地貧基因診斷

地貧基因診斷我國(guó)和β地貧基因突變類型頻率ZhangJ,etal.Hemoglobin.2012Sep3.2021/4/272地中海貧血基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧

廣東8.532.54

廣西11.196.78

云南

四川14.71.9222.62.18

臺(tái)灣4.201.10

香港5.023.41Xu,etal.JClinPathol2004,57:517-22.

Cai,etal.ChiJEpidemiol2002,23:281-5.Zhao,etal.ChiJEpidemiol2011,32:352-6.2021/4/273α地貧基因分子基礎(chǔ)缺失型：常見(jiàn)（約占60%）非缺失型：少見(jiàn)（約占40%）2021/4/274α地貧基因分子基礎(chǔ)α1地貧（α

0地貧）：

16號(hào)染色體兩個(gè)α基因喪失;一個(gè)缺失，另一個(gè)點(diǎn)突變。

-α/-α或α

地α/α

地α

，--/αα。α2地貧（α+地貧）：

16號(hào)染色體一個(gè)α基因功能喪失。

-α/αα

或α地α/α

α。2021/4/275血紅蛋白H病:由于α基因3個(gè)缺失/突變，使過(guò)量的β珠蛋白肽鏈形成β4多聚體（HbH）胎兒水腫：4個(gè)α基因全部缺失/突變非缺失型α地貧α地貧基因分子基礎(chǔ)2021/4/276

我國(guó)非缺失型地貧常見(jiàn)基因類型：

2CD30GAG(Glu)UnstableHb2CD31AGGAAG(ArgLys)Splicingmutation2CD59GGCGAC(GlyAsp)UnstableHbHbWestmead2CD122CACCAG(HisGln)UnstableHb

HbQS2CD125CTGCCG(LeuPro)UnstableHbHbCS2CD142TAACAA(Gln)Terminatormutationα地貧基因分子基礎(chǔ)2021/4/277α

地貧臨床類型與基因類型的關(guān)系臨床基因靜止型-

α/αα輕型-

α

/-

α或--/αα中間型--/-

α

重型--/--2021/4/278β地貧基因分子基礎(chǔ)基因缺失：少見(jiàn)(僅見(jiàn)于:41-42)點(diǎn)突變：常見(jiàn)（約占99.5%）2021/4/279β地貧基因分子基礎(chǔ)2021/4/2710

β

地貧臨床類型與基因類型的關(guān)系臨床基因輕型β地/β（β雜合子）中間型β地/β地（β變異型純合子或雙重雜合子）重型β地/β地（β純合子或雙重雜合子）2021/4/2711地中海貧血基因診斷技術(shù)PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）反向點(diǎn)雜交（RDB）Southernblot限制性切酶譜分析多重連接酶依賴探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因測(cè)序2021/4/2712Genotypingofthe--SEAallelesbyGap-PCR

地貧基因診斷技術(shù)（Gap-PCR）2021/4/2713地貧基因診斷技術(shù)（ASO）2021/4/2714地貧基因診斷技術(shù)（ASO）2021/4/2715地貧基因診斷技術(shù)（RDB）2021/4/2716GenotypeFatherCDs41-42(CTTT)/NMotherIVS-2-654(CT)/NFetusCDs41-42/IVS-2-654NormalcontrolN/N地貧基因診斷技術(shù)（RDB）2021/4/2717地貧基因診斷技術(shù)（MLPA）2021/4/2718地貧基因診斷技術(shù)（DHPLC)2021/4/2719

α地貧(缺失型)的基因診斷

Southern印跡結(jié)合多重PCR結(jié)合缺口PCR(Gap-PCR)

多重連接酶依賴探針實(shí)時(shí)熒光定量限制性切酶譜分析溶解曲線分析結(jié)合片段大小分析擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)PCR(RQ-PCR)

優(yōu)點(diǎn)可用于分析基因的簡(jiǎn)潔，快速，污對(duì)儀器要求低，易推重復(fù)性好，特異性高確定cDNA拷貝大片段缺失與重復(fù)染降低，檢測(cè)單廣，檢測(cè)大片段缺失。，可同時(shí)檢測(cè)已知與數(shù)，可同時(shí)檢突變，結(jié)果可靠，個(gè)堿基突變及小未知大片段缺失或重測(cè)已知和未知穩(wěn)定性高。片段缺失。復(fù)突變。大片段缺失缺點(diǎn)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、需用不能檢測(cè)未知缺失及成本高限制了其推廣放射性同位素。非缺失突變。應(yīng)用

PCR診斷方法的可鑒定各種缺失廣泛用于地貧檢測(cè)，作為常見(jiàn)地貧基因篩作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充或佐證。類型?？蓞^(qū)分雜合子及純陰性但高度懷疑地貧或產(chǎn)前篩查合子的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。各種α地貧基因診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用2021/4/2720α地貧(非缺失型)的基因診斷PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶酶譜分析：簡(jiǎn)便、快捷，但只限于涉及限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變的突變和小片段缺失的檢測(cè)多重?cái)U(kuò)增不應(yīng)突變系統(tǒng)：簡(jiǎn)便、快速，同Gap-PCR一樣，廣泛用于α地貧基因檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合寡核苷酸探針的反向斑點(diǎn)雜交:診斷效率高，廣泛用于常見(jiàn)非缺失型基因檢測(cè)

基因芯片：并行性、多樣性及自動(dòng)化，同時(shí)診斷α及β地貧基因測(cè)序：可用于檢測(cè)未知的非缺失型地貧基因2021/4/2721β地貧基因診斷

點(diǎn)突變PCR-RDB基因測(cè)序2021/4/2722植入前基因診斷（羊膜穿刺取樣）

母體外周血分離胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷

母體血漿或血清中胎兒DNA分析

地貧基因產(chǎn)前診斷新技術(shù)2021/4/2723地貧基因診斷臨床應(yīng)用2021/4/2724評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問(wèn)題不同種族/地區(qū)地貧基因突變點(diǎn)有差別臨床貧血的嚴(yán)重程度（即臨床分型）與基因診斷的嚴(yán)重程度一致：確診2021/4/2725評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問(wèn)題臨床貧血嚴(yán)重程度與基因診斷不一致（1）臨床“重”，基因“輕”：①應(yīng)作家系調(diào)查，找診斷證據(jù)(舉例