動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)操作060308

2023/1/311

醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的

基本技術(shù)方法

2023/1/312

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的操作技術(shù)方法已成為醫(yī)學(xué)科研和教學(xué)工作不可缺少的手段，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法多種多樣，在不同的研究領(lǐng)域有其不同的目的和應(yīng)用，但是一些基本的操作技術(shù)方法是一樣的，如動(dòng)物的抓取、固定、標(biāo)號(hào)、脫毛、麻醉、給藥、采集血及尿樣、處死、尸檢等，對于實(shí)驗(yàn)研究者來說無論從事哪一類研究的項(xiàng)目，都會(huì)不同程度地應(yīng)用這些技術(shù)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作的正確與否，會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這是科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作者必須熟練掌握的基本功。

2023/1/313一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取和固定

1、小鼠的抓取與固定實(shí)驗(yàn)時(shí)從籠盒將小鼠尾部抓住并提起，放在籠蓋(或表面粗糙的物體)上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時(shí)，用左手(熟練者也可用同一只手)拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動(dòng)物在手中的姿勢。這類抓取方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。

2023/1/314圖1-1小鼠的抓取方法2023/1/315圖1-2小鼠固定架固定方法2023/1/316

2、大鼠的抓取與固定

大鼠抓取方法基本同小鼠，抓大鼠時(shí)若操作者不熟練，或者大鼠特別兇猛，操作者最好戴上防護(hù)手套(帆布或硬皮質(zhì)均可)，如若是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射時(shí)，可采用與小鼠相同的手法，即拇、食指捏住鼠的耳朵及頭頸皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心中，調(diào)整大鼠在手中的姿勢后即可操作。大鼠的尾靜脈采血和手術(shù)操作就需固定大鼠。麻醉后置于大鼠實(shí)驗(yàn)板上(仰臥位)，先用線固定好四肢，然后用棉線將大鼠兩上門齒固定于實(shí)驗(yàn)板上。如做大鼠尾靜脈注射，可將大鼠置于固定器內(nèi)，使鼠尾留在外面進(jìn)行操作。

2023/1/317圖1-3大鼠的抓取方法2023/1/318圖1-4固定板固定大鼠2023/1/319

3、豚鼠的抓取與固定豚鼠性情溫和，膽小易驚，一般不易傷人，抓取時(shí)，先用手掌扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，拇、食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部。如果在實(shí)驗(yàn)時(shí)豚鼠頻繁掙扎，不宜采用此方法，因?yàn)椴僮髡叩哪?、食指?huì)隨動(dòng)物的掙扎越抓越緊而引起豚鼠窒息。另外，有時(shí)可用紗布將豚鼠頭部輕輕蓋住，操作人員輕扶住其背部或者讓其頭部鉆到實(shí)驗(yàn)人員的臂下，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。2023/1/3110圖1-5豚鼠的抓取方法2023/1/3111

4、家兔、貓的抓取與固定抓取家兔時(shí)，輕輕打開兔籠門，勿使兔受驚，然后將手伸入籠內(nèi)，從兔頭前部把兩耳輕輕壓于手掌內(nèi)，兔便臥伏不動(dòng)，此時(shí)將頸背部的被毛和皮膚一起抓住提起，再以另一手托住臀部，使兔身的重量大部分落在該手掌上。家兔的固定方法可根據(jù)需要而采用：①盒式固定，常用作兔耳血管注射、采血或觀察兔耳血管變化，兔腦內(nèi)接種等操作固定；②臺(tái)式固定，常用作兔靜脈采血或測量血壓、呼吸等實(shí)驗(yàn)和技術(shù)操作時(shí)的固定；③架式固定，常用于作熱原試驗(yàn)時(shí)固定。

貓的抓取方法、固定方法基本同家兔。

2023/1/3112圖1-6家兔的抓取方法圖1-8馬蹄形兔頭固定法圖1-7筒形兔頭固定器2023/1/3113圖1-9固定臺(tái)固定兔方法2023/1/3114

5、犬的抓取與固定

經(jīng)過馴服的犬抓取是很方便的，而未經(jīng)馴服的犬抓取時(shí)，要用特制的鉗式長柄犬夾夾住頸部，使犬頭向上，頸部拉直，再套上犬鏈。急性實(shí)驗(yàn)用犬，可用犬夾夾住犬頸部后,將它壓倒在地，由助手將其四肢固定好。實(shí)驗(yàn)需要麻醉時(shí)，把麻醉完善后的犬固定在手術(shù)臺(tái)或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上，固定的姿勢，依手術(shù)或?qū)嶒?yàn)的種類而定。一般采用仰臥位或俯臥位，前者便于進(jìn)行頸、胸、腹、股等部位的實(shí)驗(yàn)，后者便于進(jìn)行背、腦、脊髓實(shí)驗(yàn)。用犬頭固定器固定犬頭。

2023/1/3115圖1-10犬嘴的捆綁方法2023/1/3116

抓取豬時(shí)，一人從背后緊抓豬的兩耳將其提起，使其臀部著地，兩腿膝部合攏將其軀干夾住。

實(shí)驗(yàn)中如需分離豬股靜脈取血、注射或輸液時(shí)，或要在豬腹部或頸部操作時(shí)，可將豬仰放在“v字型槽內(nèi)進(jìn)行固定，也可用木制三角固定架和帆布吊兜來固定小型豬。

6、豬的抓取固定方法2023/1/3117圖1-11豬的三角架固定圖1-12豬的固定帶懸吊固定圖1-13豬固定帶2023/1/3118二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)、標(biāo)記、

分組和去毛方法

（一）編號(hào)和標(biāo)記方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，為了使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體間或組間區(qū)別開來，便于對每個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的反應(yīng)情況進(jìn)行觀察，必須對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)、標(biāo)記。標(biāo)記的方法很多，但基本原則是：

號(hào)碼清楚、耐久、簡便、易認(rèn)和適用。下面介紹幾種常見標(biāo)記方法：2023/1/3119

染色法是用化學(xué)劑在動(dòng)物身體明顯部位如被毛、四肢等處進(jìn)行涂染，或用不同顏色等來區(qū)別各組動(dòng)物，是實(shí)驗(yàn)室最常用、最容易掌握的方法。常用的標(biāo)記溶液有：①3％-5％苦味酸溶液（黃色）；②0.5％中性紅或品紅溶液（紅色）；③2％硝酸銀溶液，(咖啡色，涂后需光照10min)；④煤焦油酒精溶液（黑色）；⑤龍膽紫溶液（紫色）。

1.臨時(shí)性標(biāo)記

1）染色法

標(biāo)記時(shí)，用標(biāo)記筆蘸取上述溶液，在動(dòng)物體表不同部位涂上斑點(diǎn)，以示不同號(hào)碼。編號(hào)的原則是：先左后右，從前到后。一般把涂在左前肢上的記為1號(hào)，左側(cè)腹部為2號(hào)，左后肢為3號(hào)，頭頂部為4號(hào)，腰背部為5號(hào)，尾基部為6號(hào)，右前肢為7號(hào)，右側(cè)腰部為8號(hào)，右后肢為9號(hào)。若動(dòng)物編號(hào)超過10或更大數(shù)字時(shí)，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個(gè)位數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)。這種交互使用可編到99號(hào)。例如把紅色的記為十位數(shù)，黃色記為個(gè)位數(shù)，那么右后腿黃斑，頭頂紅斑，則表示是49號(hào)鼠，以此類推。

2023/1/3121圖2-1小鼠和大鼠標(biāo)號(hào)圖式2023/1/3122

染色法多用于實(shí)驗(yàn)周期較短，動(dòng)物數(shù)量不多的情況。這種方法標(biāo)號(hào)簡單，動(dòng)物無疼痛和損傷，但由于動(dòng)物之間互相摩擦、舔毛，尿、水浸漬被毛或脫毛，或因日久顏色自行消退等原因，不宜用于長期的實(shí)驗(yàn)。此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白色家兔。

2）涂漆或貼膠布

用油漆在動(dòng)物角或體表涂漆進(jìn)行標(biāo)記，或用膠布貼在動(dòng)物腿或翅上進(jìn)行標(biāo)記，也都是效果較好的臨時(shí)性標(biāo)記方法。

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2.半永久性標(biāo)記

1)掛牌法

掛牌法可用來標(biāo)記多種動(dòng)物，并多數(shù)將塑料、鋁或鋼片制成的牌固定在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耳朵內(nèi)側(cè)面上作為標(biāo)記。一般用于兔、豚鼠標(biāo)記。犬、猴、貓等動(dòng)物有時(shí)可掛在頸部或籠箱或鏈條上。

2)戴項(xiàng)圈法

先將號(hào)碼沖壓在圓形或方形鋁或不銹鋼制作的金屬牌上，長期使用不生銹。然后，將標(biāo)有號(hào)碼的金屬薄片固定在拴動(dòng)物的皮帶圈上，將此圈固定在動(dòng)物頸部。

2023/1/31243.永久性標(biāo)記

1．烙印法

烙印法是用刺號(hào)鉗或燒紅的鐵烙將號(hào)碼烙壓在動(dòng)物無體毛或明顯部位，如耳、面鼻部和四肢部位等。然后用以酒精為溶劑的染料涂布。此類方法應(yīng)注意烙號(hào)部位的污染和預(yù)防感染。

2．打耳孔法

打耳孔法是專用于動(dòng)物編號(hào)而直接在動(dòng)物耳朵上打孔或打成缺口編號(hào)的方法，用剪刀將耳緣剪缺口也可代替此方法。由打孔的位置和孔的數(shù)量來標(biāo)記。打孔法應(yīng)注意防止孔口愈合，可使用滑石粉涂抹在打孔局部。

2023/1/3125圖2-2打耳孔標(biāo)記法2023/1/31263．針刺法

人工針刺號(hào)常用于兔的標(biāo)記，先用手拔去兔耳的被毛，人工針刺號(hào)碼，刺后涂以酒精黑墨即可。目前有市售的兔用打號(hào)器，原理與此相同，附帶有不同數(shù)字和符號(hào)的針刺字號(hào)。可根據(jù)需要選用。字號(hào)安裝在打號(hào)器上打號(hào)后，用黑墨涂在打號(hào)局部，數(shù)天后黑墨浸入皮下，顯示出藍(lán)黑色字號(hào)。

一般來說，小型動(dòng)物適宜用打耳孔法和染色法，中型動(dòng)物適用掛牌法、針刺法和烙印法。

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（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被毛的去除方法

動(dòng)物被毛常影響實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果的觀察，因此實(shí)驗(yàn)中常需去除或剪短動(dòng)物的被毛。方法有四種：

1．剪毛法動(dòng)物急性實(shí)驗(yàn)中常用此法。

2．拔毛法兔耳緣靜脈注射或取血時(shí)以及給大、小白鼠作尾靜脈注射時(shí)常用此法（液體石蠟,凡士林）

3．剃毛法大動(dòng)物作慢性手術(shù)時(shí)常用此法。

4．脫毛法一般大動(dòng)物作無菌手術(shù)的術(shù)野準(zhǔn)備或觀察動(dòng)物皮膚血液循環(huán)和病理變化時(shí)常采用此法。

2023/1/3128常用的脫毛劑配方：

①硫化鈉3g、肥皂粉1g，淀粉7g，加水適量調(diào)成糊狀；

②硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油5g、硼砂1g，加水75ml，調(diào)成稀糊狀；

③硫化鈉8g、溶于100ml水中；以上脫毛劑配方適用于家兔、大、小白鼠等小動(dòng)物的脫毛。

④硫化鈉l0g、生石灰15g，溶于100ml水內(nèi)，此配方適用于犬等大動(dòng)物的脫毛。

2023/1/3129三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法

在一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，特別是手術(shù)等實(shí)驗(yàn)，為了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，減少動(dòng)物的掙扎和保持安靜，便于操作，常對動(dòng)物采用必要的麻醉。此外，從人道主義角度，麻醉也是動(dòng)物保護(hù)所必須采取的措施。由于動(dòng)物種屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和選用麻醉劑亦有不同。

2023/1/3130（一）動(dòng)物麻醉前的準(zhǔn)備與處理

1．麻醉前的準(zhǔn)備

①實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食，一般在麻醉前12h禁食較好；②大動(dòng)物(犬、羊、豬、猴)實(shí)驗(yàn)前，必要時(shí)可給予一定量的安定劑和阿托品類藥物，以減輕動(dòng)物的過度緊張和減少唾液的分泌，利于氣管插管的操作；③需要時(shí)，在試驗(yàn)的部位進(jìn)行備皮等。

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2．麻醉方法的選擇

(1)動(dòng)物種類與麻醉方法的選擇：動(dòng)物的種類不同，選擇麻醉方法也不盡相同，比如鼠類動(dòng)物一般都選擇腹腔麻醉、吸入性麻醉；而兔、犬、羊、猴等都比較適合靜脈麻醉。

(2)實(shí)驗(yàn)類型與麻醉方法的選擇：實(shí)驗(yàn)時(shí)間短，就可以考慮給予吸入性麻醉或短效靜脈麻醉等。如果實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長，就要選擇麻醉藥物和麻醉方法都比較長的辦法。如果實(shí)驗(yàn)時(shí)間很長，選擇靜脈輸液連續(xù)麻醉比選擇肌肉和腹腔注射麻醉更好。因?yàn)殪o脈麻醉可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)間的長短繼續(xù)給藥，延長麻醉時(shí)間。2023/1/3132（二）常用的麻醉劑

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。

1.揮發(fā)性麻醉劑

這類麻藥包括乙醚、氯仿等。乙醚是常用的吸入麻醉劑，乙醚揮發(fā)性很強(qiáng)，有特殊的氣味，為易燃品，適用于各種動(dòng)物(雞除外)，乙醚的作用是抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。2023/1/3133

乙醚的特點(diǎn)是安全范圍大，肌肉能完全松弛，對肝和腎的毒性較小，麻醉的誘導(dǎo)期和蘇醒較短，動(dòng)物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其副作用是對呼吸道和結(jié)膜刺激性強(qiáng)，胃腸道反應(yīng)強(qiáng)，局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，易發(fā)生呼吸道阻塞，使用時(shí)應(yīng)小心。

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2.非揮發(fā)性麻醉劑

這類麻醉劑種類較多，分為全身麻醉劑和局部麻醉劑。全身麻醉劑包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙酯和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時(shí)間，麻醉過程較平穩(wěn)，動(dòng)物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點(diǎn)是蘇醒較慢。

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1）全身麻醉劑

(1)戊巴比妥鈉：為中效巴比妥類藥物。戊巴比妥鈉是最常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產(chǎn)品，使用時(shí)應(yīng)注意藥品質(zhì)量。

(2)硫噴妥鈉：

硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓿中保存。其水溶液不穩(wěn)定，故必須臨時(shí)配制，常配濃度為1％～5％，在4℃冰箱中保存，在室溫中則只能保存24h。該藥麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間短，一次用藥僅可維持?jǐn)?shù)分鐘。因此，一般用作為誘導(dǎo)麻醉或基礎(chǔ)麻醉。其副作用：對呼吸系統(tǒng)有明顯的抑制作用，不宜與嗎啡合用。

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(3)氯胺酮：為中效巴比妥類藥物，常用其鹽酸鹽。靜脈或肌肉給藥后起效快，但維持時(shí)間較短，一般僅10～20min。為了延長時(shí)間，可重復(fù)給藥。其副作用是心率加快，血壓升高，有時(shí)還可引起動(dòng)物嘔吐等。

(4)水合氯醛：

此藥為無色透明棱柱狀結(jié)晶，有穿透性的臭氣及腐蝕性苦味。其溶解度較小，常配濃度為5％-10％。配制后的溶液易沉淀，用時(shí)先在水浴鍋中適量加熱，促其溶解。作用特點(diǎn)與巴比妥類藥物相似，是一種安全有效的鎮(zhèn)靜催眠藥，能起到全身麻醉作用，其麻醉量與中毒量很接近，故安全范圍小，使用時(shí)應(yīng)注意。其副作用為對皮膚和粘膜有較強(qiáng)的刺激作用。2023/1/3137

(5)氨基甲酸乙酯(烏拉坦)：此藥是比較溫和的麻醉藥，安全度大。多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可使用，更適用于小動(dòng)物。一般用作基礎(chǔ)麻醉，如實(shí)驗(yàn)全部過程都用此藥麻醉時(shí)，動(dòng)物保溫尤為重要。使用時(shí)常配成20％-25％水溶液。犬、貓、兔直腸灌注1.5g／kg體重；皮下、靜脈、腹腔注射0.75-1g／kg體重。當(dāng)與水合氯醛按1∶1比例合并麻醉時(shí)，效果更好。但在作靜脈注射時(shí)必須溶在生理鹽水中，配成5％或10％的溶液，即每kg體重注射10-20ml。蛙類：2g／kg體重，由背部淋巴囊注射。鳥類：1.25g／kg體重，由肌肉注入。鼠：1.5-2g／kg體重，由腹腔注射。2023/1/3138

(6)異戊巴比妥鈉：常配成5％～10％的水溶液，作用和戊巴比妥鈉相似。使用劑量和方法：犬、貓、兔腹腔和肌肉注射80-100mg／kg體重；靜脈注射40-50mg／kg體重；直腸灌注100mg／kg體重。鼠：腹腔注射100mg／kg體重。2023/1/3139

2）局部麻醉劑

(1)普魯卡因：

為對氨苯甲酸酯，是無刺激性的快速局部麻醉藥。皮下注射后1-3min內(nèi)產(chǎn)生麻醉，可維持30-45min。它可使血管輕度舒張，易被吸收入血而失去藥效。在溶液中加入少量腎上腺素(每100ml加入0.1％腎上腺素0.2-0.5ml)能使局麻醉時(shí)間延長至1-2h。常用1％-2％鹽酸普魯卡因溶液阻斷神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，劑量應(yīng)根據(jù)手術(shù)范圍和麻醉深度而定，其副作用：在大量藥物被吸收后，表現(xiàn)出中樞神經(jīng)系統(tǒng)先興奮后抑制。此作用可用巴比妥類藥物預(yù)防。

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(2)利多卡因：常用于表面、浸潤、傳導(dǎo)麻醉和硬脊膜外腔麻醉。利多卡因的化學(xué)結(jié)構(gòu)與普魯卡因不同，其作用效力和穿透力均比普魯卡因強(qiáng)兩倍，作用時(shí)間也較長。阻斷神經(jīng)纖維傳導(dǎo)及粘膜表面麻醉濃度為1％～2％。通常用0.5％～1％的濃度。

(3)的卡因：的卡因的化學(xué)結(jié)構(gòu)與普魯卡因相似，能穿透粘膜，作用迅速，1-3min生效，持續(xù)60-90min。其局麻作用比普魯卡因強(qiáng)10倍，吸收后的毒性作用也相應(yīng)加強(qiáng)，

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3.中藥麻醉劑

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)有時(shí)也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不選用這類麻醉劑進(jìn)行麻醉。（三）常用麻醉藥物的用法與用量常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全身麻醉藥的用法與用量見下表。常用麻醉藥的用法與用量麻醉藥名適用動(dòng)物給藥途徑劑量(mg/kg)常配濃度(%)用藥量(ml/kg)麻醉維持時(shí)間

戊巴比犬,貓,兔靜脈3031.02~4h,中途加

妥鈉腹腔40~5031.4~1.71/5量，可多豚鼠腹腔40~5022.0~2.5維持1h以上大小鼠腹腔4522.3

鳥類肌肉50~10022.5~5.0

氨基甲犬,貓,兔腹腔,靜脈750~1000253~42~4h,主要適

酸乙酯豚鼠肌肉1350207.0用于小動(dòng)物。(烏拉坦)

大,小鼠肌肉1350207.0有時(shí)可降低血鳥類肌肉1250206.3壓蛙類皮下淋巴囊2000mg/kg202~3ml/只或400~600mg/只

異戊犬,貓,兔靜脈40~5050.8~1.0

巴比妥肌肉,腹腔80~100100.8~1.0

鼠類直腸100101.04-6h

腹腔100101.0硫噴妥鈉犬,貓,兔靜脈,腹腔25~5021.3~2.515~30分,效力大白鼠靜脈,腹腔50~10015.0~10強(qiáng),宜慢注射

氯仿各種動(dòng)物吸入*實(shí)驗(yàn)過程中一直要吸入麻醉藥維持，毒性大

乙醚各種動(dòng)物氣管內(nèi)插管吸入*實(shí)驗(yàn)中一直要吸入麻醉藥維持2023/1/3143（四）麻醉深度的判定和麻醉后動(dòng)物護(hù)理

麻醉深度常用判定指標(biāo)

輕度麻醉

中度麻醉（最佳麻醉）

深度麻醉呼吸表現(xiàn)不規(guī)則，由痛反射

規(guī)則的胸腹式呼吸,呼吸腹式呼吸,換氣量可致呼吸數(shù)↑數(shù)、換氣量↓明顯↓循環(huán)表現(xiàn)心率↓，血壓↓血壓、心率一定

心率↓，血壓↓由痛反射可致心率↑眼的表現(xiàn)有眼球運(yùn)動(dòng),眼瞼,對光眼球置中央或靠近中央,眼瞼對光,角膜反射反射眼球向內(nèi)下方,瞳眼瞼反射遲鈍,對光反射消失瞳孔散大,角膜孔收縮,結(jié)膜露出,流淚

亦遲鈍，瞳孔稍開大干燥口腔反射

尚有咽下、喉頭反射

無

無肌松弛

有

腹肌明顯

腹肌異常運(yùn)動(dòng)其他表現(xiàn)

流涎、出汗，分泌多，內(nèi)臟牽引引起的迷走神排便、排尿經(jīng)反射，收縮反射消失

2023/1/3144四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，需將藥物通過一定的途徑給入到動(dòng)物體內(nèi)，才能觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對藥物的反應(yīng)。給藥的途徑和方法是多種多樣的，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑢?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、敏感途徑和藥物類型等情況而定。

2023/1/3145（一）皮內(nèi)注射法

兔、豚鼠和大鼠的皮內(nèi)注射部位均為背部脊柱兩側(cè)的皮膚。注射前一天，將動(dòng)物被毛用脫毛法脫凈。注射時(shí)，皮內(nèi)注射針頭的孔朝上與皮膚平行刺入皮內(nèi)(表皮與真皮之間)，然后推液。表皮與真皮之間結(jié)構(gòu)致密，當(dāng)溶液注入皮內(nèi)時(shí)，可見到皮膚表面馬上會(huì)鼓起一小鼓泡，形成皮丘(白色、橘皮樣)，同時(shí)因注射部位局部皮膚缺血呈蒼白色，皮膚上的毛孔極為明顯。此小泡如不很快消失，則證明注射液確實(shí)注入皮內(nèi)，若很快消失，就可能注在皮下，應(yīng)重?fù)Q部位注射。

注射量：小鼠最多不得超過0.05ml；豚鼠、大鼠、兔一般為0.1ml。2023/1/3146（二）皮下注射法

注射針頭進(jìn)入皮下(真皮下)，若針頭能自由撥動(dòng)無牽阻，注入注射液后形成小泡，則皮下無誤。由于皮下組織較松，注射液很快擴(kuò)散，一定時(shí)間小泡可消失。皮下注射進(jìn)針方法：

①通過腹中線，進(jìn)入對側(cè)皮下注射，因腹中線皮膚致密，較緊，注射液不易隨針頭拔出時(shí)由針孔逸出，注射完畢可明顯見到注射后形成的小包到腹中線即阻住。

②通過后腿肌肉進(jìn)入皮下注射法：此法小鼠常用。將針頭由鼠蹊部刺入大腿肌肉內(nèi)平行上翹至皮下，然后推液。此法注射液也不易滲出。

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（三）腹腔注射法

注射液注入腹腔內(nèi)即擴(kuò)散。此法注射液也不易滲出。①通過腹中線，先至對側(cè)皮下，然后慢慢刺入腹腔，不得過深，使針頭緊靠腹壁，避免刺傷內(nèi)臟，然后推液。②由會(huì)陰處通過腹最下端肌肉刺入后進(jìn)入腹腔，此法小鼠常用，注射液不易逸出。

注射量：小鼠一般為0.5～1ml，豚鼠、兔一般為5m1。2023/1/31484--14--22023/1/3149（四）肌肉注射法

肌肉注射較皮下和腹腔注射用得少，但當(dāng)給動(dòng)物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，常采用肌肉注射。肌肉注射部位一般采用臀部。注射時(shí)，將臀部注射部位被毛剪去(小動(dòng)物可不剪毛)。注射器連6號(hào)半針頭，由皮膚表面垂直刺入肌肉，回抽一下無回血，即可注射。一般犬等大動(dòng)物均采用此法。給小鼠、大鼠等小動(dòng)物作肌肉注射時(shí)，用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚，右手取連有5號(hào)半針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將藥液注入。

2023/1/3150（五）靜脈注射法

1．小鼠、大鼠尾靜脈注射方法

將鼠裝入固定架內(nèi)，使鼠尾外露。用酒精棉球擦拭尾巴，可見到兩側(cè)靜脈，注射前應(yīng)確認(rèn)注射針筒內(nèi)無氣泡，針頭由尾尖端開始，順血管方向刺入。當(dāng)針頭進(jìn)入靜脈有滑潤感，試推液體順利無阻，則證明正確刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)把針頭和鼠尾一起固定好，不要晃動(dòng)，緩緩?fù)埔?。如果針芯推不?dòng)，尾部膨脹發(fā)白，拔出針頭時(shí)無血流出，說明針頭沒有刺入靜脈內(nèi)；或拔出針頭時(shí)有血流出，而尾部膨脹發(fā)白，針芯推不動(dòng)，則說明針頭刺穿靜脈又進(jìn)入皮下，均應(yīng)重新注射。注射量：一般為0.5ml為宜。

2023/1/3151圖4-3小鼠、大鼠尾靜脈注射方法

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2．兔耳靜脈注射方法

將兔置固定盒內(nèi)或由助手固定好動(dòng)物，操作者將注射部位的毛拔去并用酒精棉輕輕擦拭耳部外緣，靜脈即明顯可見。先由耳尖部靜脈注射，若失敗，再逐步向耳根移動(dòng)重新注射。注射完畢抽出針頭時(shí)，應(yīng)壓迫針孔，避免出血。

3．豚鼠靜脈注射方法

①腿部靜脈注射：由助手抓握固定好動(dòng)物，操作者左手握住后腿，右手用手術(shù)彎剪，在后小腿根部水平方向剪一缺口，揭起皮膚，靜脈外露，即可進(jìn)行注射；②趾間靜脈注射：以酒精棉輕擦豚鼠腳趾，使趾間靜脈顯露，即可進(jìn)行注射。圖4-5兔耳靜脈注射方法

圖4-4家兔耳部血管分布

圖4-6犬后肢外側(cè)小隱靜脈注射方法

圖4-7犬后肢外側(cè)小隱靜脈血管走行圖4-8犬前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈注射方法

2023/1/3155（六）胃內(nèi)灌注法

1．大鼠與小鼠的胃內(nèi)灌注法

用左手拇指和食指抓住鼠兩耳和頭部皮膚，其他3指抓住背部皮膚，將鼠握持在左手掌內(nèi)，大鼠用左手拇指和食指固定頭部和一側(cè)前肢，中指和無名指固定另一肢，小鼠用拇指和食指固定頭部，中指固定一側(cè)前肢，無名指和小指固定住一側(cè)后肢。使動(dòng)物腹部朝上，頭部向上有一個(gè)傾斜度。固定好動(dòng)物后，右手持注射器，使灌胃針頭沿著鼠嘴側(cè)角通過食管進(jìn)入胃內(nèi)，即可灌注，如很通暢，則說明針頭確已進(jìn)入胃內(nèi)；如果不通暢，動(dòng)物掙扎或者發(fā)生嘔吐，則表示針頭沒有進(jìn)入胃內(nèi)，應(yīng)將針頭拔出重操作。

圖4-9小鼠灌胃方法圖4-10大鼠灌胃方法2023/1/31572．兔與貓的胃內(nèi)灌注法

助手將動(dòng)物固定好，用開口器放人上下腭之間，動(dòng)物即咬住開口器。實(shí)驗(yàn)者用左手抓住動(dòng)物嘴部，固定好開口器，然后用右手取適宜粗細(xì)的導(dǎo)管，由開口器中央小孔處插入，導(dǎo)管經(jīng)口沿頜后壁慢慢送入食管內(nèi)再進(jìn)入胃內(nèi)。導(dǎo)管插入時(shí)動(dòng)作要輕、慢，防止插入氣管。插入后，可用一根動(dòng)物毛在導(dǎo)管口外試一下，觀看動(dòng)物呼吸時(shí)，毛有沒有擺動(dòng)現(xiàn)象，如果沒有，即說明導(dǎo)管插入正確。即可在導(dǎo)管口處連接注射器，慢慢將藥液推灌入胃。

2023/1/3158圖4-11兔的灌胃方法

圖4-12兔、貓灌胃用張口器與灌胃管2023/1/31593．犬的胃內(nèi)灌注法

將犬固定好，用紗帶綁住犬嘴，左手握住犬嘴部，右手持灌胃管，用溫水濕潤胃管后用右手中指將犬右側(cè)的嘴角輕輕翻開，摸到最后一對大臼齒，齒后有一空隙，中指固定在這空隙處，然后用右手拇指和食指將灌胃管插入此空隙，并經(jīng)口順食管方向送人胃內(nèi)。如果胃管送入順利，則將胃管送入約20cm時(shí)，即可進(jìn)入胃內(nèi)，不必繼續(xù)往里插送。先用裝有溫水的注射器由灌胃管口試灌注一些，如果水不從犬嘴流出，灌注很通暢，說明進(jìn)入胃內(nèi)，即可將藥液用注射器由灌胃口慢慢灌注入胃。一次灌液量不能超過200ml。2023/1/3160圖4-13犬的灌胃方法五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種體液的采集方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需要采集各種體液有血液、淋巴液、消化液、腦脊髓液、尿液、精液、陰道內(nèi)液體等。下面是幾種主要體液的采集方法。

（一）血液采集

1.大、小鼠的采血方法

1）鼠尾靜脈采血法

將鼠置于固定盒內(nèi)，固定好，露出鼠尾用手輕揉或用溫水(45℃左右)加溫，也可用二甲苯涂擦鼠尾，使尾靜脈充血后，用剪刀剪去尾尖，尾靜脈血即可流出，用手輕輕的從尾根部向尾尖部推擠，即可收集到少量血液。2023/1/3162

實(shí)驗(yàn)時(shí)如果需要間隔一定時(shí)間，反復(fù)采集少量血液，則每次采血時(shí),可將鼠尾剪去一小段；取血后，用棉球壓迫止血，并用液體火棉膠涂于傷口處保護(hù)傷口。也可采用切割尾靜脈取血,其方法是用鋒利刀片在尾靜脈上切開一小口，每次取少量血液，兩側(cè)尾靜脈可交替切割。切割后用棉球壓迫止血，傷口短時(shí)間內(nèi)即可結(jié)痂痊愈。這種方法比較適合大鼠的采集血液。2023/1/3163

2）眼眶動(dòng)脈和靜脈采血法

用左手抓住鼠，拇指和食指將鼠頭部皮膚捏緊，使鼠眼球突出。右手取一彎小鑷子在鼠右側(cè)眼球根部將眼球摘去，并立即將鼠倒置，頭朝下，此時(shí)眼眶內(nèi)動(dòng)、靜脈很快流血，將血滴入預(yù)先加有抗凝劑的玻璃器皿內(nèi)，直至動(dòng)、靜脈不再流血為止。此種采血法在采血過程中動(dòng)物沒有死，心臟跳動(dòng)在繼續(xù)，因此采集到的血量比其他方法要多，若實(shí)驗(yàn)時(shí)需多量血液，此種方法最好。

3）后眼眶靜脈叢采血法

取血時(shí)，徒手抓取動(dòng)物，即左手從背部抓住動(dòng)物，用左手的拇指和食指、中指握住動(dòng)物頸部，利用對頸部所加的輕壓力，使頭部靜脈淤血，在突出的眼球旁分辨出后眼眶靜脈。

穿刺部位是在眼球和眼眶后界之間的后眼眶靜脈叢。用10％可卡因局部麻醉，右手持消毒過的毛細(xì)吸管吸取抗凝劑濕潤其內(nèi)壁，從內(nèi)側(cè)眼角將吸管轉(zhuǎn)向前，并輕壓刺入Tenon筋膜，然后由鼻側(cè)眼眶平行地對喉頭方向推進(jìn)，深約4-5mm，到達(dá)后眼眶靜脈叢，血液自然進(jìn)入吸管內(nèi)。采集到所需要的血液量后，即除去加于頸部的壓力，同時(shí)抽出毛細(xì)吸管。

此種采血方法可以采集較多量的血液，動(dòng)物休息數(shù)分鐘后，可繼續(xù)在同一穿刺孔重復(fù)采集血液。2023/1/3165圖5-1鼠尾靜脈采血法圖5-2大鼠后眼眶靜脈叢采血法

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4）心臟采血法

固定板法：將鼠仰臥固定在固定板上，左側(cè)心區(qū)部位剪毛，碘酒、酒精消毒。左手在鼠左側(cè)3-4肋間摸到心搏，或手持裝有小號(hào)針頭的注射器，選擇心搏最強(qiáng)處穿刺，當(dāng)針頭正確刺入心臟，血液依靠心搏的力量自然進(jìn)入注射器，即可采集血液。

徒手法：在熟練情況下，一人徒手即可采血，即左手拇指和食指握住頸部，小拇指壓住鼠尾使之仰臥在左手心內(nèi)，右手持注射器在左心區(qū)經(jīng)消毒處理的部位，心搏最強(qiáng)處刺入心臟，即可采集血液，此法最適合小白鼠的心臟采血。

2023/1/3167圖5-3小鼠心內(nèi)取血方法2023/1/3168

5）斷頭采血法

操作者左手拇指和食指握住大、小白鼠頸部，頭部朝下，用利剪在鼠頸頭間1／2處剪斷，提起動(dòng)物，將血液滴入放有抗凝劑的容器內(nèi)。小鼠可采血1ml左右，大鼠可采血10ml左右。

2023/1/31692.豚鼠的采血方法

1）心腔穿刺采血法

將豚鼠仰臥固定于小手術(shù)臺(tái)上，左側(cè)心區(qū)部的剪毛、消毒。觸摸心跳最明顯處進(jìn)針穿刺。進(jìn)針角度與胸部垂直，當(dāng)針頭接近心臟時(shí)，就會(huì)感到心臟的跳動(dòng)，再向里穿刺就可進(jìn)人心室。將注射器抽成負(fù)壓，血不斷地自動(dòng)流入注射器內(nèi)。采血時(shí)動(dòng)作要迅速，縮短留針時(shí)間，以防血凝。隔周可重復(fù)進(jìn)行心腔穿刺采血，此法也適用于兔。

2）耳緣剪口采血法

消毒耳緣后，用二甲苯反復(fù)擦拭使血管充分充盈，然后用刀片割破耳緣血管，血液會(huì)從血管中流出，此法采血0.5m1左右。

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3.兔的采血法

1）耳(中央)動(dòng)脈采血法

將兔置于固定器內(nèi)固定好，用手輕揉或用加熱的方法使兔耳充血，可發(fā)現(xiàn)在其中央有一條較粗、顏色較鮮紅的血管，即為耳中央動(dòng)脈，左手固定兔耳，右手持注射器在中央動(dòng)脈末端，使針頭沿動(dòng)脈平行方向穿刺入動(dòng)脈，血液即可進(jìn)入注射器內(nèi)。取血后作壓迫止血。

另一方法是：待耳中央動(dòng)脈充血后，在靠耳尖中央動(dòng)脈分支處，用鋒利的手術(shù)刀片輕輕切一小口，血液就會(huì)從切破的血管中流出，立即取加有抗凝劑的容器在血管破口處采血，然后壓迫止血。

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2）兔耳緣靜脈采血法

將動(dòng)物固定好后，用手輕揉動(dòng)物耳緣，待耳緣靜脈充血后，在靠耳尖部的靜脈處，用針頭刺破靜脈，血液即可流出，也可用5號(hào)半針頭沿耳緣靜脈遠(yuǎn)端(末梢)刺入血管，抽取血液，取血后壓迫止血。一次可采血5-10ml。此法也適用于豚鼠，

2023/1/3172圖5-4兔耳中央動(dòng)脈取血方法圖5-5兔耳緣靜脈取血方法2023/1/3173

3）兔頸動(dòng)(靜)脈采血法

首先做頸動(dòng)(靜)脈分離手術(shù)。采血前將動(dòng)物麻醉固定后，暴露頸部皮膚，按局部無菌法要求做頸側(cè)皮膚切開，分離出頸動(dòng)(靜)脈。根據(jù)所需血量可用連有6號(hào)針頭的注射器，與血管平行方向向心端將刺入血管即可見到動(dòng)脈血流入注射器，也可在動(dòng)脈上作一切口；用細(xì)橡皮管把血液引流到試管里。動(dòng)脈采血時(shí)要注意止血，可用紗布或動(dòng)脈夾止血。從頸靜脈采血時(shí)，將注射器針頭由近心端沿血管平行方向刺入，使注射針頭一直引深至頸靜脈分叉處，即可取血。取血后壓迫止血。

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4.犬和貓的采血法

1）前、后肢皮下靜脈采血法

此種方法主要是前肢的橈側(cè)皮靜脈和后肢外側(cè)的隱靜脈為采血部位。橈側(cè)皮靜脈位于前肢前部，在下1／3處向內(nèi)側(cè)走行，犬可側(cè)臥或站立固定，助手從犬的后側(cè)握住肘部。使皮膚向上牽拉和靜脈怒張，也可用橡皮條結(jié)扎使靜脈怒張。操作者位于犬的前面，注射器針頭由前腕的上1／3處刺入靜脈，直接抽取血液。抽時(shí)速度要稍慢，速度快針口容易吸著血管內(nèi)壁，血液不能進(jìn)入注射器。抽血液時(shí)應(yīng)解除靜脈加壓的手或橡皮管；采血后注意止血。

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2）股動(dòng)脈采血

本法為采集犬動(dòng)脈血最常用的方法。操作也較簡便。稍加訓(xùn)練的犬，在清醒狀態(tài)下將犬臥位固定于犬解剖臺(tái)上。伸展后肢向外伸直，暴露腹股溝三角動(dòng)脈搏動(dòng)的部位，剪去毛。用碘酒、酒精消毒。左手中指、食指探摸股動(dòng)脈跳動(dòng)部位，并固定好血管，右手取連有5號(hào)半針頭的注射器，針頭由動(dòng)脈跳動(dòng)處直接刺入血管，若刺入動(dòng)脈一般可見鮮紅血液流入注射器，有時(shí)還需微微轉(zhuǎn)動(dòng)一下針頭或上下移動(dòng)一下針頭，方見鮮血流入。有時(shí)往往刺入靜脈，必須重抽之，待抽血完畢，迅速拔出針，用干藥棉壓迫止血2-3min。2023/1/3176

3）心臟采血

本法最好在麻醉下進(jìn)行，馴服的犬不麻醉也行。將犬固定在手術(shù)臺(tái)上，前肢向背側(cè)方向固定，暴露胸部，將左側(cè)第3～5肋間的被毛剪去，用碘酒、酒精消毒皮膚。采血者用左手觸摸左側(cè)3～5肋間處，選擇心跳最明顯處穿刺。一般選擇背側(cè)方向垂直刺入心臟。采血者取連有6號(hào)半針頭的注射器，由上述部位進(jìn)針，并向動(dòng)物胸骨左緣外1cm第4肋間處?？呻S針接觸心跳的感覺，隨時(shí)調(diào)整刺入方向和深度，擺動(dòng)的角度盡量小，避免損傷心肌過重，或造成胸腔大出血。當(dāng)針頭正確刺入心臟時(shí)，血即可進(jìn)入注射器，可抽取多量血液。

4）頸靜脈采血法

將犬麻醉后固定，取側(cè)臥位，剪去頸部被毛，用碘酒、酒精消毒皮膚。將犬頸部拉直，頭盡量后仰。用左手拇指壓住頸靜脈入胸部的皮膚，使頸靜脈怒張，右手持注射器，針頭沿血管平行方向向心端刺入血管。采血后注意止血。采用這種方法可取較多量的血。

5）耳緣靜脈采血法

將犬在采血臺(tái)上固定，剪去耳尖部短毛，即可見到耳緣靜脈。揉擦耳朵待靜脈充血后，皮膚涂少許凡士林，在靠耳尖部的靜脈叢，用針頭刺破靜脈，血液即可流出，或持注射器用針頭刺入耳靜脈抽取血液。

2023/1/3178圖5-7犬頸靜脈取血方法圖5-8犬股動(dòng)脈取血方法不同動(dòng)物采血部位與血量的關(guān)系

采血量采血部位動(dòng)物

少量尾靜脈大鼠、小鼠耳靜脈兔、犬、貓、豬、山羊、綿羊眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠舌下靜脈犬腹壁靜脈青蛙、蟾蜍冠、腳蹼皮下靜脈雞、鴨、鵝

中量前或后肢皮下靜脈犬、猴、貓耳中央動(dòng)脈兔頸靜脈犬、貓、兔心臟豚鼠、大鼠、小鼠斷頭大鼠、小鼠翼下靜脈雞、鴨、鵝、鴿頸動(dòng)脈雞、鴨、鵝、鴿

大量股動(dòng)脈頸動(dòng)脈犬、貓、猴、兔心臟犬、猴、貓、兔、大鼠、小鼠頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊摘眼球大鼠、小鼠2023/1/3180（二）消化液采集

1．胃液

將灌胃管按胃內(nèi)注入方法進(jìn)行胃液采集，其方法是灌胃管由動(dòng)物口內(nèi)正確插入食管再進(jìn)入胃內(nèi)，胃液可自行流出，也可在灌胃管的出口端連接注射器，輕輕抽取，采集胃液，這種方法最適用于犬等大的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

2．胰液

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（犬）的十二指腸及與十二指腸連接的胰腺取出，并把胰腺向上翻過來，仔細(xì)分離到胰大管或胰小管。一般從胰大管采集胰液，在胰大管上插入適當(dāng)粗細(xì)的塑料管，就可采集到胰液。

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3．膽汁

一般采取手術(shù)收集。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹部剃毛消毒后，沿腹中線在劍突和臍之間作一切口，由于膽囊位置隱藏在肝的右外側(cè)葉和中央葉之間，應(yīng)將肝的右、中葉向外側(cè)推開，使膽囊完全暴露，然后分離輸膽總管。由輸膽總管向膽囊方向插入一根細(xì)塑料管，輕輕壓迫膽囊，膽汁就會(huì)自然流出。也可做膽囊瘺管，這樣就可以長期的采集膽汁。

4．腸液和腹腔液

(1)腸液采集方法：采用無菌手術(shù)，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的小腸上作造瘺手術(shù)，把腸瘺管縫到腹壁肌上，瘺管口伸出到動(dòng)物腹部的皮膚外面。待傷口愈合后，即可從腸瘺管中采集腸液。

(2)腹腔液采集方法：小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌腹腔細(xì)胞的采集(ChambersTR法)可用輸入無菌鹽水再回收腹腔無菌液方法采集，用該法可采集80％～90％的腹腔液。采集方法為：

2023/1/3183①動(dòng)物麻醉后腹部剃毛消毒皮膚，用消毒巾擦干；②用無菌血管鉗小心提起皮膚，用注射器刺入腹腔下部，分別從三個(gè)方向注入無菌鹽水或培養(yǎng)液；③將動(dòng)物從頸部提起，如兔在兔固定架上則可以豎起在頸部用紗布條保護(hù)系好；④用無菌血管鉗將針頭夾住,拔去注射器,無菌鹽水洗液由針頭流出到消毒容器內(nèi)。

2023/1/31843.尿液采集

常用尿液采集的方法有3種：①用代謝籠收集采尿，但易為糞便污染和尿蒸發(fā)，尿量不準(zhǔn)確；②強(qiáng)制排尿法，按壓兩側(cè)腰背部或輕壓膀胱，如不成功可用細(xì)小導(dǎo)尿管或塑料管緩慢插入尿道至膀胱進(jìn)行導(dǎo)尿；③采用無菌手術(shù)法，制造輸尿管瘺和膀胱瘺，可長期采集尿液。

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1)代謝籠采尿法

將動(dòng)物放在特制的籠內(nèi)飼養(yǎng)，動(dòng)物排便時(shí)，可通過籠子底部的大小便分離漏斗，將尿液與糞便分開，達(dá)到采集尿液的目的。目前國內(nèi)常用的幾種大、小白鼠代謝籠，市場均有成品供應(yīng)，并有封閉式和開放式之分。

2023/1/31862023/1/3187

2)強(qiáng)制排尿法

(1)壓迫膀胱法：在實(shí)驗(yàn)研究中，有時(shí)為了某種實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，要求每間隔一定的時(shí)間收集一次尿，如每2h收集一次，以觀察藥物的排出等情況。此時(shí)用代謝籠分離器采集尿液，可能有時(shí)無尿，可采用人工從體外壓迫膀胱的方法來采集尿液。如在急性實(shí)驗(yàn)