樣品前處理技巧大全總結(jié)

樣品前處理技巧大全總結(jié)樣品前處理對(duì)分析檢測(cè)實(shí)驗(yàn)員來(lái)說(shuō)是至關(guān)重要的一環(huán)，其占據(jù)整個(gè)分析過(guò)程的60%以上的時(shí)間，主要的分析誤差也是來(lái)自樣品前處理環(huán)節(jié)。首先必須講解的是微量樣品前處理技術(shù)，畢竟微量樣品前處理更需要技巧。(主要是固相萃取技術(shù)哦！)針頭過(guò)濾器、超速離心是除去固體顆粒的微量樣品前處理技術(shù)，而固相萃取(Solid-phaseextraction,SPE)和固相微萃取(Solid-phasemicroextraction,SPME)是兩種從各類(lèi)復(fù)雜樣品中提取凈化微量待測(cè)組分的新技術(shù),它們具有分離速度快、操作簡(jiǎn)單、萃取效率高、無(wú)乳化等特點(diǎn),在環(huán)境分析、藥物分析、形態(tài)分析等方面有廣泛應(yīng)用,尤其適用色譜分析樣品前處理。分析樣品制備技術(shù)：將采集樣品轉(zhuǎn)化為適合(色譜)分析測(cè)定的形態(tài)固相萃取(張海霞、朱彭齡,分析化學(xué)2000,28(9)：1172)它的優(yōu)點(diǎn)是：節(jié)省時(shí)間,交叉污染機(jī)會(huì)小,重現(xiàn)性好,回收率高,特別適用于微量試液處理。固相萃取的關(guān)鍵是根據(jù)樣品的性質(zhì)正確選擇固相萃取小柱及洗脫條件。固相微萃取固相微萃取集“采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣”于一體,能夠與氣相色譜或高效液相色譜儀聯(lián)用樣品前處理技術(shù)?！cSPE相比SPME具有以下優(yōu)點(diǎn)：不使用有機(jī)溶劑萃取,降低了成本,避免了二次污染；操作時(shí)間短,從萃取進(jìn)樣到分析結(jié)束不足1h；樣品用量少，幾mL?幾十mL；操作簡(jiǎn)便,可減少待測(cè)組分的揮發(fā)損失；檢測(cè)限達(dá)口g/L?ng/L水平；適于揮發(fā)性有機(jī)物、半揮發(fā)性有機(jī)物及不具揮發(fā)性的有機(jī)物?！滔辔⑤腿〉氖褂茫宏P(guān)鍵在于“纖維頭的選擇”，這種情況類(lèi)似于色譜柱的選擇,主要根據(jù)分析對(duì)象的分子量和極性。固相微處理技術(shù)適用于氣體、水樣、生物樣品(如，血、尿、體液等)的萃取提取?！滔辔⑤腿〖夹g(shù)條件的選擇：纖維表面固定相固相微萃取法在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用蛋白質(zhì)的分離、純化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究具有重要意義，蛋白質(zhì)分離技術(shù)是利用蛋白質(zhì)的特性，如，溶解度、分子質(zhì)量大小、等電點(diǎn)、吸附特性和其它離子的生物親和力等的不同，選擇合適的分離模式并建立最佳的純化方法。常用的分離方法包括沉淀法、色譜法和電泳及毛細(xì)管電泳。幾種方法供你選擇：（1）沉淀法利用蛋白質(zhì)在溶液中的不同溶解度。蛋白質(zhì)的溶解度取決于分子中氨基酸的類(lèi)型和電荷數(shù)，通過(guò)改變緩沖液pH值、離子強(qiáng)度、介電常數(shù)或溫度而改變蛋白質(zhì)的溶解度。主要使用的沉淀分離技術(shù)有鹽析、等電點(diǎn)沉淀、溶劑分級(jí)分離。（2）透析法利用半透膜只允許小分子透過(guò)而大分子不能透過(guò)的原理來(lái)分離溶液中的蛋白質(zhì)。通常至少需要12h。（3）超濾法采用半透膜在一定壓力下，按照分子質(zhì)量大小分離溶質(zhì)的一門(mén)技術(shù)。與透析相似，但速度快得多。蛋白質(zhì)的構(gòu)成成分：氨基酸前處理1.氨基酸的分離和檢測(cè)手段，以往用化學(xué)分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動(dòng)分析儀。2?隨著高效液相色譜及填料的發(fā)展，HPLC在氨基酸檢測(cè)方面顯示了其特有的優(yōu)越性，但大多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收和熒光發(fā)射特性，為提高分析檢測(cè)靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法與柱后衍生法。3.HPLC與各種衍生相結(jié)合的氨基酸分析技術(shù)，構(gòu)成了具有廣泛適用性的現(xiàn)代氨基酸分析技術(shù)。樣品處理測(cè)定蛋白質(zhì)中的總氨基酸，必須先把蛋白質(zhì)水解成游離氨基酸?？刹捎盟崴?、堿水解和酶水解方法，其中以酸水解法應(yīng)用最廣泛。（1）酸水解條件：常用硫酸或鹽酸進(jìn)行水解。一般用6mol/LHCl,4mol/LH2S04煮沸回流24小時(shí)左右。優(yōu)點(diǎn)：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為L(zhǎng)-a-氨基酸，產(chǎn)物單一，無(wú)消旋現(xiàn)象。缺點(diǎn)：色氨酸破壞，絲氨酸和蘇氨酸有一小部分被水解，同時(shí)天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解下來(lái)。（2）堿水解條件：分析色氨酸可采用堿水解法，一般與5mol/LNaOH煮沸10?20小時(shí)。優(yōu)點(diǎn)：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清亮。缺點(diǎn)：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨基酸多。（3）酶水解某些氨基酸對(duì)酸或堿不穩(wěn)定，在酸或堿水解時(shí)易被破壞，某些蛋白質(zhì)樣品在酸或堿水解不完全，影響某些氨基酸的回收率。對(duì)這些樣品可采用酶水解法。酶水解法可定量測(cè)定天東氨酸、谷氨酸和色氨酸。條件：蛋白酶，如，胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫37?40°C,pH值5?8。優(yōu)點(diǎn)：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。缺點(diǎn)：水解不完全，中間產(chǎn)物多。生物樣品分析前處理技術(shù)為什么要進(jìn)行前處理？存在形式多樣：游離型藥物、與蛋白質(zhì)結(jié)合型藥物、代謝物、葡萄糖醛酸苷、硫酸酯綴合物等。成分復(fù)雜：蛋白質(zhì)、糖、脂肪、尿素、Na+、K+、X-等。（1）去除蛋白質(zhì)釋放結(jié)合型藥物、減少提取過(guò)程中乳化、保護(hù)儀器、提高靈敏度。。。加入與水混溶的有機(jī)溶劑中性鹽強(qiáng)酸加入含鋅鹽、銅鹽的沉淀劑酶解法（2）綴合物的水解酸水解/酶水解（3）有機(jī)破壞測(cè)定生物樣品中的金屬離子，常用HN03-HC104作為消解劑，一般得到高價(jià)態(tài)金屬離子。（4）分離、純化和濃集使被測(cè)物在所用分析技術(shù)