1100801101 楊立冬 實(shí)驗(yàn)四

主題：體細(xì)胞克隆中文文獻(xiàn)體細(xì)胞克隆中核的重編程作者：李世杰杜衛(wèi)華李寧單位：①中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100094②河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,保定071001來(lái)自：「?二言"：咚二二■—二尿：化赧摘要：盡管體細(xì)胞克隆在綿羊、牛、小鼠、豬、山羊、兔、貓、大鼠和騾子等物種中都獲得了成功，但卻未能得到狗和獼猴的克隆個(gè)體，而且克隆效率非常低.克隆效率低使體細(xì)胞克隆技術(shù)在科研和生物技術(shù)等方面的應(yīng)用受到限制.供體核移入去核的卵細(xì)胞后，必須經(jīng)過(guò)表觀遺傳修飾的重編程，回到胚胎開(kāi)始發(fā)育的全能狀態(tài).目前認(rèn)為:供體核的不完全重編程是導(dǎo)致克隆效率低的主要原因.本文從DNA甲基化、組蛋白乙?；?、X染色體失活、端粒、印記基因以及其他發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)幾個(gè)方面來(lái)探討影響克隆效率的因素.關(guān)鍵詞體細(xì)胞克隆核重編程組蛋白乙?；疍NA甲基化X染色體失活端粒印記基因表達(dá)核移植方法和活化方法對(duì)小鼠體細(xì)胞克隆胚胎發(fā)育的影響作者：王二耀于洋李雪梅焦麗紅王柳單位：①中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所計(jì)劃生育生殖生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100080;②中國(guó)科學(xué)院研究生院生物系，北京100049.來(lái)自：渤必軌二- -摘要：用卵丘細(xì)胞為核供體進(jìn)行小鼠體細(xì)胞克隆，成功獲得了一批成年體細(xì)胞克隆小鼠.為探討不同核移植方法和重構(gòu)胚活化方法對(duì)小鼠克隆胚發(fā)育的影響，用B6D2F1小鼠的卵丘細(xì)胞和卵母細(xì)胞作為供、受體進(jìn)行核移植實(shí)驗(yàn)，采用電融合和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)直接顯微注射的方法進(jìn)行核移植，并采用電脈沖、乙醇處理、氯化鍶處理和電脈沖聯(lián)合氯化鍶4種不同方法對(duì)重構(gòu)胚進(jìn)行活化，對(duì)克隆胚胎的體外及體內(nèi)發(fā)育進(jìn)行研究.結(jié)果顯示，利用顯微注射法獲得重構(gòu)胚胎的工作效率(90.7%)顯著高于融合法獲得重構(gòu)胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、電脈沖和氯化鍶3種激活方法都可以誘導(dǎo)孤雌胚發(fā)育到囊胚，但前二者處理的胚胎的囊胚發(fā)育率(52.4%，54.2%)顯著低于后者(76.9%).10mmol/L氯化鍶處理6h活化效果最好.融合法獲得的重構(gòu)胚經(jīng)氯化鍶或者電脈沖聯(lián)合氯化鍶激活后，囊胚發(fā)育率(9.5%,8.6%)顯著高于單純電脈沖激活(2.6%),而乙醇活化的重構(gòu)胚沒(méi)有發(fā)育到囊胚階段.用顯微注射法經(jīng)氯化鍶激活獲得的重構(gòu)胚的囊胚發(fā)育率最高(16.6%).注射法和融合法獲得的重構(gòu)胚胎經(jīng)氯化鍶激活后進(jìn)行胚胎移植,都獲得了發(fā)育到期的體細(xì)胞克隆小鼠,發(fā)育到期率分別為2.5%和1.4%.結(jié)果表明,兩種核移植方法對(duì)B6D2F1小鼠重構(gòu)胚胎的早期發(fā)育能力有一定影響，用這兩種方法都可以獲得體細(xì)胞克隆小鼠;不同活化方法對(duì)重構(gòu)胚胎的體外發(fā)育能力有顯著影響，在上述4種激活方式中，氯化鍶處理對(duì)克隆胚的激活效果最好.關(guān)鍵詞：小鼠體細(xì)胞克隆核移植顯微操作卵母細(xì)胞激活發(fā)育哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆研究進(jìn)展作者：馬勇江曹斌云單位：西北農(nóng)林科技大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院來(lái)自：第27卷第茫期 黃牛雜志 Vol.27No.22001年4〕] ]“山血屏丫祖伽〔：玄1山5心晌： A嚴(yán)一2001摘要：哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)是近年來(lái)才發(fā)展起來(lái)的技術(shù)，但體細(xì)胞克隆綿羊——多利的誕生卻引起了世界轟動(dòng)，充分顯示了其重大的科學(xué)研究?jī)r(jià)值和潛在的應(yīng)用價(jià)值。本文對(duì)哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)研究現(xiàn)狀、理論基礎(chǔ)研究、應(yīng)用等方面作一綜述。關(guān)鍵詞:體細(xì)胞;克隆;哺乳動(dòng)物;細(xì)胞分化;細(xì)胞全能性動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)及其應(yīng)用前景作者：陳永福茍克勉安曉榮單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室北京100094高技術(shù)通訕ST忙舊嚴(yán)創(chuàng)HIGHTECHNOLOGYLEITE昭來(lái)自：二；二二摘要：綜述了動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)及其應(yīng)用前景，著重探討了利用體細(xì)胞克隆技術(shù)在生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、擴(kuò)大特別優(yōu)良家畜個(gè)體的數(shù)量以及作為保護(hù)瀕臨滅絕的動(dòng)物遺傳資源等三方面的應(yīng)用前景。哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)研究現(xiàn)狀及其存在的問(wèn)題作者：馬志杰，李遠(yuǎn)森單位：（西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都610041）來(lái)自：第R電垃6創(chuàng) 西南氏握兀吟窄城’E煥科亍版JufSauL'InvtstUniwrsiijpfbiNibonfiliik^^NaLunilScfenceEdition摘要：哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)的成功是生物高新技術(shù)的重大突破，具有劃時(shí)代里程碑的作用．在分析哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)的基本環(huán)節(jié)及其研究現(xiàn)狀的基礎(chǔ)上，對(duì)其產(chǎn)生的意義和存在的問(wèn)題作了綜合評(píng)述，并對(duì)其發(fā)展前景作了展望。關(guān)鍵詞：哺乳動(dòng)物；體細(xì)胞：克隆技術(shù)英文文獻(xiàn)1.SomaticcellnucleartransferinzebrafishBySiripattarapravat,Kannik,aPh.D.,fromMichiganStateUniversity,2010,153pages;AAT3435159AbstractZebrafish(Daniorerio)havebeenrecognizedasoneofthebestmodelorganismsforthestudyofdevelopmentalbiologyandhumandiseases.Asofyet,theutilizationofzebrafishhasnotreacheditspromise.Tofulfillthispotential,amethodologytogenerateconditionalknock-in/-outmustbedeveloped.Somaticcellnucleartransfer(SCNT)isapotentialapproachtoproducegenetically-modifiedzebrafish.Thiscanbeaccomplishedbytransferringgene-targetedcellsintoenucleatedeggs.TheprimaryfocusofthisdissertationistoimprovetheefficiencyofSCNT.Subsequently,theuseofSCNTtechnologymaybeextendedtoenhancetheuseofzebrafishasavertebrateanimalmodel.Threeimportantparametershavebeencharacterizedandoptimizedtomeetsuchagoal:recipienteggs,nucleartransfertechnique,andcultureddonorcells.Whilethezebrafishcloningtechniquehasbeenpublished,itishighlyinefficient.Moreover,theexistingprotocolisdifficulttoreplicate,likelyduetopoorcharacterizationofzebrafisheggphysiologyatthetimeofnucleartransfer.Wehavedemonstratedthat,followingeggactivation,eggsundergodynamicchangesincellcyclestagesandthatislikelytoaffectcloningefficiency.Toimproveuponthis,weimplementedatechniqueinwhichrecipienteggscanbemaintainedinvitroatmetaphaseIIofmeiosisstageinChinooksalmonovarianfluid.ThisshouldprovideauniformsourceofrecipienteggsforSCNT.Keyword(s):Somaticcells,Nucleartransfer,Reproductivecloning1．斑馬魚(yú)的體細(xì)胞核移植作者：Siripattarapravat,KannikaPh.D.單位：MichiganStateUniversity來(lái)自：Molecularbiology,Cellularbiology,DAI-B71/12,Jun2011摘要：斑馬魚(yú)(廢水處理魚(yú)類)被認(rèn)為是最好的一種為研究發(fā)育生物學(xué)和人類疾病之相關(guān)研究有機(jī)體模型。迄今為止，人們還未實(shí)現(xiàn)斑馬魚(yú)所具有的這個(gè)功能。為了完成這一潛能，一個(gè)有效的方法論需要被發(fā)展。體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移(SCNT)是一種很有潛力的生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)方法。這可以通過(guò)細(xì)胞核基因轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)而實(shí)現(xiàn)。本論文的焦點(diǎn)之一是：提高SCNT的運(yùn)行效率。隨后，SCNT技術(shù)的使用可能被延伸到加強(qiáng)運(yùn)用斑馬魚(yú)作為脊椎動(dòng)物的動(dòng)物模型。三個(gè)重要參數(shù)表征和優(yōu)化目標(biāo):遇到受體細(xì)胞質(zhì),核轉(zhuǎn)移技術(shù)、溫和的供體細(xì)胞。然而斑馬魚(yú)體細(xì)胞克隆技術(shù)的發(fā)展了,而且它有很高的效率。此外,現(xiàn)有的體制是很難復(fù)制,很可能是由于在核轉(zhuǎn)移中受體細(xì)胞的不良表征。我們已經(jīng)證明,受體細(xì)胞活化、受體細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)變化的細(xì)胞周期階段可能會(huì)影響克隆效率。為提升效率,我們實(shí)行的一種技術(shù),其中受體細(xì)胞會(huì)保存在中期體外信息部減數(shù)分裂(MII)二世大馬哈魚(yú)階段卵巢的液體中，這應(yīng)該提供單一的SCNT的受體細(xì)胞。關(guān)鍵詞：體細(xì)胞核移植再生克隆TheuseofcellularfactorstoreprogramgeneexpressionfromsomaticcellDNAByFairbairn,A.,D.Phil.,UniversityofOxford(UnitedKingdom),2005;AATU196999Abstract：Thisthesisreportsthedevelopmentofasystemtoinvestigatereprogrammingofgeneexpressioninheterokaryonsformedbythefusionofdistinctcelltypes.Suchreprogrammingmayallowadifferentiatednucleustoadoptadifferentfate,orreverserestrictionsinpotency.Theprojectinvolvedvarioustechnicalaspectsincluding:Refinementofelectrofusiontechniquestoefficientlyfusecellsunderspecified

conditions.Developmentofspecialisedcellculturemethodstoallowthefusionofidentifiedcells,andsoon.通過(guò)基因表達(dá)從體細(xì)胞的DNA重組基因作者：Fairbairn,A.,D.Phil.單位:UniversityofOxford(UnitedKingdom)出版號(hào)：AATU196999摘要:這個(gè)論文論述了一個(gè)通過(guò)不同細(xì)胞融合而形成異核體技術(shù)進(jìn)行基因重組的系統(tǒng)的發(fā)展。這種重組可能允許不同分化的原子核進(jìn)行不同的命運(yùn)，或者轉(zhuǎn)換效能。該課題涉及許多技術(shù)方面包括：在特定條件下用精煉的電子技術(shù)融合細(xì)胞，專能細(xì)胞文化的發(fā)展允許特定細(xì)胞的融合等等。AssessmentofparametersforbovinesomaticcellcloningbynucleartransferbyWengle,JamesGordon,M.Sc.,UniversityofGuelph(Canada),2003,125pages;AATMQ80206Abstract:Theuseofsomaticcellsinnucleartransfertogeneratecloneshasthepotentialtosignificantlyimprovetheefficiencyandproductivityoflivestockandmayeventuallyprovetobeamoreeconomicalventurethancurrentbreedingmethods.Inthisstudy,severalaspectsofcurrentlyusedcloningtechniqueswereassessedincludingtheuseofacytoskeletalinhibitorduringmicromanipulation,DNAlabelingandUVexposure,embryoactivationmethods,andcellsynchronizationmethods.Indexing(documentdetails)Advisor: King,W.A.,Betts,DeanH.School: UniversityofGuelph(Canada)School CanadaLocation:Source:MAI42/01,p.165,Feb2004Source:Sourcetype:DissertationSourcetype:DissertationSubjects:Genetics,LivestockSubjects:Genetics,LivestockPublicationNumber:PublicationNumber:AATMQ80206ISBN:9780612802063ISBN:9780612802063DocumentURL:/pqdweb?did=766464961&sid=2&Fmt=2&clientId=46904&RQT=309&VName二PQD惡IProQuest766464961documentID:牛細(xì)胞核移植的參數(shù)評(píng)估作者：Wengle,JamesGordonM.Sc.單位：UniversityofGuelph(Canada)出版號(hào)：AATMQ80206摘要：用細(xì)胞核移植的方法來(lái)克隆對(duì)改善畜牧業(yè)的效率和產(chǎn)量有非常大的意義，并且證明比現(xiàn)在的飼養(yǎng)方式有更大的經(jīng)濟(jì)風(fēng)險(xiǎn)。在這項(xiàng)研究中,幾個(gè)方面克隆技術(shù)被評(píng)價(jià)，包括目前在微操作常用的細(xì)胞骨架抑制劑，DNA標(biāo)簽和UV暴露，胚胎活化方法，細(xì)胞同步的方法。ProductionofpigembryosfollowingmicroinjectionofsomaticcellsandspermByLee,Jang-Won,Ph.D.,TheUniversityofConnecticut,2003,138pages;AAT3095835Abstract：Thethesisinvestigatedembryonicdevelopmentthroughmicromanipulationtechniquesinpigs.Toinvestigateembryonicdevelopmentintracytoplasmicsperminjection(ICSI)andnucleartransfer(NT)researchfocusedonstrategiesthathelptoachievethegoalsofhealthyandnormaloffspring.Wedevelopedawholecellinjectiontechniquefornucleartransferandproduced4liveclonedpiglets.Thisprotocolshouldbeofparticularinterestbecauseitcancutdownthetimeoocytesaremanipulatedduringnucleartransferandresultinhigherpregnancyrates.Keyword(s):Pig,Embryos,Microinjection,Somaticcells,Sperm,Cloning通過(guò)腦室體細(xì)胞和精子來(lái)生產(chǎn)豬胚胎作者：Lee,Jang-Won,Ph.D.單位：TheUniversityofConnecticut出版號(hào)：AAT3095835摘要：本論文通過(guò)對(duì)豬的微操作技術(shù)研究胚胎發(fā)育，為了研究胚胎發(fā)育，漿內(nèi)單精子注射(ICSI)和核轉(zhuǎn)移(NT)的研究都關(guān)注于策略，幫助實(shí)現(xiàn)健康正常的后代。我們?yōu)楹宿D(zhuǎn)移開(kāi)發(fā)了一個(gè)全細(xì)胞注射技術(shù)并且生產(chǎn)出四個(gè)活的克隆小豬。本議定書(shū)應(yīng)受到關(guān)注,因?yàn)樗梢詼p少卵母細(xì)胞在核轉(zhuǎn)移被操縱的時(shí)間并且導(dǎo)致更高的懷孕率。關(guān)鍵詞：豬胚胎顯微注射體細(xì)胞精子克隆5.ProgiTssofPorcineSomaticCloningHuJun-he,YangChun-rongXeiAn-min,JIngXiao-qCDouZhong^yin^*(ShaanxiProvinceBranchCenterofNationalStemCellKtteinearing&TechnohjgyCtnter,

Nnr(hweslSci-techL'niv^rsHy?rA|；ricultureandForestry,YanglineShaanxi712100China)Abstract：ThelechnoJugyofporcinesomaticnucleartrancffrtNT)hasbwnLnterKivelystudiedinrecent resultinginbirthofseveralclon?dpi^lelsinLah%becausetheresearchofporcinesoma廿ccloninghas