第九章動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)

第九章動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)1/31/202311/31/20232動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備引進(jìn)動(dòng)物動(dòng)物抓取固定動(dòng)物編號(hào)標(biāo)記給藥途徑和方法動(dòng)物麻醉體液采集實(shí)驗(yàn)外科技術(shù)操作術(shù)前準(zhǔn)備術(shù)中技術(shù)術(shù)后護(hù)理動(dòng)物處死動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)1/31/20233一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定1/31/20234固定盒1/31/20235二、豚鼠的抓取固定法1/31/20236三、家兔的抓取固定法以上抓取方法都是錯(cuò)誤的1/31/20237以上兩種固定方法均不正確1/31/20238一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié)性別鑒定外生殖器和肛門(mén)距離長(zhǎng)，中間有毛的是雄性1/31/20239Female

Male

二、兔的性別鑒定1/31/202310一、大、小鼠1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié)年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行1/31/202311日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽(tīng)到聲音9～11全身被白毛，門(mén)齒長(zhǎng)出13～15眼皮張開(kāi)，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨(dú)立生活1/31/2023121/31/2023131/31/2023141/31/2023151/31/2023161/31/2023171/31/2023181/31/2023191/31/2023201/31/2023212.根據(jù)體重鑒定日齡⑴小鼠日齡與體重的對(duì)應(yīng)日齡/d初生51015202530體重/g1.84.06.011.015.021.021.01/31/202322⑵大鼠日齡與體重的對(duì)應(yīng)日齡/d初生10203040體重/g6～717～2535～5055～90100～150日齡/d50607080體重/g150～210170～240210～270240～3201/31/202323三、家兔家兔的門(mén)齒和爪隨年齡增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，是年齡鑒別的重要標(biāo)志。青年兔：門(mén)齒潔白，短小，排列整齊；老年兔：門(mén)齒暗黃,厚而長(zhǎng),排列不整齊,有破損1歲家兔趾爪：紅色與白色長(zhǎng)度相等；1歲以下：紅多于白；1歲以上：白多于紅。1/31/202324五、犬 犬的年齡主要以牙齒的生長(zhǎng)情況、磨損程度、外形顏色等情況綜合判定。1/31/202325年齡犬齒更換和磨損情況2個(gè)月以下僅有乳齒(白、細(xì)、尖)2～4個(gè)月更換門(mén)齒4～6個(gè)月更換犬齒(白，牙尖圓鈍)6～10個(gè)月更換臼齒1歲牙長(zhǎng)齊，潔白光亮。門(mén)齒有尖突2歲下門(mén)齒尖突部分磨平3歲上、下門(mén)齒尖突大部分磨平4～5歲上、下門(mén)齒開(kāi)始磨損呈微斜面，并發(fā)黃6～8歲門(mén)齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃、磨損9～10歲唇部、胡須發(fā)白10歲以上門(mén)齒磨損，犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白1/31/202326第四節(jié)妊娠檢查妊娠診斷(pregnancydiagnosis)：在配種以后能及時(shí)掌握雌性動(dòng)物是否妊娠、妊娠的時(shí)間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實(shí)驗(yàn)室的方法進(jìn)行檢查。通過(guò)妊娠檢查，可以及時(shí)地對(duì)雌性動(dòng)物加強(qiáng)護(hù)理或再次配種，以保護(hù)母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產(chǎn)及減少繁育時(shí)間的損失。1/31/202327外部檢查法摸胎法陰道檢查法直腸檢查法超聲波檢查法孕酮含量測(cè)定法青蛙試驗(yàn)妊娠檢查方法1/31/202328第五節(jié)分組與編號(hào)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分組和編號(hào)標(biāo)記一、隨機(jī)分組：隨機(jī)數(shù)字表（隨機(jī)抽樣原理）（一）為二組例：設(shè)有雄性Wistar大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，…，12號(hào)，試用完全隨機(jī)的方法，分為甲、乙兩組。分組方法：隨機(jī)點(diǎn)落在是隨機(jī)數(shù)字表上第21行第31列的78，則從78開(kāi)始，由上向下抄12個(gè)隨機(jī)數(shù)字，如下：1/31/202329隨機(jī)數(shù)字：78386957910374566826541隨機(jī)數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組：動(dòng)物編號(hào)：123456789101112組別：乙乙甲甲甲乙甲甲乙乙甲甲乙組5個(gè)，甲組7個(gè)，兩組數(shù)字不等繼續(xù)用隨機(jī)方法將甲組多余的一只調(diào)整給乙組，從上面最后一隨機(jī)數(shù)字41，接下去抄一個(gè)數(shù)為62，以7除之(因甲組原分配7只)得6，即把原分配在甲組的第6個(gè)甲(即11號(hào)大鼠)調(diào)入乙組。1/31/202330如果甲組多兩個(gè)，則接下去抄兩個(gè)數(shù)。分別以8，7除之，余數(shù)即指要調(diào)入乙組的第幾個(gè)甲，余此類推。最后各組的鼠數(shù)就相等了。調(diào)整后各組鼠的編號(hào)為：組別鼠的編號(hào)甲組3457812乙組126910111/31/202331(二)為三組：A組、B組、C組分組方法：落點(diǎn)是隨機(jī)數(shù)字表第40行17列的08，則從08開(kāi)始，自左到右抄12個(gè)隨機(jī)數(shù)字，以3除各隨機(jī)數(shù)字，若余數(shù)為l，即該鼠歸A組；余數(shù)為2，歸人B組；余數(shù)為3，歸入C組。動(dòng)物編號(hào)：123456789101112隨機(jī)數(shù)字：082701501529393943796910除3余數(shù)：201202001101組別：BCABCBCCAACA調(diào)整組別：B1/31/202332（三）每個(gè)動(dòng)物為一組：例：設(shè)有A，B，C，D，E，F(xiàn)代表的6只家兔，試用完全隨機(jī)法將其每只分為一組。分組方法：從隨機(jī)數(shù)字表上用鉛筆任指一點(diǎn)，若為第21行第17列的33，則從33向左抄用6個(gè)數(shù)字，然后分別以6，5，4，3，2，l除之。凡除不盡的，即將余數(shù)寫(xiě)下。

隨機(jī)數(shù)字3346952687除數(shù)654321余數(shù)311121隨機(jī)排列CABDFE1/31/202333二、編號(hào)標(biāo)記方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組后，為了區(qū)分、觀察并記錄每個(gè)個(gè)體的反應(yīng)情況，必須給每只動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記。1．體表顏料著色法一般對(duì)短期試驗(yàn)的白色動(dòng)物可用顏料涂搽被毛的方法標(biāo)記。常用的涂染化學(xué)藥品有：紅色：0.5％中性紅或品紅溶液；黃色：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸酒精飽和液；咖啡色：2％硝酸銀溶液；黑色：煤焦油酒精溶液。1/31/202334左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，右側(cè)從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個(gè)位數(shù)，紅色表示十位數(shù)。1/31/2023352．個(gè)體耳號(hào)標(biāo)記法3.個(gè)體斷趾標(biāo)記法4.耳號(hào)鉗標(biāo)記法5.掛牌法1/31/2023361/31/202337第六節(jié)常規(guī)采血方法

一、大、小鼠的采血方法1．頸靜脈或頸動(dòng)脈采血2．股靜脈或股動(dòng)脈采血3．心臟采血4．尾部采血5．眼眶采血6．?dāng)囝^取血1/31/202338眼窩靜脈叢采血尾部采血1/31/202339心臟采血1/31/2023401/31/2023411/31/202342二、豚鼠的采血方法1．耳緣剪口采血2．心臟采血方法同大、小鼠。3．股動(dòng)脈采血方法同大、小鼠。4．后肢背中足靜脈采血1/31/2023431/31/202344三、家兔的采血方法1.心臟采血2.耳中央動(dòng)脈采血3.耳靜脈采血4.頸總動(dòng)脈1/31/2023451/31/202346四、狗、貓的采血方法1．后肢外側(cè)跗外靜脈、內(nèi)側(cè)隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血2．股動(dòng)脈采血3.心臟采血同大、小鼠心臟采血。4．耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血。1/31/202347采血方法的選擇，決定于實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃柩恳约皠?dòng)物種類。凡用血量較少的檢驗(yàn)如紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白的測(cè)定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時(shí)可作靜脈采血。靜脈采血時(shí)，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開(kāi)始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。而研究毒物對(duì)肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動(dòng)、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動(dòng)脈血液。1/31/2023481）采血場(chǎng)所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25～28℃，冬季，15～20℃為宜；2）采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；3）采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；4）若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。采血時(shí)要注意1/31/202349部位

動(dòng)物種類a.尾靜脈大鼠、小鼠b.耳緣靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊c.眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠１．取少量血1/31/202350部位動(dòng)物種類ａ．后肢外側(cè)皮下小隱靜脈狗、猴、貓ｂ．前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、猴、貓ｃ．耳中央動(dòng)脈兔ｄ．頸靜脈狗、貓、兔ｅ．心臟豚鼠、大鼠、小鼠ｆ．?dāng)囝^大鼠、小鼠２．取中量血1/31/202351部位

動(dòng)物種類ａ．股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈狗、猴、貓、兔ｂ．心臟狗、猴、貓、兔ｃ．頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊ｄ．摘眼球大鼠、小鼠３．取大量血1/31/202352動(dòng)物種類最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604.最大安全采血量與最小致死采血量1/31/202353第七節(jié)麻醉方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法全身麻醉法：吸入法，注射法局部麻醉法：浸潤(rùn)麻醉，表面麻醉1/31/202354（一）全身麻醉法1、吸入法麻醉藥：乙醚氯仿三氟乙烷1/31/2023552、注射法靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射麻醉藥：巴比妥類藥物、氯胺酮、烏拉坦、水合氯醛（一）全身麻醉法1/31/202356（二）局部麻醉法麻醉部位：皮膚、肌下組織、深層組織

1%鹽酸普魯卡因局部浸潤(rùn)麻醉

0.02～2％鹽酸可卡因表面麻醉1/31/202357麻醉藥物應(yīng)用原則：依據(jù)動(dòng)物體重計(jì)算麻醉藥物的劑量；依據(jù)動(dòng)物生命體征變化控制給藥速度；掌握寧少勿多、分階段給藥的方式；麻醉時(shí)需注意保溫。針對(duì)不同的動(dòng)物，選擇不同的麻醉藥物、實(shí)施不同的麻醉方法。1/31/202358麻醉具體操作：家兔全身麻醉麻醉劑：3%戊巴比妥鈉，1ml/kg（30mg/Kg）前1/2快速推入，使動(dòng)物能順利、快速地渡過(guò)興奮期；后1/2速度宜慢，且邊注射邊注意觀察動(dòng)物的生命體征變化，當(dāng)確定已達(dá)到麻醉效果時(shí)，即停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。給藥方法：耳緣靜脈注射1/31/202359麻醉成功標(biāo)志角膜反射遲鈍或消失肢體肌肉松弛疼痛反射消失呼吸變深變慢

1/31/202360第八節(jié)給藥途徑與方法注射法分為：皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射腹腔注射、靜脈注射腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射投入法經(jīng)消化道投入：口腔、胃腔或腸管經(jīng)呼吸道投入：鼻腔或氣管1/31/202361（一）皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。注射部位：狗、貓大腿外側(cè)兔背部/耳根部豚鼠后大腿內(nèi)側(cè)/小腹部；大白鼠側(cè)下腹部（二）皮內(nèi)注射局部脫毛——消毒——繃緊皮膚——30度進(jìn)針挑起針頭稍刺入可注射——皮膚表面鼓起一小皮丘。1/31/2023621/31/202363（三）肌肉注射選肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管通過(guò)的部位，一般多選臀部1/31/202364（四）腹腔注射用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推

0.3～0.5cm，再以45度角穿過(guò)腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動(dòng)物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm處。1/31/2023651/31/202366（五）靜脈注射——注射時(shí)盡量使血管充盈1．兔：兔耳緣靜脈先拔毛，手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈固定：左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無(wú)名指及小指墊在下面進(jìn)針：6號(hào)針頭從靜脈的遠(yuǎn)端進(jìn)針，移動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開(kāi)食指和中指，將藥液注入結(jié)束：然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻1/31/2023671/31/2023682．小白鼠和大白鼠——尾靜脈注射固定動(dòng)物（鼠筒或燒杯），露出尾巴，45～50℃溫水浸潤(rùn)半分鐘或酒精擦拭，血管充盈，表皮角質(zhì)軟化固定：以左手食指和中指捏住鼠尾，無(wú)名指從下面托起，以大拇指和小指夾住尾巴的末梢注射：進(jìn)針，先緩注少量藥液，無(wú)阻力3．狗——前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈側(cè)臥固定，剪毛，用膠皮帶扎緊靜脈近端，從遠(yuǎn)端進(jìn)針，有回血后，松開(kāi)綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。1/31/2023691/31/202370注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.2～1.01～32～55～105～15肌肉0.1～0.20.2～0.50.2～0.50.5～12～5靜脈0.2～0.51～21～53～105～15皮下0.1～0.50.5～10.5～21～33～10幾種動(dòng)物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）1/31/202371動(dòng)物種類體重（g）最大容積（ml）小鼠>301.025-300.820-240.5大鼠>3008.0250-3006.0200-2494.0-5.0100-1993.0豚鼠>3006.0250-3004.0-5.0家兔>35002002500-35001502000-2400100貓>3000100-1502500-300050-80犬10,000-15,000200-500（六）經(jīng)口給藥多用灌胃法常用動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積見(jiàn)右表1/31/2023721．小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃針安注射器上固定動(dòng)物成垂直體位——經(jīng)口腔緩慢插入灌胃針——針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力——注射液體。灌胃針插入位置：小鼠3～4cm大鼠或豚鼠4～6cm灌胃量：小鼠為0.2～1ml，大鼠、豚鼠為1～5ml。1/31/2023731/31/2023742．