原位雜交技術(shù)的HER2檢測(cè)

原位雜交技術(shù)(FISH)在HER2檢測(cè)中的應(yīng)用HER2及其檢測(cè)的臨床意義HER2檢測(cè)相關(guān)指南及指南關(guān)于ISH的內(nèi)容更新Her2檢測(cè)常用的原位雜交方法內(nèi)容提要HER2介紹及其檢測(cè)的臨床意義HER2基因人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2基因HumanEpidermalgrowthFactorReceptor-2(HER2)Gene定位于染色體17q21編碼跨膜受體樣蛋白（HER2蛋白）,具有酪氨酸激酶活性HER2蛋白分子量185kDa的糖蛋白:細(xì)胞外區(qū)（配體結(jié)合區(qū)）跨膜區(qū)（傳導(dǎo)信號(hào)）細(xì)胞內(nèi)區(qū)（激酶活性）HER2細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞外細(xì)胞膜HER2HER2過(guò)表達(dá)的結(jié)果正常HER2表達(dá)HER2基因擴(kuò)增導(dǎo)致HER2過(guò)表達(dá)HER2過(guò)表達(dá)導(dǎo)致腫瘤增殖促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖------腫瘤發(fā)生抑制細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)血管新生提高細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,增強(qiáng)腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移作用MoasserMM.Oncogene,2007.26(46):6577FreudenberyJA,WangQ,Katsumata,etal.ExpMolPathol.2009.87(1):1HER2陽(yáng)性的定義蛋白水平(過(guò)表達(dá)):細(xì)胞表面HER2蛋白受體表達(dá)大量增加基因水平(擴(kuò)增):

HER2編碼基因于細(xì)胞核內(nèi)拷貝增加IHCFISHHER2狀態(tài)對(duì)乳腺癌的臨床重要性乳腺癌的HER2陽(yáng)性率約為15–25%對(duì)于乳腺癌患者，HER2過(guò)表達(dá)對(duì)早期乳腺癌預(yù)后不利；HER2過(guò)表達(dá)會(huì)降低乳腺癌轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)患者的存活率HER2狀態(tài)也可預(yù)測(cè)乳腺癌的藥物治療效果，包括對(duì)曲妥珠單抗治療的反應(yīng)對(duì)紫杉醇及蒽環(huán)類藥物治療的反應(yīng)對(duì)三苯氧胺的耐藥性CarlsonRW,etal.JNCCN2006:4(Suppl.3):S1–S22.

HER2狀態(tài)評(píng)估對(duì)于確定患者是否接受抗HER2靶向治療至關(guān)重要HER2狀態(tài)對(duì)胃癌的臨床意義所有的胃或胃食管結(jié)合部癌患者都應(yīng)在初次診斷時(shí)檢測(cè)腫瘤的HER2狀態(tài)。HER2在胃癌中過(guò)表達(dá)預(yù)示更差的疾病結(jié)局以及進(jìn)展性更強(qiáng)的疾病類型準(zhǔn)確的胃癌HER2表達(dá)和基因擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果是進(jìn)展期胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預(yù)測(cè)的前提2010年，歐洲和美國(guó)先后批準(zhǔn)化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽(yáng)性胃及胃食管交界癌患者KelleyJRandDugganJM.JClinEpidemiol2003;56:1–9.BangYJ,etal.Lancet2010;376:687–697.BangYJ,etal.JClinOncol2008;26:Abstract4526.GravalosCandJimenoA.AnnOncol2008;19:1523–1529.HER2檢測(cè)指南中對(duì)于ISH檢測(cè)的內(nèi)容介紹國(guó)內(nèi)外相關(guān)指南國(guó)外指南：ASCO/CAP乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2013）NCCN乳腺癌臨床實(shí)踐指南（2012）NCCN胃癌臨床實(shí)踐指南（2011）歐洲胃癌HER2檢測(cè)指南（2011）國(guó)內(nèi)指南：乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2014版）胃癌HER2檢測(cè)指南(2011)10BilousMetal.ModPathol2003;16:173─182.WolffAC,etal.JClinOncol2007;25:118–145.AlbarelloL,etal.AdvAnatPathol

2011;18(1):53–59IHC為2+的HER2乳腺癌和胃癌患者均應(yīng)進(jìn)行ISH復(fù)查！ISH檢測(cè)流程和判讀標(biāo)準(zhǔn)（ASCO-CAP2007版）2007版ArchPatholLabMed.2007;131(1):18-43ISH檢測(cè)流程和判讀標(biāo)準(zhǔn)（ASCO-CAP2013版）2013版–雙探針ArchPatholLabMed.2013Oct7.[Epubaheadofprint]14中國(guó)乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2014版）HER2檢測(cè)常用檢測(cè)的ISH方法HER2常用檢測(cè)方法免疫組織化學(xué)(IHC):應(yīng)用抗體檢測(cè)蛋白過(guò)表達(dá)是乳腺及胃組織檢測(cè)HER2狀態(tài)的首要方式1原位雜交

技術(shù)(ISH):利用核酸探針檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增，可用于復(fù)檢經(jīng)IHC檢測(cè)難以確定結(jié)果的病例及疑難病例11.WolffACetal.JClinOncol2007;25:118–145.IHC：顯示組織細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)狀態(tài)ISH：顯示組織細(xì)胞基因的擴(kuò)增狀態(tài)實(shí)驗(yàn)室HER2檢測(cè)的ISH方法總結(jié)IHC通過(guò)抗體檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)FISH通過(guò)熒光標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增SISH通過(guò)DNP標(biāo)記之DNA探針并通過(guò)后續(xù)顯色反應(yīng)(銀染)來(lái)檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增通過(guò)地高辛標(biāo)記之DNA探針并通過(guò)后續(xù)顯色反應(yīng)(DAB信號(hào))來(lái)檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增CISH通過(guò)DNP標(biāo)記之DNA和染色體著絲粒探針并通過(guò)后續(xù)顯色反應(yīng)(HER2銀染及17號(hào)染色體堿性磷酸酶紅染)檢測(cè)HER2DualSISH18原位雜交技術(shù)原理使探針與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間發(fā)生免疫化學(xué)反應(yīng),最后用熒光顯微鏡對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行定性、定量或相對(duì)定位分析。FISH技術(shù)介紹變性和雜交FISH操作流程組織固定和處理組織切片和處理探針制備洗脫雜交液的配制信號(hào)放大或鏡檢PathVysion探針試劑盒INFORM探針試劑盒BMCCancer2009,9:1HER2(–)HER2(+)HER2(+)FISH探針22CISH技術(shù)介紹使用生物素或者地高辛標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交反應(yīng)，再用鼠抗生物素－抗體和辣根過(guò)氧化物酶－抗鼠抗體進(jìn)行免疫結(jié)合，最后DAB顯色CISH操作流程：Ⅰ預(yù)處理Ⅱ變性和雜交Ⅲ嚴(yán)格洗滌Ⅳ免疫顯色Ⅴ襯染和封片Ⅵ鏡下觀察和結(jié)果判讀HER2基因未擴(kuò)增HER2基因擴(kuò)增CISH探針雙色銀染原位雜交技術(shù)（DSISH）DSISH探針HER2的ISH檢測(cè)方法之優(yōu)缺點(diǎn)檢測(cè)方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)FISH檢測(cè)結(jié)果相對(duì)免疫組化更加定量化穩(wěn)定性好可自動(dòng)化操作檢測(cè)價(jià)格昂貴，信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間衰減較難鑒定乳腺癌侵微小浸潤(rùn)灶不能同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)病理醫(yī)生及技術(shù)員接受相關(guān)技術(shù)操作及檢測(cè)結(jié)果分析的訓(xùn)練較少CISH與免疫組化相比較少受實(shí)驗(yàn)前分析及處理步驟影響操作較快，普通光鏡觀察即可染色長(zhǎng)期穩(wěn)定可同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)與熒光原位雜交相比技術(shù)較新，操作欠相關(guān)經(jīng)驗(yàn)缺乏經(jīng)驗(yàn)之人員較難分析檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)HER2及CEP17拷貝數(shù)需制備不同切片SISH全自動(dòng)顯色原位雜交(自動(dòng)圖像分析)其他優(yōu)點(diǎn)與顯色原位雜交相同可檢測(cè)HER2過(guò)表達(dá)之微小腫瘤灶(胃癌)可觀察HER2異質(zhì)性染色結(jié)果(胃癌）檢測(cè)HER2基因及CEP17拷貝數(shù)需制備不同切片DSISH全自動(dòng)顯色原位雜交(自動(dòng)圖像分析