產品初始污染菌檢測方法適用性驗證方案-wm

產品初始污染菌檢測方法適用性驗證產品初始污染菌檢測方法適用性驗證項目名稱產品初始污染菌檢測方法適用性驗證項目編號編制人員日期審核人員日期批準人員日期產品初始污染菌檢測方法適用性驗證目錄.概述.驗證目的.適用范圍.驗證依據.驗證小組成員及職責.試驗材料.樣品洗脫方法回收率驗證.技術方法驗證.驗證方案的評定和建議.驗證方案的最終審核意見.產品初始污染菌檢測方法適用性驗證報告產品初始污染菌檢測方法適用性驗證產品初始污染菌檢測方法適用性驗證.概述初始污染菌是用于檢測產品未滅菌前屏障系統(tǒng)表面或內在的活微生物數(shù)量。初始污染菌回收率用于補償無法從產品中完全取出的微生物的數(shù)值。是用特定的技術從產品上移除并培養(yǎng)微生物的方法，測定滅菌前產品細菌總數(shù)可用來判斷產品受細菌污染的程度，以及生產單位工具設備、工藝流程、生產人員的衛(wèi)生狀況，是對產品進行衛(wèi)生學評價的綜合依據，確定滅菌前產品中微生物的數(shù)量和性質，可為下一步滅菌提供參考依據。確保本企業(yè)所生產的成品符合產品標準要求。.驗證目的確定產品初始污染菌檢測方法.適用范圍本公司產品的初始污染菌檢測.驗證依據《中國藥典》2015版通則1105非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法；ISO11737-1:2006醫(yī)療器械的滅菌微生物學方法第一部分：產品上微生物總數(shù)的測定；GB/T19973-12005醫(yī)療器械的滅菌微生物學方法第一部分：產品上微生物總數(shù)的估計；GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標準；試驗產品：儀器與設備：DSX-280B手提式壓力蒸汽滅菌器，SPX-150型生化培養(yǎng)箱，SW-CJ系列潔凈工作臺，MJK-150型霉菌培養(yǎng)箱，BSC-1000HA2生物安全柜，ZW型集菌儀，GZX-9076MBE電熱鼓風干燥箱。其他試驗材料：微孔濾膜（孔徑＜0.45um直徑約50mm）、量筒、鑷子、吸管、酒精燈、 產品初始污染菌檢測方法適用性驗證試管、75%乙醇棉簽、滅菌刻度吸量管（1ml）、滅菌硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿（p90mmx15mm）、錐形瓶，滅菌手術剪、無菌燒杯等。培養(yǎng)基及稀釋液：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液0.9%NaCl溶液菌種：金黃色葡萄球菌白色念珠菌.樣品洗脫方法回收率驗證方法描述驗證試驗應進行3次獨立的平行試驗，每次試驗時，先將已知菌落數(shù)的懸液菌液涂布于樣品上，然后對同一樣品進行多次洗脫處理，每次洗脫后的供試液通過薄膜過濾法過濾，培養(yǎng)并計數(shù)，得出回收率。樣品準備取產品（未組裝的），滅菌菌液制備試驗步驟樣品處理：取50?100cfu的菌液，均勻涂布于樣品（最難洗脫的部位）上，自然晾干。樣品洗脫：在凈化臺下取處理后的樣品，浸沒于裝有一定體積的0.9%無菌NaCL溶液的適合容器中，手工震搖5分鐘洗脫樣品中的菌，作為供試液，做好標記。按7.4.2再反復洗脫3次，分別做好標記。采用薄膜過濾法，將每一次洗脫的供試液分別過濾集菌于不同的膜上，取下濾膜正面朝上貼于相應的培養(yǎng)基平皿上，置該培養(yǎng)基的溫培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)；計數(shù)：對每一次洗脫的菌落進行計數(shù)，并記錄于下表1中回收率計算第一次洗脫的菌落數(shù)回收率= 總菌落數(shù)結果判定 產品初始污染菌檢測方法適用性驗證在3次獨立平行試驗中，回收率均應大于70%,則洗脫方法有效，若任一次試驗中回收率低于70%，則應排除干擾因素，并重新驗證，或選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行試驗。.計數(shù)方法驗證方法描述驗證試驗應進行3次獨立的平行試驗，每次試驗分四個組，試驗組、菌液組、供試品對照組、洗脫液對照組。并分別計算各試驗菌的每次試驗回收率。供試液的制備：按7.的方法制備。試驗步驟：試驗組將供試液用薄膜過濾法過濾，并加入100ml（1ml含50-100cfu的試驗菌和99mlPH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液）稀釋的菌懸液，過濾后將濾膜取下，菌面朝上貼在對應培養(yǎng)皿上，培養(yǎng)并計數(shù)。菌液組加入100ml（含50-100cfu的試驗菌和99mlPH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液）稀釋的菌懸液，用薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計數(shù)。供試品對照組將供試液用薄膜過濾法過濾，力口100mlPH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液，用薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計數(shù)。洗脫液對照組將樣品洗脫液用薄膜過濾法過濾，加入100ml（含50-100cfu的試驗菌和99mlPH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液）稀釋的菌懸液，用薄膜過濾法過濾后，培養(yǎng)并計數(shù)。結果判定在3次獨立平行試驗中，洗脫液對照組回收率［洗脫液對照組的平均菌落數(shù)/菌液組的平均菌落數(shù)］均應不低于70%,若試驗組回收率［（試驗組的平均菌落數(shù)-供試品對照組的平均菌落數(shù)的值）/菌液組的平均菌落數(shù)］均不低于70%,則計數(shù)方法有效；若任一次試驗中試驗組的菌落回收率低于70%,則應排除干擾因素，并重新驗證，若無法消除則選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行檢驗。.驗證方案的評定和建議.驗證方案的最終審核意見產品初始污染菌檢測方法適用性驗證產品初始污染菌檢測方法適用性驗證報告1.產品概述2.儀器與設備設備名稱型號編號是否校準是否在有效期內結論手提式壓力蒸汽滅菌器DSX-280B口是口否口是口否生化培養(yǎng)箱SPX-150口是口否口是口否潔凈工作臺SW-CJ口是口否口是口否霉菌培養(yǎng)箱MJK-150口是口否口是口否A2生物安全柜BSC-1000H口是口否口是口否集菌儀ZW型口是口否口是口否電熱鼓風干燥箱GZX-9076MBI口是口否口是口否3.培養(yǎng)基和稀釋液名稱批號廠家配制批號配制人瞬各大豆胨瓊!脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖培養(yǎng)基PH7.0R化鈉蛋白胨緩沖液0.9%NaCL溶液4.菌種菌種名稱菌種編號來源批號代數(shù)金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉

產品初始污染菌檢測方法適用性驗證5.洗脫方法回收率結果產品第一次洗第二次洗第三次洗第四次洗回收率^均回收率修正系數(shù)結論：試驗人/日期： 審核/日期6.計數(shù)方法驗證結果產品名稱大腸埃希菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率金黃色葡萄球菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率枯草芽抱桿菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液組回收率回收率回收率

白色念珠菌試驗組試驗組試驗組菌液組菌液組菌液組供試液組供試液組供試液組洗脫液組洗脫液組洗脫液