人前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒分析檢測說明書

人前列腺素E2（PGE2)ELISA試劑盒解析檢測說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：48T25ng/L—800ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本前列腺素E2（PGE2)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人前列腺素E2（PGE2）水平。用純化的人前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2）,再與HRP標(biāo)志的前列腺素E2（PGE2）抗體結(jié)合，形成抗體—抗原—酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過完全沖洗后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)變成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)變成最后的黃色.顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2（PGE2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人前列腺素E2（PGE2）濃度.試劑盒組成120倍濃縮沖洗液20ml×1瓶7停止液3ml×1瓶2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品0。5ml×1(1600ng/L）瓶3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1．標(biāo)本收集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文件進(jìn)行，提取后應(yīng)趕忙進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能夠立刻進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)防備屢次凍融2．不能夠檢測含NaN3的樣品，因NaN3控制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒供給原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可依據(jù)以下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ng/Ll3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2。加樣：分別設(shè)空白孔(空白比較孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其他各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品正確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，爾后再加待測樣品10μl（樣品最后稀釋度為5倍）.加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不波及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻.3。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4。配液:將20倍濃縮沖洗液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.沖洗：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿沖洗液，靜置30秒后棄去，這樣重復(fù)5次，拍干。6。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7。溫育：操作同3.沖洗：操作同5.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10。停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加停止液后15分鐘之內(nèi)進(jìn)行.注意事項(xiàng)：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中拿出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃沖洗液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,沖洗時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校正其正確性，以防備試驗(yàn)偏差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多,介紹使用排槍加樣.4．請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必然倍數(shù)（n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5)。5．封板膜只限一次性使用，以防備交錯(cuò)污染。6．底物請(qǐng)避光保存。7．嚴(yán)格依聽說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判斷一定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．全部樣品，沖洗液和各種荒棄物都應(yīng)按傳染物辦理。9．本試劑不同樣批號(hào)組分不得混用。10。如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2—8℃.2．有效期:6個(gè)月Theperformanceofkit：1sensitivity:minimumdetectionconcentrationislessthan1standard。Linearityofdilution。SamplelinearregressionandtheexpectedconcentrationcorrelationcoefficientRvalueis0.990.2：nospecificreactionwithothercytokines。3repeatability:plate，platebetweenthecoefficientsofvariationwerelessthan10％。HumantypeIIIprocollagenaminoterminalpeptideELISAkitsteps:1beforeuse,allreagentsandmixing。Donotallowliquidtoproducealargenumberofbubbles，soastoavoidaddingalargenumberofbubbles,resultingintheadditionoftheerror.2accordingtodeterminethenumberofsamplenumberplusstandardstripnumber。Eachstandardandblankholeisrecommendedtodothehole。Eachsamplecanbemadeaccordingtoitsownquantity,andcanbeusedasaholeinthehole。3dilutedafterstandard50ulinreactionhole，addedtothesample50ULinreactionholetobemeasured。Immediatelyjoinedthe50ULantibodybiotin。Coverthemembraneplate,gentlyoscillatingmixing，37degreesCelsiusfor45minutes。4leftholeliquid，eachholefilledwithwashingliquid，oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times.Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce。5perholeaddingchainaffinityenzyme-HRP100ul，gentlyoscillatingmixing,37degrees30minutesincubation.6leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid，oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Repeatthisoperation4times。Ifthewashingmachinewithwashing,washingtimesincreasedonce.7perholeaddingsubstrateA，B50ul,gentlyoscillatingmixing,37degrees5minutesincubation。Avoidlight。8removeELISAplate，quicklyadd50ulterminatedliquid，addingthestopsolutionimmediatelyafterthedeterminationresults.9oddeterminationofeachholeatthewavelengthof450nm。Theresultofjudgmentandanalysis:1,instrumentvalue:YuBo450nmELISAodreadtheholeontheinstrument2,totheODvalueasaverticalcoordinate(y），correspondingotstandardconcentrationsasahorizontalcoordinate(x），dohavecorrespondingcurve,sampleotcontentcanbeaccordingtotheODvaluebystandardcurveconversionoutcorrespondingconcentration，multipliedbythedilutionmultiple;orwiththestandardconcentrationandtheODvaluecalculatedtheregressionequationo