ELISA的原理和基本類型

ELISA的原理及基本類型1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)用于IgG定量測定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。進(jìn)行檢測時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，止匕時(shí)，能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的靈敏度。ELISA的基本類型ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體；酶標(biāo)記的抗原或抗體；酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。雙抗體夾心法測抗原

洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌加底物顯色針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。競爭法測抗原3a2a3ajg育

洗滌jg育

洗滌加酚標(biāo)Id加酚標(biāo)Id杭原和被測抗加底物顯色2b1'包被特異性抗體孵育

洗滌2b1'包被特異性抗體孵育

洗滌首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快，缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原。免疫抑制法測抗原

洗滌t丿川底物畝何加入稱粵抗休的酶結(jié)舍物洗滌t丿川底物畝何加入稱粵抗休的酶結(jié)舍物被檢標(biāo)本對底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比，二者之差即為預(yù)測抗原的量。間接法測抗體是檢測抗體最常用的方法，原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。□D孵U包被抗氐加酶標(biāo)id抗拉體加底物顯色洗滌□D孵U包被抗氐加酶標(biāo)id抗拉體加底物顯色洗滌洗滌孵育洗滌本法只