【課件】2023屆高三生物一輪復(fù)習(xí)課件：細(xì)胞工程

1.概念：細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等多學(xué)科的原理和方法，通過細(xì)胞器、細(xì)胞或組織水平上的操作，有目的地獲得特定的細(xì)胞、組織、器官、個(gè)體或其產(chǎn)品的一門綜合性的生物工程。第2章

細(xì)胞工程試管苗雜種植株細(xì)胞、細(xì)胞產(chǎn)物雜交細(xì)胞克隆動(dòng)物試管動(dòng)物一、細(xì)胞的全能性1.概念？P34

2.細(xì)胞具有全能性的原因？3.體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)出全能性，而是分化成不同組織器官的原因？4.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件？二、植物組織培養(yǎng)1.概念？2.原理？

3.過程？4.理解下列概念：P35

外植體、脫分化、再分化、愈傷組織三、植物體細(xì)胞雜交1.概念？2.原理？

3.過程？

①去壁方法？

②人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法？4.意義（優(yōu)點(diǎn)）？P38

2.1植物細(xì)胞工程

核心背誦每個(gè)細(xì)胞具有該物種個(gè)體發(fā)育所需的全套遺傳信息在特定時(shí)間和空間條件下，基因的選擇性表達(dá)（1）離體（2）培養(yǎng)在培養(yǎng)基上（3）適宜的培養(yǎng)條件P35概念中標(biāo)注植物細(xì)胞的全能性打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種①去壁，獲得原生質(zhì)體→②人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，獲得雜種細(xì)胞→③植物組織培養(yǎng)獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性纖維素酶、果膠酶物理法—電融合法、離心法；

化學(xué)法：PEG融合法、高Ca2+—高PH融合法全能性的大??？1.概念

2.原理（理論基礎(chǔ)、根本原因）：3.過程？理解：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織注意：植物組織培養(yǎng)的核心4.生殖方式？無性生殖

5.細(xì)胞分裂方式？有絲分裂6.實(shí)驗(yàn)步驟？①取材部位？原因？②接種時(shí)注意外植體的方向③脫分化過程避光處理的原因?再分化需光原因?④培養(yǎng)基中蔗糖的作用？P116⑤在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，為什么要強(qiáng)調(diào)所用器械的滅菌和實(shí)驗(yàn)人員的無菌操作？一、植物組織培養(yǎng)有光可抑制愈傷組織的形成幼嫩部分細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，分化程度低，易誘導(dǎo)形成愈傷組織。脫分化和再分化植物細(xì)胞的全能性芽中葉綠素的形成需要光；有利于進(jìn)行光合作用1.制備外植體（消毒＋制備）→2.接種→3.脫分化培養(yǎng)→4.再分化培養(yǎng)→5移栽防止雜菌污染，因?yàn)殡s菌生長(zhǎng)快，會(huì)和培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。雜菌生長(zhǎng)過程中會(huì)產(chǎn)生有害的物質(zhì)，導(dǎo)致培養(yǎng)物迅速死亡。提供營(yíng)養(yǎng)、調(diào)節(jié)滲透壓1.概念：2.原理：3.過程：①去壁的方法②人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法、原理？③融合后的細(xì)胞一定是雜種細(xì)胞嗎？④融合完成的標(biāo)志⑤融合后的原生質(zhì)體在形成雜種細(xì)胞的過程中，活動(dòng)旺盛的細(xì)胞器4.變異類型？

生殖方式？

雜種植株的育性？5.意義（優(yōu)點(diǎn)）6.問題（缺點(diǎn)）：不能按照人的意愿表達(dá)兩親本的性狀。二、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)第一步：去壁，獲得原生質(zhì)體第二步：人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，獲得雜種細(xì)胞第三步：植物組織培養(yǎng)獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性不一定，需要篩選纖維素酶、果膠酶物理法—電融合法、離心法；化學(xué)法：PEG融合法、高Ca2+—高PH融合法高爾基體、線粒體打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁

染色體數(shù)目變異二倍體、四倍體通過體細(xì)胞雜交獲得的是異源六倍體（直接相加）

可育無性生殖P38課后題原因：生物體內(nèi)基因的表達(dá)不是孤立的。雜種植株細(xì)胞內(nèi)兩個(gè)物種的基因表達(dá)相互干擾，不能有序表達(dá)。

對(duì)比復(fù)習(xí)：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：2.原理：3.融合后形成的雜交細(xì)胞有什么特點(diǎn)？4.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：5.什么是病毒的滅活？6.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理？7.細(xì)胞融合技術(shù)的意義8.應(yīng)用形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息意義：突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能應(yīng)用：最重要的應(yīng)用是制備單克隆抗體使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)細(xì)胞膜的流動(dòng)性PEG融合法，電融合法，滅活病毒誘導(dǎo)法滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞相互凝聚，細(xì)胞膜是哪個(gè)的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新分布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理用_____________和_________去壁后，誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合用____________使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)融合的方法

結(jié)果雜種植株

雜交細(xì)胞用途培育新品種制備單克隆抗體意義打破

生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種。P38突破_________________，使__________成為可能。細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶物理法：電融合法、離心法化學(xué)法：PEG融合法、

高Ca2+-高PH融合法物理法：電融合法化學(xué)法：PEG融合法生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法遠(yuǎn)緣雜交有性雜交局限比較：植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合（一）植物繁殖新途徑（二）作物新品種的培育（三）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)——用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來獲得次生代謝產(chǎn)物1.單倍體育種（1）原理？（2）過程？（3)優(yōu)點(diǎn)？2.突變體的利用——對(duì)愈傷組織進(jìn)行誘變處理植物細(xì)胞工程的應(yīng)用P39-41回扣課本1.快速繁殖（微型繁殖）：優(yōu)點(diǎn)：①高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。

②無性繁殖，保持優(yōu)良品種的遺傳特性2.作物脫毒：①選材：植物頂端分生區(qū)附近（如莖尖）

②原因：病毒極少，甚至無病毒1.什么是次生代謝物？2.技術(shù)：植物細(xì)胞培養(yǎng)概念？3.只培養(yǎng)到愈傷組織階段，液體培養(yǎng)基細(xì)胞工程：概念？（不背）一、細(xì)胞的全能性1.概念？P342.細(xì)胞具有全能性的原因？3.體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)出全能性，而是分化成為不同組織器官的原因？4.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件？P35二、植物組織培養(yǎng)1.概念？（不背）2.原理？

3.過程？理解概念：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織4.

生殖類型？

5.細(xì)胞分裂方式？6.實(shí)驗(yàn)步驟？①取材部位？原因？

②脫分化過程避光的原因？

③再分化需光原因？④培養(yǎng)基中蔗糖的作用？⑤在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，為什么要強(qiáng)調(diào)所用器械的滅菌和實(shí)驗(yàn)人員的無菌操作？三、植物體細(xì)胞雜交1.概念？（不背）

2.原理？

3.過程？

①去壁方法

？②人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法、原理？

③融合后的細(xì)胞一定是雜種細(xì)胞嗎？

④融合完成的標(biāo)志4.變異類型？生殖方式？雜種植株的育性？5.意義（優(yōu)點(diǎn)）？

6.問題（缺點(diǎn)）及原因？四、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用？達(dá)標(biāo)驗(yàn)收——植物細(xì)胞工程1.概念：2.原理：3.融合后形成的雜交細(xì)胞有什么特點(diǎn)？4.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：5.什么是病毒的滅活？6.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理？7.細(xì)胞融合技術(shù)的意義達(dá)標(biāo)驗(yàn)收：

二、動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞工程核心背誦內(nèi)容動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)P431.原理？2.條件？

注意：①合成培養(yǎng)基中為何需要加入血清等一些天然成分？②培養(yǎng)液定期更換的目的？

③所需氣體環(huán)境的組成？④O2、CO2的作用？3.過程？

注意：①取材？原因？②如何分散成單個(gè)細(xì)胞？③分散成單個(gè)細(xì)胞的原因？④細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后，分裂受阻的原因？⑤概念：接觸抑制？原代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)？⑥怎樣進(jìn)行傳代培養(yǎng)？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)P481.原理？2.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法？（比較：誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法？P37）3.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義？應(yīng)用——單克隆抗體的制備P491.用到的技術(shù)及原理？2.具體過程？注意：①注射特定抗原的目的？②將哪兩種細(xì)胞誘導(dǎo)融合？誘導(dǎo)融合后培養(yǎng)液中細(xì)胞類型（只考慮兩兩融合）？③第一次篩選和第二次篩選的目的？方法？④雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？⑤培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法？

⑥單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)？動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)P521.原理？2.生殖方式？3.分類？4.動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植的原因？5.過程？注意：①整個(gè)體細(xì)胞核移植過程用到了哪些技術(shù)?②受體細(xì)胞選擇MII期卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞的原因?去核方法?去核時(shí)期？去核去除的是什么？受體細(xì)胞為何要去核?③注入卵母細(xì)胞的是供體細(xì)胞還是其細(xì)胞核?為什么?④促融的方法?激活重構(gòu)胚的方法?激活的目的?⑤克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?為什么?（克隆動(dòng)物性狀與細(xì)胞核供體動(dòng)物不完全相同原因？）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

——?jiǎng)游锛?xì)胞工程的基礎(chǔ)1.概念：2.原理：3.條件：4.過程：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的條件下，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。細(xì)胞增殖（只分裂，不分化；不能體現(xiàn)全能性）一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（1）營(yíng)養(yǎng)：糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、血清等

①合成培養(yǎng)基：將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制的培養(yǎng)基。（動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)常用培養(yǎng)液）

②為何需要加入血清等一些天然成分？——

（血清中含有多種未知的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其他活性物質(zhì)，補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)P44補(bǔ)充）（2）無菌、無毒的環(huán)境：

無菌：①培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理。

②在無菌環(huán)境下操作。

無毒：培養(yǎng)液定期更換。（目的:清除代謝物,防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。）（3）適宜的溫度、PH和滲透壓：36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。（4）適宜的氣體環(huán)境：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。①O2作用:是細(xì)胞代謝必需的。

②CO2的主要作用:是維持培養(yǎng)液的pH。③進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,并置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：人造皮膚的構(gòu)建、有毒物質(zhì)檢測(cè)。。。1.取材？原因？2.如何分散？3.分散成單個(gè)細(xì)胞的原因？4.P44胃蛋白酶行嗎？5.用培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液→液體培養(yǎng)基6.體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞的分類？7.細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后，分裂受阻的原因？8.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（生長(zhǎng)增殖）的特點(diǎn)？9.概念：細(xì)胞貼壁、接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)10.怎樣進(jìn)行傳代培養(yǎng)？11.區(qū)分：胰蛋白酶兩次處理的目的？4.過程：P44-45用機(jī)械的方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等，將組織分散成單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，分化程度低胃蛋白酶的適宜pH約為2，多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，在此環(huán)境中胃蛋白酶會(huì)失活懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞分裂受阻的原因：細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等貼壁細(xì)胞分裂受阻的原因：①細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等

②發(fā)生接觸抑制只分裂不分化、細(xì)胞貼壁、接觸抑制原代培養(yǎng)——分瓶前的初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)——分瓶后的培養(yǎng)①懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞：直接用離心法收集②貼壁細(xì)胞：重新用胰蛋白酶等處理，分散成單個(gè)細(xì)胞，再用離心法收集動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物組織使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，有利于進(jìn)行物質(zhì)交換①懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞：懸浮在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)增殖②大多數(shù)為貼壁細(xì)胞：貼附于某些基質(zhì)表面生長(zhǎng)增殖，

往往貼附在培養(yǎng)瓶瓶壁上將組織或貼滿瓶壁的細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞原理結(jié)果培養(yǎng)基的狀態(tài)培養(yǎng)基的特有成分植物組織培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

二、植物組織培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較整理在P45-T2產(chǎn)生新植株、細(xì)胞產(chǎn)物植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖產(chǎn)生細(xì)胞群、細(xì)胞產(chǎn)物固體液體植物激素動(dòng)物血清血漿相同點(diǎn)：①都只進(jìn)行有絲分裂②均需無菌操作③均需需要適宜的溫度、PH等條件④都需要合成培養(yǎng)基1.干細(xì)胞的分類和分布2.功能：

有自我更新能力和分化潛能3.應(yīng)用：思考：1.用成纖維細(xì)胞制備iPS細(xì)胞的方法？2.該制備過程類似于植物組織培養(yǎng)的哪個(gè)階段？3.iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞的原因？思維判斷：①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞要經(jīng)過脫分化②制備iPS細(xì)胞的過程中有基因的選擇性表達(dá)③培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞需定期用胰蛋白酶處理，分瓶后才能繼續(xù)增殖三、干細(xì)胞培養(yǎng)、應(yīng)用×借助載體將特定基因?qū)爰?xì)胞中、直接將特定蛋白導(dǎo)入細(xì)胞中或者用小分子化合物誘導(dǎo)脫分化×體外培養(yǎng)的細(xì)胞有些是懸浮生長(zhǎng)的√誘導(dǎo)iPS細(xì)胞需要在細(xì)胞中表達(dá)幾個(gè)關(guān)鍵基因，將細(xì)胞逆轉(zhuǎn)到類似胚胎干細(xì)胞的狀態(tài)背誦落實(shí)：干細(xì)胞的分類？功能比較？P46干細(xì)胞分為胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）和成體干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）：存在于早期胚胎中，具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能。成體干細(xì)胞：是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、精原干細(xì)胞等。具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。5.干細(xì)胞的分類？功能比較？達(dá)標(biāo)驗(yàn)收：

一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合（見前面課件）、單克隆抗體制備1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷2.如何才能獲得大量單一抗體？（解決思路）P493.過程二、單克隆抗體制備方法：向動(dòng)物體反復(fù)注射某種抗原，使之產(chǎn)生抗體，再?gòu)难宸蛛x缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差3.單克隆抗體制備的過程：思考：1.包括的階段及原理：2.注射特定抗原的目的：3.誘導(dǎo)融合的方法、培養(yǎng)液中細(xì)胞類型（融合只考慮兩兩融合的情況）：4.第一次篩選和第二次篩選的目的和方法？5.雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？6.大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法7.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)8.單克隆抗體的應(yīng)用一選二選足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞膜的流動(dòng)性）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）獲得產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)法B淋巴細(xì)胞；骨髓瘤細(xì)胞；雜交瘤細(xì)胞；B—B；瘤—瘤①獲得雜交瘤細(xì)胞，方法——選擇培養(yǎng)基②獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，方法——克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體體外培養(yǎng)→從細(xì)胞培養(yǎng)液中提取、注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖→從小鼠腹水中提取能準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，可大量制備。①作為診斷試劑（早早孕診斷試劑盒；用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體定位腫瘤等）②運(yùn)載藥物③治療疾病體外培養(yǎng)相比，小鼠腹腔內(nèi)增殖的優(yōu)點(diǎn)？不需要特定的培養(yǎng)基，不需要嚴(yán)格的外界環(huán)境條件

思考：1.ADC的組成成分？ADC的抗體和藥物各有什么作用？P50討論1整理2.ADC在臨床應(yīng)用上有何優(yōu)勢(shì)？P50討論3整理分析：?jiǎn)慰寺】贵w的應(yīng)用之—：運(yùn)載藥物（ADC即抗體--藥物偶聯(lián)物）優(yōu)勢(shì)：靶點(diǎn)清楚、毒副作用小ADC由抗體、接頭和藥物組成?？贵w主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。（7）抗體－藥物偶聯(lián)物（ADC）由細(xì)胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合形成，用ADC治療腫瘤具有毒副作用小，治療效果明顯等優(yōu)點(diǎn)，其原因是？抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合，被腫瘤細(xì)胞特異性識(shí)別，通過胞吞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，溶酶體使其裂解，釋放藥物，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。達(dá)標(biāo)驗(yàn)收：

三、單克隆抗體制備1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷？2.單克隆抗體制備的過程：思考：1.包括的階段及原理：2.注射特定抗原的目的：3.誘導(dǎo)融合的方法、培養(yǎng)液中細(xì)胞類型（融合只考慮兩兩融合的情況）：4.第一次篩選和第二次篩選的目的和方法？5.雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？6.大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法與體外培養(yǎng)相比，小鼠腹腔內(nèi)增殖的優(yōu)點(diǎn)？7.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)8.單克隆抗體的應(yīng)用1.ADC的組成成分？ADC的抗體和藥物各有什么作用？2.ADC在臨床應(yīng)用上有何優(yōu)勢(shì)？原因？為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學(xué)以小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)流程。回答下列問題：（1）上述實(shí)驗(yàn)前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是_________________。（2）寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細(xì)胞懸液的主要實(shí)驗(yàn)步驟：_________________。（3）為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，需要進(jìn)行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于___，使用該培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果是___。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是____。（4）若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞大量增殖，可采用的方法有____（答出2點(diǎn)即可）。單克隆抗體的制備（1）誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細(xì)胞（2）取小鼠甲脾臟用機(jī)械方法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理分散成單個(gè)細(xì)胞，加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液P44（3）選擇培養(yǎng)基只有雜交瘤細(xì)胞能夠生長(zhǎng)抗原與抗體的反應(yīng)具有特異性（4）將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)深度思考1.要得到既能無限增殖又能產(chǎn)生抗病毒A的抗體的細(xì)胞，還可以有哪些方案？①將抗病毒A抗體的基因?qū)牍撬枇黾?xì)胞②將癌基因?qū)肽墚a(chǎn)生抗病毒A抗體的B淋巴細(xì)胞中，并破壞B細(xì)胞的抑癌基因2.對(duì)篩選的認(rèn)識(shí)(1)研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠細(xì)胞內(nèi)DNA的合成有兩條途徑，主要途徑（簡(jiǎn)稱D途徑）是在細(xì)胞內(nèi)由氨基酸和其他小分子化合物合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA的過程，該過程中葉酸必不可少，氨基蝶呤（A）是葉酸的拮抗劑，可以阻斷此途徑；另一輔助途徑（簡(jiǎn)稱S途徑）是在次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）存在的情況下，經(jīng)酶的催化作用合成DNA，骨髓瘤細(xì)胞缺乏催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成的酶。圖中篩選1利用DNA合成途徑不同的特點(diǎn)配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的_____具有篩選雜交瘤細(xì)胞的作用。（2）雜交瘤細(xì)胞能連續(xù)增殖，未融合細(xì)胞以及同種融合細(xì)胞因不能增殖而死亡。由此可判斷，骨髓瘤細(xì)胞DNA合成存在__________（填“D”“S”或“D和S”）途徑，雜交瘤細(xì)胞存在__________途徑。(3)步驟③需對(duì)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，該過程一般在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行。先將細(xì)胞懸浮液稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/mL，再在每個(gè)培養(yǎng)孔中滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是__________。（1）氨基蝶呤（2）D

D和S（3）使每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)1.概念：2.原理：

生殖方式：3.分類：4.動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植的原因：5.非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的體細(xì)胞核移植非常困難，主要原因？6.過程：動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，表現(xiàn)全能性困難將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞核的全能性減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）的核：紡錘體—染色體復(fù)合物去核指去除該復(fù)合物來源？何時(shí)去核？去核是指去除什么？無性生殖胚胎細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植6.具體分析過程：1.整個(gè)體細(xì)胞核移植過程用到了哪些技術(shù)?2.原理?3.受體細(xì)胞:①選擇MII期卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞的原因?②用什么方法去核?去核的時(shí)期？

③受體細(xì)胞為何要去核?P54-T14.注入卵母細(xì)胞的是供體細(xì)胞還是其細(xì)胞核?為什么?5.促融的方法?激活重構(gòu)胚的方法?激活的目的?6.克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?為什么?P54T2（克隆動(dòng)物性狀與細(xì)胞核供體動(dòng)物基本相同，不完全相同的原因？）7.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題動(dòng)物體細(xì)胞核移植、胚胎移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核的全能性體積大易操作;含有促使細(xì)胞核表現(xiàn)全能性的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件保證克隆動(dòng)物細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)完全來自有重要利用價(jià)值的供體顯微操作去核法P54MII期將整個(gè)供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞操作簡(jiǎn)便，對(duì)卵母細(xì)胞的損傷小電融合法目的：激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程不是原因:①克隆動(dòng)物細(xì)胞核DNA來自供體細(xì)胞核，但其細(xì)胞質(zhì)DNA同時(shí)來自核供體細(xì)胞和受體卵母細(xì)胞②表現(xiàn)型=基因型+環(huán)境影響物理或化學(xué)法(如電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑)思考:1.生殖方式？動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植的原因？2.非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的體細(xì)胞核移植非常困難，主要原因？3.過程？1.整個(gè)體細(xì)胞核移植過程用到了哪些技術(shù)?2.原理?3.受體細(xì)胞:①選擇MII期卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞的原因?②用什么方法去核?去核的時(shí)期？

③受體細(xì)胞為何要去核?去核實(shí)際上去除的是什么？4.注入卵母細(xì)胞的是供體細(xì)胞還是其細(xì)胞核?為什么?5.促融的方法?激活重構(gòu)胚的方法?激活的目的?6.克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?為什么?P54T2（克隆動(dòng)物性狀與細(xì)胞核供體動(dòng)物基本相同，不完全相同的原因？）達(dá)標(biāo)驗(yàn)收：

四、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎工程

胚胎工程

核心背誦內(nèi)容1.胚胎工程的定義？P56胚胎工程包含的技術(shù)手段？胚胎工程的理論基礎(chǔ)1——受精1.受精的兩個(gè)階段？受精的場(chǎng)所？2.精子獲能的定義？精子獲能的場(chǎng)所？精子獲能的方法？卵子成熟的部位和時(shí)期？3.防止多精入卵的兩道屏障？P57受精的標(biāo)志？P58胚胎工程的理論基礎(chǔ)2——胚胎早期發(fā)育1.胚胎早期發(fā)育的場(chǎng)所？2.胚胎早期發(fā)育分為哪幾個(gè)階段？（1）卵裂期的特點(diǎn)？細(xì)胞分裂方式?注意：細(xì)胞數(shù)量？每個(gè)細(xì)胞的體積？有機(jī)物的總量？有機(jī)物種類？DNA總量？（2）什么時(shí)期的細(xì)胞具有全能性？什么時(shí)期的細(xì)胞開始分化？什么時(shí)期出現(xiàn)胚層分化？（3）囊胚期的細(xì)胞類型和功能？胚胎工程技術(shù)1——體外受精1.試管動(dòng)物的流程？

2.體外受精的步驟？胚胎工程技術(shù)2——胚胎移植1.胚胎移植的定義？2.移植胚胎的來源？P61

3.胚胎移植的實(shí)質(zhì)？P62-T44.胚胎移植的優(yōu)勢(shì)？地位？P62

5.胚胎移植的步驟？P61最后一段注意：①供體、受體母牛的選擇要求？②兩次處理的對(duì)象？同期發(fā)情處理的目的？超數(shù)排卵處理所用的激素？6.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)？（4條）胚胎工程技術(shù)3——胚胎分割1.胚胎分割的生殖方式？原理？意義？2.胚胎分割的時(shí)期？注意什么？3.胚胎移植前如何進(jìn)行性別鑒定？P63圖達(dá)標(biāo)驗(yàn)收——胚胎工程1）卵裂期：胚胎總體積并不增加，每個(gè)細(xì)胞體積↓有機(jī)物總量↓有機(jī)物種類↑DNA總量↑2）囊胚組成及各部分功能：3）原腸胚：出現(xiàn)三個(gè)胚層分化4）總結(jié)：①出現(xiàn)細(xì)胞分化的階段②發(fā)生孵化的階段③出現(xiàn)胚層分化的階段④胚胎移植的時(shí)期：桑葚胚或囊胚

胚胎工程框架雌性生殖道內(nèi)輸卵管內(nèi)成熟MⅡ透明帶反應(yīng)、卵細(xì)胞膜反應(yīng)場(chǎng)所：輸卵管、子宮胚胎工程具體知識(shí)點(diǎn)胚胎工程：胚胎工程技術(shù)包括體外受精、胚胎移植、胚胎分割等。胚胎工程的許多技術(shù)，實(shí)際上是在體外條件下，對(duì)自然受精和早期胚胎發(fā)育條件進(jìn)行的模擬操作。1.胚胎工程的理論基礎(chǔ)1——受精受精P56：精子與卵子結(jié)合形成合子的過程。包括受精前的準(zhǔn)備階段和受精階段。場(chǎng)所：輸卵管精子獲能：精子在雌性動(dòng)物的生殖道發(fā)生相應(yīng)生理變化，獲得受精能力。（體外用獲能液，含肝素、Ca2+載體等）卵子的準(zhǔn)備：排出的卵子可能是初級(jí)卵母細(xì)胞或次級(jí)卵母細(xì)胞。在輸卵管發(fā)育到MII期，才有受精的能力。受精過程（兩道屏障、受精的標(biāo)志）P57①精子釋放多種酶，溶解卵細(xì)胞膜外的一些結(jié)構(gòu)，接觸卵細(xì)胞膜。②透明帶反應(yīng)——阻止多精入卵的第一道屏障。在精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間發(fā)生，阻止后來的精子進(jìn)入透明帶。③卵細(xì)胞膜反應(yīng)—-阻止多精入卵的第二道屏障。精子入卵后，卵細(xì)胞膜立即發(fā)生生理反應(yīng)，拒絕其他精子入卵。P58受精的標(biāo)志：觀察到兩個(gè)極體

或者

雌、雄原核。（精子入卵后激活卵子完成減數(shù)分裂II）。2.胚胎工程的理論基礎(chǔ)2——胚胎早期發(fā)育場(chǎng)所：輸卵管、子宮基本過程：受精卵卵裂期桑葚胚囊胚原腸胚卵裂期的特點(diǎn)：在透明帶內(nèi)，細(xì)胞的數(shù)量不斷增加，但胚胎的總體積并不增加。囊胚組成：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)、滋養(yǎng)層、囊胚腔內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織；

滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎盤、胎膜孵化：透明帶破裂，胚胎伸展出來早期胚胎何時(shí)開始出現(xiàn)分化？囊胚

胚胎進(jìn)入子宮的時(shí)期？桑葚胚或囊胚胚胎工程技術(shù)1——體外受精（試管動(dòng)物）P60卵母細(xì)胞的采集（培養(yǎng)至MII期）、精子的獲?。ǐ@能處理——P56方法）、受精（培養(yǎng)液）胚胎工程技術(shù)2胚胎分割1.概念：采用機(jī)械方法將胚胎分割成２等份、４等份或８等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。2.生殖方式：無性生殖

原理：細(xì)胞的全能性

意義：提高胚胎的利用率3.材料：發(fā)育良好，形態(tài)正常的

桑葚胚

或

囊胚

。

4.注意：在分割囊胚時(shí)，注意將

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。設(shè)備：體視顯微鏡和顯微操作儀，操作液，分割針、分割刀5.分割后胚胎去向：可直接移植給受體，或體外培養(yǎng)后移植。

胚胎工程技術(shù)3細(xì)胞工程：概念？（不背）一、細(xì)胞的全能性1.概念？P342.細(xì)胞具有全能性的原因？3.體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)出全能性，而是分化成為不同組織器官的原因？4.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件？P35二、植物組織培養(yǎng)1.概念？（不背）2.原理？

3.過程？理解概念：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織4.

生殖類型？

5.細(xì)胞分裂方式？6.實(shí)驗(yàn)步驟？①取材部位？原因？

②脫分化過程避光的原因？

③再分化需光原因？④培養(yǎng)基中蔗糖的作用？⑤在組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，為什么要強(qiáng)調(diào)所用器械的滅菌和實(shí)驗(yàn)人員的無菌操作？三、植物體細(xì)胞雜交1.概念？（不背）

2.原理？

3.過程？

①去壁方法

？②人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法、原理？

③融合后的細(xì)胞一定是雜種細(xì)胞嗎？

④融合完成的標(biāo)志4.變異類型？生殖方式？雜種植株的育性？5.意義（優(yōu)點(diǎn)）？

6.問題（缺點(diǎn)）及原因？四、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用？達(dá)標(biāo)驗(yàn)收①——植物細(xì)胞工程達(dá)標(biāo)驗(yàn)收②——?jiǎng)游锛?xì)胞工程達(dá)標(biāo)驗(yàn)收③——胚胎工程1.胚胎工程的定義？P56胚胎工程包含的技術(shù)手段？胚胎工程的理論基礎(chǔ)1——受精1.受精的兩個(gè)階段？受精的場(chǎng)所？2.精子獲能的定義？精子獲能的場(chǎng)所？精子獲能的方法？卵子成熟的部位和時(shí)期？3.防止多精入卵的兩道屏障？P57受精的標(biāo)志？P58胚胎工程的理論基礎(chǔ)2——胚胎早期發(fā)育1.胚胎早期發(fā)育的場(chǎng)所？2.胚胎早期發(fā)育分為哪幾個(gè)階段？（1）卵裂期的特點(diǎn)？細(xì)胞分裂方式?注意：細(xì)胞數(shù)量？每個(gè)細(xì)胞的體積？有機(jī)物的總量？有機(jī)物種類？DNA總量？（2）什么時(shí)期的細(xì)胞具有全能性？什么時(shí)期的細(xì)胞開始分化？什么時(shí)期出現(xiàn)胚層分化？（3）囊胚期的細(xì)胞類型和功能？胚胎工程技術(shù)1——體外受精1.試管動(dòng)物的流程？

2.體外受精的步驟？胚胎工程技術(shù)2——胚胎移植1.胚胎移植的定義？2.移植胚胎的來源？P61

3.胚胎移植的實(shí)質(zhì)？P62-T44.胚胎移植的優(yōu)勢(shì)？地位？P62

5.胚胎移植的步驟？P61最后一段注意：①供體、受體母牛的選擇要求？②兩次處理的對(duì)象？同期發(fā)情處理的目的？超數(shù)排卵處理所用的激素？6.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)？（4條）胚胎工程技術(shù)3——胚胎分割1.胚胎分割的生殖方式？原理？意義？2.胚胎分割的時(shí)期？注意什么？3.胚胎移植前如何進(jìn)行性別鑒定？P63圖比較各種生物技術(shù)的取材及原因（1）植物組織培養(yǎng)P34：取材？原因？

（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)P45：取材？原因？（3）動(dòng)物細(xì)胞核移植P52：動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植，原因？一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：P44（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要提供的條件？

（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)加入血清的原因？

（3）需要對(duì)培養(yǎng)液定期更換的原因？（4）貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)？

培養(yǎng)過程中貼壁細(xì)胞會(huì)因

現(xiàn)象而停止分裂增殖。（5）干細(xì)胞的分類？功能比較？二、動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法？（比較：誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合的方法？P37）三、單克隆抗體的制備：P48（1）兩次篩選的方法、目的？（2）第一次篩選（選擇培養(yǎng)基篩選）的選擇結(jié)果？

（3）第一次篩選得到的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？

（4）第一次篩選得到的雜交瘤細(xì)胞有多種，產(chǎn)生的抗體有些是不符合要求的，原因？

（5）第二次篩選得到的抗體檢測(cè)呈陽性的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)

（6）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)？（7）抗體－藥物偶聯(lián)物（ADC）由細(xì)胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合形成，用ADC治療腫瘤具有毒副作用小，治療效果明顯等優(yōu)點(diǎn)，其原因是？

四、動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)P52（1）受體細(xì)胞選擇MII期卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞的原因?去核方法?去核時(shí)期？去核去除的是什么？（2）促融的方法?激活重構(gòu)胚的方法?激活的目的?達(dá)標(biāo)驗(yàn)收④——II卷?？键c(diǎn)比較各種生物技術(shù)的取材及原因（1）植物組織培養(yǎng)P34：取材：幼嫩部分