DNA電泳過程常見問題分析

DNA電泳過程常見問題分析DNA電泳的MARKER怎么是扭曲的？1、 配制膠時(shí)的緩沖液需要和電泳緩沖液不是同時(shí)配制的.最好是同時(shí)配制.電泳時(shí)緩沖液高過液面1—2mm即可。2、 電泳時(shí)電壓過高,可以在電泳前15分鐘用較低電壓(3V/cm),等條帶出孔后比較漂亮了?然后再調(diào)電壓。3、 上樣時(shí)盡量慢慢加樣，等樣品自然沉降后再加電壓。跑出的DNA帶模糊？1、 DNA降解：避免核酸酶污染。2、 電泳緩沖液陳舊:電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值上弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。3、 所用電泳條件不合適:電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm跑出的DNA帶模糊？1、 DNA降解：避免核酸酶污染。2、 電泳緩沖液陳舊:電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值上弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。3、 所用電泳條件不合適:電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm,溫度泳，溫度應(yīng)V15C；核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。DNA上樣量過多：減少凝膠中DNA上樣量。DNA樣含鹽過高：電泳前通過乙醇沉淀去除過多有蛋白污染：電泳前酚抽提去除蛋白。DNA變性：電泳前勿加熱，用20mMNaCl緩沖液稀釋DNA。減A鏈電?D4、5、6、7、2、3、4、有不規(guī)則DNA帶遷移？1、 對(duì)于久/HindIII片段cos位點(diǎn)冷卻5分鐘。2、 電泳條件不合適：電泳電壓不超過23、 DNA變性：以20m跑出的DNA條1、DNA的上敏度稍高，上樣量可適J2、5°C加熱DNA5分鐘，然后在冰上溫度V30C；經(jīng)常更換電泳緩沖液。ffer稀釋DNA,電泳前勿加熱。DN:增加DNA的上樣量；聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈:避免DNA的核酸酶污染。凝膠：縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度。的DNA，所用光源不合適??應(yīng)用短波長(zhǎng)(254nm)的紫外光源。NA帶缺失不完整是怎么回事？是小DNA帶走出凝膠，可以縮短電泳時(shí)間或降低電壓或增強(qiáng)凝膠濃度。分子大小相近的DNA帶不易分辨??增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度。3、DNA變性：電泳前請(qǐng)勿高溫加熱DNA鏈，以20mMNaClBuffer稀釋DNA。DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適??在脈沖凝膠電泳上分析。凝膠回收DNA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在哪里？最關(guān)鍵的是切膠之后，溶膠的那一步?切膠的時(shí)候要盡量把多余的瓊脂糖凝膠切干凈，按照實(shí)驗(yàn)步驟，第一步應(yīng)該是將膠充分的溶化.這以后步一定要做充分，保證凝膠已經(jīng)完全溶解了?加乙醇這步也很關(guān)鍵，當(dāng)凝膠溶解后最好多過幾次柱子。還有就是洗脫的那一步。洗脫的時(shí)候最好用加熱到60度的洗脫液洗脫，如果實(shí)在效果不好可以分兩次洗脫。

切膠的時(shí)候如何能切的準(zhǔn)呢？條帶的位置肉眼很難判斷出來，如何判斷條帶的位置呢？可以將產(chǎn)物與Marker一起電泳，染色后，在紫外燈下觀察結(jié)果，跟Marker進(jìn)行相比，就知道要的是哪條帶。注意，紫外燈下切膠速度要快，否則DNA會(huì)降解，另外，紫外線對(duì)身體傷害很大，特別是眼睛，請(qǐng)注意采取保護(hù)措施（比如在專門的箱子里切，帶眼鏡等）。