10mac流式分析-flowjo10教程細(xì)胞周期樣品

FlowFlowJo軟件分析細(xì)胞159182012-3-2012:20|個(gè)人分類(lèi):FlowJo|系統(tǒng)分類(lèi):,作者 細(xì)胞周期的檢測(cè)是流式細(xì)胞儀最為廣泛的應(yīng)用之一。細(xì)胞周期是指以有方式增殖的細(xì)胞從結(jié)束到子細(xì)胞 結(jié)束所經(jīng)歷的過(guò)程。通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G1期：細(xì)胞開(kāi)始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S期：DNA開(kāi)始合成，這時(shí)細(xì)胞核內(nèi)DNA的含量介于G1期和G2期之間。當(dāng)DNA 結(jié)束成為4倍體時(shí)，細(xì)胞進(jìn)入G2期。G2期的細(xì)胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進(jìn)入M期。因此，單純從DNA含量無(wú)法區(qū)分G2期和M期。一旦有絲 發(fā)生，細(xì)胞 成兩個(gè)細(xì)胞，這兩個(gè)細(xì)胞或者進(jìn)入下一個(gè)細(xì)胞周期，或者進(jìn)入靜止期（G0期），而G0期從DNA含量上同樣無(wú)法與G1期區(qū)分。因此，整個(gè) 周期可以描述為G0/G1、S、G2/M期。通過(guò)核酸 PI標(biāo)記DNA,并由流式細(xì)胞儀進(jìn)分析，可以得到細(xì)胞各個(gè)時(shí)期的分布狀態(tài)，計(jì)算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S期細(xì)胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標(biāo)。核 可以與DNA分子特異性的結(jié)合，細(xì)胞周期檢測(cè)中PI最為常用。PI為插入性核酸熒性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含細(xì)胞周期示意圖如（圖一）（圖一 把細(xì)胞周期樣品拖入FlowJo軟件，雙擊打開(kāi)原始數(shù)據(jù)。如(圖二)所示(圖二博給我留發(fā)送消 FlowJoFlowJo 流式細(xì)胞技術(shù)相關(guān)資 ，流式細(xì)胞數(shù)據(jù)分析，流式技術(shù)支持及培博客首動(dòng)博相好作者的其他博 全高端流式研討會(huì)，你會(huì)參一首非常好聽(tīng)的歌，必flowjo中國(guó)流式小組第二次活動(dòng)（流式細(xì)胞技術(shù)培訓(xùn)課通知(第四屆東南亞國(guó)家流式熱門(mén)博文導(dǎo) 全減招會(huì)熔斷嗎向XU館長(zhǎng)等求教：學(xué)術(shù)谷狗教育公平背后的5：什么是公平？說(shuō)說(shuō)高X軸選擇FSC,Y軸選擇SSC在SSC/FSC圖中雙擊分析的細(xì)胞群體，如（圖三）（圖三X軸選擇FL3-LIN,用來(lái)表示PI的線性信號(hào)。Y軸選擇FL3-PEAK,用來(lái)表示PI的峰值信號(hào)。本實(shí)驗(yàn)用的是儀器的數(shù)據(jù)。（如果是BD的儀器的數(shù)據(jù)，X軸選擇FL2-W,用來(lái)表示PI的寬度信號(hào)。Y軸選擇FL2-A,用來(lái)表示PI的面積信號(hào)），如上圖所示多倍體或異倍體細(xì)胞不予分析 在FlowJo工作臺(tái)中選中“用于周期分析的二倍體細(xì)胞”這個(gè)結(jié)點(diǎn)，在的“工具”中選擇“細(xì)胞周期”。如（圖四）所示

（圖四分析的模型有Watson和DJF兩種，用戶可以選擇任意一種進(jìn)行分析，兩模型間沒(méi)有實(shí)質(zhì)的差別。模式右邊是兩種模型的顯示方式。細(xì)胞周期擬合原則：G1峰限制和G2峰限制。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果擬合情況，對(duì)G1峰限制和G2峰限制進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。曲線調(diào)整原則：粉色的曲線為模型曲線，黑色的為樣本曲線，理想狀況是粉色和黑色曲線吻合一致為最佳。擬和的好壞可以根據(jù)右邊的RMS值來(lái)判斷。RMS(rootmeansquare)值越小越好。但是這只是一個(gè)相對(duì)值，只在同樣本不同模擬情況下，選取最小值來(lái)達(dá)到最佳擬和。你可以選中期的峰或G2期的峰，根據(jù)調(diào)節(jié)按鈕調(diào)節(jié)峰的寬度通常來(lái)說(shuō)，G2的位置為G1的2倍。你可以根據(jù)相對(duì)固定的那個(gè)峰來(lái)確定另外一個(gè)峰的位置，如G1峰相對(duì)固定的話，就選擇G2峰的均數(shù)為G1的2倍(2G1)；如果G2峰相對(duì)固定的話，就選擇G1峰為G2峰的0.5G2G1期含義：細(xì)胞進(jìn)行大量物質(zhì)合成時(shí)期，為DNA合成做準(zhǔn)備S期含義：開(kāi)始至完成DNAG2/M期的含義：DNA結(jié)束和開(kāi)始有絲之間的間隙通常，根據(jù)G1期、S期、G2期的百分含量來(lái)判斷細(xì)胞周期的變化。相對(duì)于正常的細(xì)胞，加藥或者照射的細(xì)胞的周期可能會(huì)發(fā)生變。一般根據(jù)S+G2期的百分含量判斷處理后的細(xì)胞是促進(jìn)增殖還是抑制增殖。CV：變異系數(shù)。不同細(xì)胞群體DNA含量的細(xì)微差別可能有生物學(xué)上的重要意義，因此DNA含量的流式分析中分辨率尤其關(guān)鍵。通常檢測(cè)分辨率或精度由G0/G1峰的CV來(lái)反映。影響CV的因素主要包括兩方面：儀器因素和樣品及染色過(guò)程對(duì)標(biāo)本的人為影響。Ploidy:倍體。原數(shù)目。流式中用來(lái)描述總的DNA含量。二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的含S期含量:SPloidy:倍體。原數(shù)目。流式中用來(lái)描述總的DNA含量。二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的含S期含量:S6.中選擇“文件”并單擊，選擇下拉菜單中的“另存為”，選擇保存位新命名文件名以及文件保存的文件類(lèi)型（SVG、PNG、EMF、JPG） 把上述樣品的分析應(yīng)用到組中，在FlowJo軟件界面中單擊打開(kāi)布局編輯器，在工作臺(tái)的樣品空間把“分析的細(xì)胞群體結(jié)點(diǎn)”拖入布局編輯器中，單擊布局編輯器右上角的Batch工具。輸出整個(gè)實(shí)驗(yàn)組的數(shù)據(jù)。如（圖五）所示（圖五細(xì)胞周期FCS：細(xì)胞周期 細(xì)胞周期細(xì)胞周期本 地址上一篇：FlowJo/blog-349948-博客 請(qǐng)注明出處下一篇：Windows7系統(tǒng)安裝FlowJo所遇到的收當(dāng)前推(2個(gè)評(píng)論該博文允 用戶評(píng)登[2]bensonvicky2016-4-27你好，我使用flowJo分析細(xì)胞周期的時(shí)候發(fā)現(xiàn)所有周期加起來(lái)大于100%，請(qǐng)問(wèn)怎么處理呢？謝[1]andyqin20152015