淡水生物調(diào)查技術(shù)規(guī)范

1采樣1.1采樣點布設(shè)原則根據(jù)水體面積形態(tài)浮游植物的生態(tài)分布特點和調(diào)查的目的等決定采樣點數(shù)量采樣點應(yīng)有代表性能反映整個水體浮游生物的基本情況采樣點設(shè)置數(shù)量見表1表1

采樣點設(shè)置數(shù)量5～205～7

水體面積（2）采樣點數(shù)（個）

＜23

～5～5

2050501001005007～10～15～20

＞5002030湖泊、水庫湖泊應(yīng)兼顧在近岸和中部設(shè)點根據(jù)湖泊形狀在湖心區(qū)湖灣中心區(qū)、進(jìn)水口和出水口附近、沿岸淺水區(qū)（有水草區(qū)和無水草區(qū)）分散選設(shè)；水庫應(yīng)在庫心區(qū)（河道型水庫應(yīng)分別在上游、中游、下游的中心區(qū)）及大的庫灣中心區(qū)、主要進(jìn)水口、出水口附近、主要排污口、入庫江河匯合處設(shè)點。江河在干流上游中游下游主要支流匯合口上游合后與干流充分混合處，主要排污口附近河口區(qū)等河段設(shè)置采樣斷面根據(jù)江河寬設(shè)置斷面采樣點一般小于50m的只在中心區(qū)設(shè)點；～100m可在兩岸有明顯水流處設(shè)點；超過100m的應(yīng)在左、中、右分別設(shè)置采樣點。1.2采樣層次浮游植物采樣水深小于時，只在中層采樣；水～時，在表層、底層采樣，其中表層水在離水面0.5m，底層水在離泥面0.5m；水深～10m，在表層、中層、底層采樣；水深大于10m時，在表層、、10m水深層采樣，以下處除特殊需要外一般不采樣。浮游動物采樣由水體的深度決定，每隔0.5m、或一個水樣加以混合，然后取一部分作為浮游動物定量之用。1.3采樣頻次和采樣時間采集次數(shù)依研究目的而定樣次數(shù)可逐月或按季節(jié)進(jìn)行按季節(jié)進(jìn)行。樣品瓶必須貼上標(biāo)簽，標(biāo)明采集時間、地點。采樣時間盡量保持一致，一般在上午8：00～1000行。1.4采樣方法浮游植物采樣定量樣品在定性采樣之前用采水器采集，每個采樣點取水樣，貧營養(yǎng)型水體應(yīng)酌情增加采水量泥沙多時需先在容器內(nèi)沉淀后再取樣分層采樣時取各層水樣等量混勻后取水樣大型浮游植物定性樣品用號浮游生物網(wǎng)在表層緩慢拖曳采集，注意網(wǎng)口與水面垂直，網(wǎng)口上端不要露出水面。浮游動物采樣原生動物輪蟲和無節(jié)幼體定量可用浮游植物定量樣品如單獨采集取水樣量以1L為宜；定性樣品采集方法同浮游植物。枝角類和橈足類定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集個采樣點采水樣10L～再用號浮游生物網(wǎng)過濾濃縮，過濾物放入標(biāo)本瓶中，并用濾出水洗過濾網(wǎng)3，所得過濾物也放入上述瓶中；定性樣品用13浮游生物網(wǎng)在表層緩慢拖曳采集。注意過濾網(wǎng)和定性樣品采集網(wǎng)要分開使用。2樣品的固定浮游植物樣品立即用魯哥氏液固定用量為水樣體積的1％～1.5％樣品需較長時間保存，則需加入37%～％甲醛溶液，用量為水樣體積的％。原生動物和輪蟲定性樣品除留一瓶供活體觀察不固定外固定方法同浮游植物枝角類和橈足類定量定性樣品應(yīng)立即用～40％甲醛溶液固定用量為水樣體積的5。3水樣的沉淀和濃縮固定后的浮游植物水樣搖勻倒入固定在架子上的1L沉淀器中2h后將沉淀器輕輕旋轉(zhuǎn)，使沉淀器壁上盡量少附著浮游植物，再靜置。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸時管口要始終低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸過程不可搖動，如攪動了底部應(yīng)重新沉淀。吸至澄清液1/3，應(yīng)逐漸減緩流速，至留下含沉淀物的水樣～（或30～）mL，放入（或50mL定量樣品瓶中。用吸出的少量上清液沖洗沉淀器次～次，一并放入樣品瓶中，定容到30（或50。如樣品的水量超過30（或50，可靜置24h或到計數(shù)前再吸去超過定容刻度的余水量濃縮后的水量多少要視浮游植物濃度大小而定，正常情況下可用透明度作參考依透明度確定水樣濃縮體積見表2濃縮標(biāo)準(zhǔn)以每個視野里有十幾個藻類為宜。表2

依透明度確定水樣濃縮體積透明度（）＞1005010030502030＜20

1L水樣濃縮后的水量（）30100～50500～1001000（不濃縮）＞1000（稀釋）原生動物和輪蟲的計數(shù)可與浮游植物計數(shù)合用一個樣品角類和橈足類通常用過濾法濃縮水樣。4種類鑒定優(yōu)勢種類應(yīng)鑒定到種其它種類至少鑒定到屬種類鑒定除用定性樣品進(jìn)行觀察外，微型浮游植物需吸取定量樣品進(jìn)行觀察，但要在定量觀察后進(jìn)行。5計數(shù)5.1浮游植物計數(shù)計數(shù)框行格法計數(shù)前需先核準(zhǔn)濃縮沉淀后定量瓶中水樣的實際體積，可加純水使其成等整量。然后將定量樣品充分搖勻，迅速吸出.1mL置于0.1mL計數(shù)框內(nèi)（面20mm×20mm上蓋玻片后，在高倍鏡下選3～5行逐行計數(shù)，數(shù)量少時可全片計數(shù)。1L水樣中的浮游植物個數(shù)（密度）可用下列公式計算：0110nssn00110nssn0………1）式中：N——樣中浮游生物的數(shù)量，個/L；N——計數(shù)框總格數(shù)；N——計數(shù)過的方格數(shù)；V——1L水樣經(jīng)濃縮后的體積，mL；V——計數(shù)框容積，；——計數(shù)的浮游植物個數(shù)。目鏡視野法首先應(yīng)用臺微尺測量所用顯微鏡在一定放大倍數(shù)下的視野直徑，計算出面積計數(shù)的視野應(yīng)均勻分布在計數(shù)框內(nèi)每片計數(shù)視野數(shù)可按浮游植物的多少而酌情增減，一般為個～個，依浮游植物數(shù)確定計算視野數(shù)見表。表3

依浮游植物數(shù)確定計算視野數(shù)浮游植物平均數(shù)（個/野）1～22～55～10＞10

視野數(shù)（個）300200100501L水樣中浮游植物的個數(shù)（密度）可用下列公式計算：………2）式中：N——樣中浮游生物的數(shù)量，個/L；C—計算框面積，

2F—視野面積，mmF——每片計數(shù)過的視野數(shù)；V—1L水樣經(jīng)濃縮后的體積，mL；V——計數(shù)框容積，；nsns——計數(shù)的浮游植物個數(shù)。5.2浮游動物計數(shù)原生動物出品于0.1mL數(shù)框內(nèi)上蓋玻片10×20倍顯微鏡下全片計數(shù)。每瓶樣品計數(shù)兩片，取其平均值。輪蟲：吸1mL樣品，置于1mL計數(shù)框內(nèi)，在顯微鏡下全片計數(shù)。每瓶樣品計數(shù)兩片，取其平均值。枝角類、橈足類：用數(shù)框?qū)悠贩秩舾纱稳坑嫈?shù)。如樣品中個體數(shù)量太多，可將樣品稀釋50mL100mL，每瓶樣品計數(shù)兩片，取其平均值。無節(jié)幼體：如樣品中個體數(shù)量不多，則和枝角類、橈足類一樣全部計數(shù)；如數(shù)量很多，可把過濾樣品稀釋，充分搖勻后取其中部分計數(shù)，計片～片取其平均值。也可在輪蟲樣品中同輪蟲一起計數(shù)。計數(shù)前，充分搖勻樣品，吸出迅速、準(zhǔn)確。蓋上蓋玻片后，計數(shù)框內(nèi)無氣泡，無水樣溢出。單位體積浮游動物的數(shù)量按下式計算……………3）式中:N——樣中浮游動物的數(shù)量，個/L；V——采樣的體積，L；V—樣品濃縮后的體積，mL；V—計數(shù)樣品體積，mL；n—計數(shù)所獲得的個體數(shù)，個。5.3注意事項每瓶樣品計數(shù)兩片取其平均值，每片結(jié)果與平均數(shù)之差不大于±15％，否則必須計數(shù)第三片直至三片平均數(shù)與相近兩數(shù)之差不超過均數(shù)的15%止這兩個相近值的平均數(shù)即可視為計算結(jié)果。浮游植物計數(shù)單位用細(xì)胞個數(shù)表示。對不易用細(xì)胞數(shù)表示的群體或絲狀體，可求出平均細(xì)胞數(shù)。浮游動物計數(shù)單位用個數(shù)表示。某些個體一部分在視野中另一部分在視野外這時可規(guī)定只計數(shù)上半部分或只計數(shù)下半部分。6生物量的測定浮游植物的比重接近1，可直接采用體積換算成重量（濕重積的測定應(yīng)根據(jù)浮游植物的體型，按最近似的幾何形狀測量必要的長度、高度、直徑等，每一種類至少隨機(jī)測定個，求出平均值，代入相應(yīng)的求積公式計算出體積。此平均值乘上1L水中該種藻類的數(shù)量，即得到中這種藻類的生物量，所有藻類生物量的和即為1L中浮游植物的生物量，單位為或種類形狀不規(guī)則的可分割為幾個部分分別按相似圖形公式計算后相加量大或體積大的種類，應(yīng)盡量實測體積并計算平均重量。其他種類可參照表D1。微型種類只鑒別到門，按大、中、小三級的平均質(zhì)量計算。極小的（＜μm為0.0001mg/104個；中等的（510μm）為0.002mg/104；較大的（μm～20μm）為0.005mg/104個。原生動物、輪蟲可用體積法求得生物體積，比重取l，再根據(jù)積換算為重量和生物量。甲殼動物可用體長一體重回歸方程，由體長求得體重（濕重節(jié)幼體可按濕重/個計算。輪蟲枝角類橈足類及其幼體可用電子天平直接稱重即先將樣本分門別類，選擇30個～樣本，用濾紙將其表面水分吸干至沒有水痕，置天平上稱其濕重。個體較小的增加稱重個數(shù)。只進(jìn)行定性檢查。主要刮取或剝離水中浸沒物諸如石塊、木樁、樹枝、水草或硬底泥等表層藻膜絲狀藻和粘稠狀生長物用魯哥試劑固定室內(nèi)顯微鏡下鑒定種類組成。2.1采樣采樣點布設(shè)采樣點數(shù)量依著生生物分布及豐度而定，一5～6。采樣點布設(shè)在水體的淺水區(qū)沿岸帶和大型水生植物分布區(qū)等水域一些受污染等特殊點也需采樣觀察。采樣方法水體中有大量大型水生植物分布則采集整株水草帶回實驗室在室內(nèi)從水草根部起，依次刮取植株上的所有著生生物。除此外，水底石塊、木樁、樹枝等基質(zhì)上的著生生物可用刀片或硬刷（刷到盛有蒸餾水的樣品瓶中再將基質(zhì)沖洗干凈沖洗液裝入樣品瓶中場來不及刮樣時將基質(zhì)帶回室內(nèi)刮取。2.2樣品的處理著生藻類樣品的處理品用魯哥氏液固定為水樣體積的％～1.5％。著生原生動物樣品的處理：將樣本連同基質(zhì)分別放入盛有采樣點水樣的廣口瓶內(nèi)，其中一瓶用魯哥氏液固定，另一瓶不加固定液，供活體觀察用。2.3種類鑒定優(yōu)勢種類須鑒定到種，其他種類至少鑒定到屬。1游植物葉綠素a的測定1.1水樣的采集與保存可根據(jù)工作的需要進(jìn)行分層采樣或混合采樣庫采樣500rnl,池塘300m1采樣量視浮游植物分布量而定，若浮游植物數(shù)量較少，也可采樣。采樣點及采樣時間同浮游杭物。水樣采集后應(yīng)放在蔭涼處避免日光直射最好立即進(jìn)行測定的預(yù)處理如需經(jīng)過一段時間(4～方可進(jìn)行預(yù)處理，則應(yīng)將水樣保存在低溫(04避光處。在每升水樣中加入1%酸鎂懸濁液lrnl以防止酸化引起色素溶解。水樣在冰凍情況下(℃)最長可保存。1.2.儀器設(shè)備分光光度計。真空泵。離心機(jī)。④乙酸纖維濾膜(孔徑0.45

。⑤抽濾器。@組織研磨器或其他細(xì)胞破碎器。⑦碳酸鎂粉末。⑧丙酮。1.3試驗程序以離心或過濾濃縮水樣在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時負(fù)壓不能過(約為50kPa)。水樣抽完后，繼續(xù)抽I～2min，以減少濾膜上的水分如需短期保存1～2d可放入普通冰箱冷凍如需長期保存(30d)，則應(yīng)放入低溫冰箱℃)保存。取出帶有浮游植物的濾膜在冰箱內(nèi)低溫干燥～后放入組織研磨器中加入少量碳酸鎂粉末及2丙酮，充分研磨，提取葉綠素。用離心機(jī)～4000r/min)離心10rnin。將上清液倒入5ml或l0ml容量瓶中。再用23ml90%的丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心，并將上清液再轉(zhuǎn)入容量