木種子45℃溫水水浸泡5min—55～56℃熱水處處理50min—取取出吸干——消毒—?jiǎng)儎內(nèi)シN皮——種子接種種于MS培培養(yǎng)基—27±1℃℃暗培養(yǎng)——2周后萌萌發(fā)芽苗可可作砧木。。接穗穗材材料料強(qiáng)強(qiáng)健健新新梢梢——熱熱空空氣氣處處理理45min(50℃℃)——取取lcm長(zhǎng)長(zhǎng)芽芽條條——消消毒毒處處理理——切切取取0.14～～0.18mm微微莖莖尖尖。。砧木木苗苗切切去去長(zhǎng)長(zhǎng)根根和和子子葉葉，，上上胚胚軸軸留留1～～1.5cm切切除除頂頂部部，，垂垂直直于于莖莖，，切切開開一一個(gè)個(gè)倒倒T字字形形切切口口，，將將微微莖莖尖尖放放置置于于砧砧木木切切口口內(nèi)內(nèi)，，莖莖尖尖底底部部和和砧砧木木切切口口形形成成層層緊緊密密貼貼合合。。嫁接接苗苗轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)植植于于新新鮮鮮培培養(yǎng)養(yǎng)基基上上，，27±±1℃℃、、16h光光照照，，2～～4周周后后抽抽生生新新芽芽，，成成活活率率可可達(dá)達(dá)20%～～50%。。5～～8周周可可移移植植。。柑橘橘花花藥藥培培養(yǎng)養(yǎng)示示意意圖圖2、、無(wú)無(wú)病病毒毒苗苗的的繁繁殖殖經(jīng)無(wú)無(wú)病病毒毒苗苗鑒鑒定定后后選選出出無(wú)無(wú)病病毒毒良良種種苗苗木木，，可可建建立立原原種種母母本本園園。。在在隔隔離離區(qū)區(qū)，，按按無(wú)無(wú)病病苗苗的的栽栽培培要要求求建建成成無(wú)無(wú)病病良良種種母母本本園園，，供供繁繁殖殖無(wú)無(wú)病病苗苗木木采采穗穗用用。。三、、香香蕉蕉（一一））花花序序軸軸切切片片培培養(yǎng)養(yǎng)1、、花花序序軸軸切切片片香蕉蕉果果穗穗已已完完全全抽抽出出時(shí)時(shí)采采上上部部末末結(jié)結(jié)實(shí)實(shí)花花序序，，無(wú)無(wú)菌菌下下剝剝?nèi)∪“トプ幼臃糠俊?。取取頂頂端?0～～15cm長(zhǎng)長(zhǎng)的的花花序序軸軸段段，，滅滅菌菌后后橫橫切切成成2～～3cm厚厚的的薄薄片片，，再再縱縱切切成成數(shù)數(shù)片片。。2、、培培養(yǎng)養(yǎng)過(guò)過(guò)程程常用用MS培培養(yǎng)養(yǎng)基基，，也也可可用用SM或或改改良良MS，，繼繼代代也也可可用用Knudson培培養(yǎng)養(yǎng)基基。。香蕉雄花序外外植體誘幼苗苗過(guò)程（二）影響試試管育苗的關(guān)關(guān)鍵技術(shù)芽芽的反反復(fù)增殖是香香蕉試管育苗苗的技術(shù)關(guān)鍵鍵。

芽的增增殖效果如何何，較重要的的衡量指標(biāo)是是增殖率和代代期（—次繼繼代培養(yǎng)的時(shí)時(shí)間），均與與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑劑關(guān)系最為密密切。細(xì)胞分分裂素以6-BA3～～4mg／L為宜，增殖殖率可達(dá)到4以上，代期期為3～4周周，因而增殖殖效率高。第三節(jié)蔬蔬菜組織培養(yǎng)養(yǎng)一、番茄1、花藥培養(yǎng)養(yǎng)

⑴取花藥藥3～7mm長(zhǎng)、單核中中期的花蕾。。

⑵將花蕾蕾用0.1‰吐溫40溶液液浸泡5min—70％％酒精15s—3％的漂漂白粉10min—無(wú)無(wú)菌水沖洗——接種

⑶從從花蕾中取出出花藥，接種種在DBMII＋2.0mg/LNAA＋1.0mg/LKIN的的培養(yǎng)基上，，27℃、24h光照后后黑暗下培養(yǎng)養(yǎng)。2、葉培養(yǎng)⑴⑴取無(wú)菌幼幼嫩葉片，切切成5×5mm的小塊。。

⑵MS＋＋0.2mg/LIAA＋2mg/LBA27℃、光光。

⑶25天后，愈傷傷組織分化芽芽。一個(gè)月后后每切塊長(zhǎng)出出2～5個(gè)芽芽。

⑷芽轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)到無(wú)激素的的MS培養(yǎng)基基上，5～10d后形成成根。3、胚培養(yǎng)⑴外植體的制制備授粉后后30～40d果實(shí)—95%乙醇消消毒—5%NaCl中5min—無(wú)無(wú)菌蒸餾水充充分淋洗除去去種子上的膠膠狀復(fù)被。⑵培養(yǎng)基MS附加硫胺胺素3.0um。pH6.0。附加加2.4－D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用用做愈傷組織織啟動(dòng)和保存存培養(yǎng)基。⑶培養(yǎng)條條件愈愈傷組織織啟動(dòng)和和保存暗暗培，27℃。。再生生生根20～30℃、16h/d，熒熒光下進(jìn)進(jìn)行二、甘藍(lán)藍(lán)1、取材材和處理理剝?nèi)ト~球球的葉片片，留下下中心柱柱和腋芽芽，—70%酒酒精1-2分鐘鐘—0.2%升升汞10-15分鐘——?jiǎng)冸x腋腋芽—接接種在繁繁芽培養(yǎng)養(yǎng)基上（））2、培養(yǎng)養(yǎng)光照1000-3000lx,12-13h/d,20±±2℃，，濕度50%-60%。3、擴(kuò)大大繁殖重復(fù)進(jìn)行行擴(kuò)繁，，直到達(dá)達(dá)到要求求繁殖數(shù)數(shù)量為止止。第四節(jié)觀觀賞賞植物的的組織培培養(yǎng)蘭花蘭花系蘭蘭科植物物，在自自然條件件下主要要靠分株株繁殖，，繁殖率率一年只只有幾倍倍，所以以無(wú)法大大量繁殖殖生產(chǎn)，，而且由由于長(zhǎng)期期進(jìn)行無(wú)無(wú)性繁殖殖，帶病病毒株增增多，逐逐漸使種種性降低低，影響響生長(zhǎng)。。1、取材材和處理理切取lOcm長(zhǎng)長(zhǎng)生長(zhǎng)健健壯的莖莖尖，去去苞葉洗洗凈—75％酒酒精—5％的漂漂白粉10min—無(wú)無(wú)菌水沖沖洗—接接種。在蘭花葉葉片組織織培養(yǎng)中中，應(yīng)選選擇帶有有嫩葉的的花梗，，以后的的處理方方法同莖莖尖。2、原球球莖的誘誘導(dǎo)培養(yǎng)養(yǎng)莖尖生長(zhǎng)長(zhǎng)點(diǎn)或葉葉片接種種在原球球莖誘導(dǎo)導(dǎo)培養(yǎng)基基上。因因蘭花種種類而異異，可以以用固體體培養(yǎng)基基或液體體培養(yǎng)基基(液體體培養(yǎng)基基中應(yīng)加加比較多多的蔗糖糖)。凡凡原球莖莖切口處處不變褐褐或變褐褐物質(zhì)排排出量較較少的種種類，可可用固體體培養(yǎng)基基，而易易變褐的的種類，，最好用用液體培培養(yǎng)基，，誘導(dǎo)溫溫度應(yīng)于于23℃℃，光照照強(qiáng)度1500-20001x。。原球莖的的增殖3、苗的的分化培培養(yǎng)蘭科植物物與其他他草本花花卉不同同，它不不易受生生長(zhǎng)調(diào)節(jié)節(jié)物質(zhì)的的影響，，一般是是將原球球莖轉(zhuǎn)入入離子濃濃度較低低的培養(yǎng)養(yǎng)基中，，加入一一些如椰椰子汁等等天然提提取物質(zhì)質(zhì)，效果果會(huì)更好好，原球球莖很快快再生成成植株。。lcm高高的幼苗苗轉(zhuǎn)移到到壯苗培培養(yǎng)基上上培養(yǎng)3～6個(gè)個(gè)月，使使其長(zhǎng)3～4片片葉、3～4條條根、3～10cm高高，可移移栽在泥泥炭和蛭蛭石中，，保濕弱弱光施肥肥。原球莖莖再分分化蝴蝶蘭蘭第五節(jié)節(jié)藥藥用用植物物離體體培養(yǎng)養(yǎng)蘆薈蘆薈不不能自自花授授粉結(jié)結(jié)實(shí)，，因此此，用用種子子繁殖殖非常常困難難。目目前的的繁殖殖方法法主要要是分分株和和分蘗蘗，但但難以以快速速、大大量地地繁殖殖種苗苗，這這也是是當(dāng)前前蘆薈薈種苗苗昂貴貴的重重要原原因之之一。。（一））材料料和培培養(yǎng)基基取取l0-l5cm高的的蘆薈薈幼苗苗誘誘導(dǎo)培培養(yǎng)基基為MS+(1-6mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分分化化培養(yǎng)養(yǎng)基為為MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA生生根培培養(yǎng)基基為MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333（二）繁繁殖方法法

1、、愈傷組組織培養(yǎng)養(yǎng)莖莖尖尖部分——75%乙醇30-60s——升汞5-l0min—無(wú)菌菌水沖洗洗數(shù)次——解剖刀刀取出組組織切塊塊—接種種培培養(yǎng)養(yǎng)條件:光照10-12h，1000一一2000Lx，(25士士)2℃℃。15-25d后，，可膨大大成愈傷傷組織，，1周后后，就可可將愈傷傷組織轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)管進(jìn)行行繼代培培養(yǎng)或分分化培養(yǎng)養(yǎng)。2、繼代代、分化化培養(yǎng)同同誘導(dǎo)3、生生根培養(yǎng)養(yǎng)培培養(yǎng)養(yǎng)條件同同分化，，半個(gè)月月后即可可生根。。4、、煉苗清清水噴濕濕，在15-25℃、、濕度60%-80%的條條件下煉煉苗24h，也也可視情情況縮短短為l2h。5、移移栽將將幼幼苗移栽栽入由蛭蛭石組成成的馴化化苗圃中中馴化，，定期噴噴施馴化化培養(yǎng)液液和清水水，15-20d后，，即可移移栽。第六節(jié)樹樹木木的離體體培養(yǎng)銀杏是園林綠綠化的珍珍貴樹種種，亦有有較高的的藥用價(jià)價(jià)值，以以葉及種種皮入藥藥，它的的葉的制制劑能顯顯著擴(kuò)張張腦血管管，可治治療腦血血栓、冠冠心病、、心肌梗梗塞及大大動(dòng)脈炎炎等。種種仁、有有小毒、、性平、、有斂肺肺、定喘喘等功能能。因此此可說(shuō)全全身都是是寶。但但常規(guī)繁繁殖較難難，因此此組織培培養(yǎng)有很很大應(yīng)用用價(jià)值。。胚培養(yǎng)（一）取取材：選選擇生長(zhǎng)長(zhǎng)飽滿的的銀杏種種子。（二）操操作：1、升汞汞進(jìn)行表表面消毒毒，無(wú)菌菌條件下下剝除外外皮和胚胚乳。接接種在MS培培養(yǎng)基基上。培培養(yǎng)條件件：光照照1500LX，，溫度25度。。2、愈傷傷組織的的誘導(dǎo)：：1/2MS+IBA濃度梯梯度（1、3、、5、7、10PPM）誘導(dǎo)導(dǎo)愈傷組組織。將將培養(yǎng)3天后的的銀杏胚胚接種在在此培養(yǎng)養(yǎng)基上，，誘導(dǎo)出出大量的的愈傷組組織。3、愈傷傷組織繼繼代培養(yǎng)養(yǎng)：MS+1.0mg/LNAA+0.1mg/LKT，24—26℃，，24h光照培培養(yǎng)。20天繼繼代一次次。4、生根根培養(yǎng)：：目前有人人用根太太陽(yáng)（生生根劑））0.5PPm+1/2MS培養(yǎng)基基（三）擴(kuò)擴(kuò)大繁殖殖和煉苗苗移栽按按常規(guī)方方法即可可思考1、說(shuō)明明馬鈴薯薯微型薯薯的生產(chǎn)產(chǎn)技術(shù)2、查閱閱資料，，了解我我國(guó)脫毒毒種苗生生產(chǎn)現(xiàn)狀狀3、查閱閱資料，，了解我我國(guó)蘭花花組培生生產(chǎn)特點(diǎn)點(diǎn)4、查閱閱資料，，了解我我國(guó)藥用用植物組組培技術(shù)術(shù)情況5、查閱閱資料，，了解我我國(guó)林木木組培生生產(chǎn)狀況況9、靜夜四無(wú)無(wú)鄰，荒居居舊業(yè)貧。。。1月-231月-23Sunday,January1,202310、雨中黃黃葉樹，，燈下白白頭人。。。13:38:2313:38:2313:381/1/20231:38:23PM11、以我獨(dú)沈久久，愧君相見見頻。。1月-2313:38:2313:38Jan-2301-Jan-2312、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。13:38:2313:38:2313:38Sunday,January1,202313、乍見翻疑疑夢(mèng)，相悲悲各問(wèn)年。。。1月-2314、他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見青山。。19一月20237:39:57上午07:39:571月-2315、比不了得就不比，得不到的就不要。。。一月237:39上午1月-2307:39January19,202316、行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。。2023/1/197:39:5707:39:5719January202317、做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。。7:39:57上午7:39上午07:39:571月-239、沒(méi)有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。1月-231月-23Thursday,January19,202310、很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒(méi)有。。07:39:5707:39:5707:391/19/20237:39:57AM11、成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。。1月-2307:39:5707:39Jan-2319-Jan-2312、世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無(wú)限完美。。07:39:5707:39:5707:39Thursday,January19,202313、不知香積寺，數(shù)里入云峰。。1月-231月-2307:39:5707:39:57January19,202314、意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。19一月20237:39:57上午07:39:571月-2315、楚塞三湘接，荊門九派通。。。一月237:39上午1月-2307:39January1