一、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)觀察

第一次實驗

細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)觀察介紹實驗室有關(guān)的內(nèi)容實驗內(nèi)容實驗小結(jié)

228963372/1/20231學(xué)習(xí)要求1、初步了解病原生物學(xué)和免疫學(xué)實驗技術(shù)的概念和內(nèi)容；2、熟悉病原生物學(xué)實驗室的注意事項；3、掌握顯微鏡的使用和保護方法；4、掌握細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)；5、掌握細(xì)菌的革蘭染色法；6、了解細(xì)菌的運動特點。2/1/20232介紹實驗室有關(guān)的內(nèi)容

1、總論微生物實驗寄生蟲實驗免疫學(xué)技術(shù)

2、實驗室注意事項評分標(biāo)準(zhǔn)清潔衛(wèi)生操作規(guī)程顯微鏡管理等2/1/20233實驗內(nèi)容1、顯微鏡使用和保護（錄像）2、細(xì)菌的鏡下形態(tài)觀察（學(xué)生操作）3、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（學(xué)生操作）4、革蘭染色（學(xué)生操作）5、細(xì)菌的動力觀察錄像（教師示教）

2/1/202342/1/20235實驗小結(jié)1、顯微鏡油鏡的使用和保護2、細(xì)菌的基本形態(tài)①球菌②桿菌③螺形菌

3、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)①莢膜②鞭毛③芽胞④菌毛4、細(xì)菌的革蘭染色法5、注意事項：評分、衛(wèi)生、操作、管理。2/1/20236end2/1/20237細(xì)菌的基本形態(tài)觀察(發(fā)片)1、球菌鏡下形態(tài)：①葡萄球菌②鏈球菌③肺炎鏈球菌④腦炎奈瑟菌2、桿菌鏡下形態(tài)：①大腸埃希菌②破傷風(fēng)梭菌③產(chǎn)氣莢膜梭菌④變形桿菌3、螺形菌革蘭染色片：

霍亂弧菌或水弧菌

2/1/20238細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)(示教片)1．肺炎球菌莢膜染色示教片（示莢膜）2．變形桿菌鞭毛染色示教片（示鞭毛）3．破傷風(fēng)梭菌芽胞染色或革蘭染色示教片（示芽胞）2/1/20239

細(xì)菌的革蘭染色革蘭染色法是細(xì)菌檢驗中最常用的一種染色法。利用革蘭染色法，可將細(xì)菌分為兩大類，有助于鑒別細(xì)菌和選擇用藥等。

1、革蘭染色法原理

2、革蘭染色法操作步驟

3、革蘭染色結(jié)果通過革蘭染色可以觀察到什么？細(xì)菌的形態(tài)、排列、莢膜、芽胞2/1/202310革蘭陰性菌因其細(xì)胞壁中肽聚糖含量少，結(jié)構(gòu)疏松，脂類物質(zhì)含量高而被酒精脫色，經(jīng)復(fù)染呈紅色。革蘭染色原理：革蘭陽性菌因細(xì)胞壁中含有大量的肽聚糖和磷壁酸，且結(jié)構(gòu)致密，可保留結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，并不被酒精脫色而顯示為紫藍色。2/1/202311

革蘭染色方法(錄像）

涂片自然干燥火焰固定染色染色過程：

已固定的涂片加結(jié)晶紫

1分鐘，水沖洗滴加碘液1分鐘，水沖洗95%酒精

20~30秒稀釋石炭酸復(fù)紅1分鐘，水沖洗待干鏡檢初染媒染脫色復(fù)染一般用室溫干燥，注意必須完全干燥后方可固定。涂片在酒精燈火焰上快速通過3～4次以固定細(xì)菌，并使其不易從玻片上脫落。注意不要將涂片直接放在火焰上烤，以免破壞細(xì)菌結(jié)構(gòu)。

2/1/202312

用滅菌的接種環(huán)取無菌生理鹽水1-2環(huán)，置于玻片中。接種環(huán)滅菌，待接種環(huán)冷卻后，挑取適量培養(yǎng)物混合于鹽水中，涂抹均勻使成一層薄膜（若檢材是液體則不必加生理鹽水）薄膜涂抹的面積約1.5×2.0cm

。按上法制備大腸桿菌涂膜。2/1/2023132/1/202314葡萄球菌（革蘭染色）2/1/202315葡萄球菌（革蘭染色）2/1/202316葡萄球菌電鏡照片2/1/202317鏈球菌（革蘭染色）2/1/202318鏈球菌（革蘭染色）2/1/202319鏈球菌電鏡照片2/1/202320奈瑟菌（革蘭染色）2/1/202321雙球菌（革蘭染色）2/1/202322雙球菌電鏡照片2/1/202323大腸埃希菌（革蘭染色）2/1/202324大腸埃希菌（革蘭染色）2/1/202325大腸埃希菌電鏡照片2/1/202326霍亂弧菌（革蘭染色）霍亂弧菌電鏡照片2/1/202327莢膜莢膜2/1/202328莢膜2/1/202329莢膜2/1/202330變形桿菌鞭毛染色（示鞭毛）

2/1/202331變形桿菌鞭毛電鏡照片（示鞭毛）

2/1/202332破傷風(fēng)梭菌（示芽胞）革蘭染色和芽胞染色2/1/202333破傷風(fēng)梭菌芽胞染色（示芽胞）

2/1/202334破傷風(fēng)梭菌革蘭染色（示芽胞）

2/1/202335破傷風(fēng)梭菌芽胞電鏡照片（示芽胞）

2/1/202336產(chǎn)氣莢膜梭菌革蘭染色（示莢膜）2/1/2023372/1/2023382/1/2023392/1/2023402/1/202341霍亂弧菌（革蘭染色）霍亂弧菌電鏡照片2/1/2023422/1/2023432/1/2023442/1/2023451、實驗時不遲到、不早退。2、實驗時要保持實驗室內(nèi)的整潔、安靜。3、正確使用顯微鏡，觀察完畢應(yīng)把鏡頭和載玻片上的鏡油擦凈。

4、各實驗小組的實驗用品、由各組保管使用，不得隨意與他組調(diào)換或挪用。如需補發(fā)或增添，應(yīng)說明原因。5、每次實驗后應(yīng)清點實驗器材、用品數(shù)量，如有遺失或損壞應(yīng)按規(guī)定賠償。動物及標(biāo)本要按規(guī)定處理，不可擅自拿走。6、實驗結(jié)束后，各組應(yīng)自覺清理實驗器材，值日生做好全室清潔工作，關(guān)好門窗、水電，經(jīng)指導(dǎo)教師檢查合格后方可離開實驗室。

1、要按時完成實驗報告。2、實驗報告要保證準(zhǔn)確、工整、美觀。3、實驗課結(jié)束要將實驗報告交病原生物學(xué)實驗室評分存檔。

1、操作考核。2、大體標(biāo)本考核。3、鏡下標(biāo)本考核。

病原