人類輔助生殖技術與人類精子庫

人類輔助生殖技術與人類精子庫背景:不孕不育：影響男女雙方身心健康、家庭和睦的世界性問題。在育齡期夫婦中約有10-15%對夫婦存在不育，以此推算，全世界約有10000萬人不能正常生育。每一對健康的育齡夫婦的生育權利和得到健康孩子的要求。精子銀行：取己之長，造福他人！留得青山在，不怕沒柴燒！不孝有三，無后為大！第一篇人類輔助生殖技術第二篇人類精子庫第三篇人類輔助生殖技術和 人類精子庫倫理原則

第一篇人類輔助生殖技術概念：是指利用現代醫(yī)學的最新成果用人工的手段代替自然生殖過程的一部分或者全部的技術。人工輔助生殖的里程碑：世界上首例“試管嬰兒”1978年誕生于英國。我國首例“試管嬰兒”于1988年在北京誕生。世界首例第二代“試管嬰兒”于1992年誕生（ICSI）。我國首例第二代“試管嬰兒”于1996年在北京誕生（ICSI）。目前我國已將種植前基因診斷（PGD）應用于臨床，而該技術世界上也是近3～4年才逐步發(fā)展起來的。我們與世界先進水平的差距正在縮小。目前我國開展人工輔助生殖項目的醫(yī)院及婦科中心有80多家，已誕生了3000多例“試管嬰兒”，全世界現已有30多萬名“試管嬰兒”出生。世界上首例“試管嬰兒”1978年7月25日，世界上第一例試管嬰兒—路易斯?布朗誕生。羅伯特?愛德華試管嬰兒之父帕克里特?斯特普托我國首例試管嬰兒1988年3月10日上午8點56分，北京醫(yī)科大學第三醫(yī)院大陸首例試管嬰兒鄭萌珠人類輔助生殖技術

（AssistedReproductiveTechnology,ART）人工授精（ArtificialInsemination,AI）體外受精-胚胎移植及其衍生技術(InVitroFertilizationandEmbryoTransfer,IVF-ET)一、人工授精技術概念：人工授精是通過非性交方式將精液注入女性生殖道內,使不育夫婦受孕。最早的人工授精在1790年在治療尿道下裂的患者中獲得成功。目前采用新鮮精液進行人工授精的成功率為17%左右。人工授精結合控制性超排卵、精液處理以及授精技術改善，其妊娠率會有所提高。分類：人工授精根據精子來源分為丈夫精液人工授精（ArtificialInseminationbyHusbandSemen,AIH）供精人工授精（ArtificialInseminationbyDonorSemen,AID）根據授精部位分為：陰道內人工授精（IntravaginalInsemination,IVI）宮頸內人工授精（IntracervicalInsemination,ICI）宮腔內人工授精（IntrauterineInsemination,IUI）輸卵管內人工授精（IntratubalInsemination,ITI）丈夫精液人工授精供精人工授精人工授精人工授精適應癥丈夫精液人工授精：①男性因少精、弱精、液化異常、性功能障礙、生殖器畸形等不育。②女性因宮頸粘液分泌異常、生殖道畸形及心理因素導致性交不能等不育。③免疫性不育。④原因不明的不育。供精人工授精①無精子癥、嚴重的少精癥、弱精癥和畸精癥。②輸精管絕育術后期望生育而復通術失敗者及射精障礙等。③男方和/或家族有不宜生育的嚴重遺傳性疾病。④母兒血型不合不能得到存活新生兒。⑤原因不明的不育。人工授精禁忌癥

女方因輸卵管因素造成的精子和卵子結合障礙。女方患有生殖泌尿系統(tǒng)急性感染或性傳播疾病。女方患有遺傳病、嚴重軀體疾病、精神心理障礙。有先天缺陷嬰兒出生史并證實為女方因素所致。女方接觸致畸量的射線、毒物、藥品并處于作用期。女方具有酗酒、吸毒等不良嗜好。（一）術前準備女方（1）病史詢問了解病人的月經史、性生活史、婚育史和家族遺傳病史及其它相關病史，著重了解是否有過流產史、分娩史及產褥史，有無生殖器炎癥史。另外詢問采用過何種方法避孕的，有過幾次流產？為何流產？初步判斷其不孕的原因。（2）體檢：進行全身檢查和婦科常規(guī)檢查，觀察生殖器官及第二性征的發(fā)育情況，了解有無炎癥、腫瘤以及畸形等。（3）內分泌激素檢測：在月經第1~3天抽靜脈血測卵泡刺激素（FSH）、黃體生成素（LH）、催乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）及睪酮（T），了解其基礎值。然后于月經第5天起服用克羅米芬100mg，qd

連服5天，再測生殖激素全套，從而了解卵巢的功能。

（一）術前準備女方（4）測量基礎體溫：是測定有無排卵以及預測排卵時間的最簡便、最經濟實用的方法。測量基礎體溫應該從月經第一天開始，每天早晨醒后，在未進行任何活動前測定體溫。然后將測得的體溫數據記錄下來，描在特制的基礎體溫表上，并繪成曲線。連續(xù)觀察3個月，了解月經的規(guī)律及排卵情況。（5）超聲波檢查：通過B超觀察，了解子宮、卵巢的大小、形態(tài)位置、有無畸形，并且可以動態(tài)觀察卵泡的發(fā)育情況及數量，子宮內膜的增長程度，與卵泡發(fā)育的同步性等。（6）輸卵管檢查：包括有輸卵管通液通氣術、子宮-輸卵管X光碘油造影術，碘油過敏者可選擇B超下輸卵管通液術或宮腔鏡下輸卵管插管通液術。根據需要選擇其中之一，以便了解輸卵管的通暢程度。做IUI病人必須常規(guī)進行輸卵管通暢試驗。（7）染色體檢查：對于有遺傳風險的婦女，或者高齡婦女可以選擇性進行外周血染色體檢查。（一）術前準備男方（1）病史詢問詢問病人有無婚育史、感染性及性傳播性疾病史，有無高溫、化學品、輻射接觸史，近期有無醺酒等行為，父母是否屬近親婚配。（2）精液常規(guī)檢查在做IUI前必須進行至少二次以上的精液常規(guī)檢查，另外在決定實施IUI前應當禁欲5~6天，以保持具有足夠的精液量和精子數以及精子的新鮮度。（3）內分泌激素檢查

測全套生殖激素，了解睪丸的生精功能狀態(tài)

（二）人工促排卵和卵泡監(jiān)測大多數助孕中心在實施人工授精前均采用人工促排卵技術，以便能更好的促使卵泡的發(fā)育與成熟，保證子宮內膜與成熟卵泡發(fā)育的同步性，改善黃體功能，克服排卵障礙，人為控制排卵時間，從而達到提高受精的成功率。（三）常用的促排卵方案1、

克羅米芬+HMG+HCG于月經周期第5~6天開始，每天口服克羅米芬50~100mg連續(xù)五天，第6天，也就是月經周期第10~11天，做陰超，觀察卵泡發(fā)育和子宮內膜增長情況。根據卵泡的和子宮內膜厚度，決定每天肌注HMG的量。（一般為75~150IU/日）然后每隔一天做一次B超，監(jiān)測卵泡和子宮內膜的發(fā)育，調整用藥劑量，直至最大卵泡直徑達到18mm以上，子宮內膜厚度達到10mm，一次肌肉注射5000~10000IU的HCG。2、HMG+HCG于月經周期第5天開始用藥，起始劑量根據卵巢功能而定（預先做克羅米芬或HMG刺激試驗），一般每天75~150IU，至月經第10~11天開始觀察卵泡發(fā)育和子宮內膜增長情況。視卵泡和子宮內膜生長程度決定用藥劑量，一般可以75~300IU/日。隔天做B超監(jiān)測卵泡和子宮內膜的發(fā)育，調整用藥劑量，直至最大卵泡直徑達到18mm以上，子宮內膜厚度達到10mm，一次肌肉注射5000~10000IUHCG。

（三）常用的促排卵方案3、FSH+HCG

于月經周期第5天開始用藥，起始劑量一般150~300IU/日，月經第10天陰超觀察卵泡發(fā)育和子宮內膜增長情況。根據卵泡和子宮內膜生長程度及血E2濃度調整用藥劑量，隔天做B超監(jiān)測卵泡和子宮內膜的發(fā)育，測血E2濃度，直至主卵泡直徑達到18mm以上，內膜厚度達到10mm，血E2濃度達到1500~2500IU/L，一次肌肉注射5000~10000IU的HCG。這種用法主要是針對卵巢功能較差者，如：多囊卵巢綜合征（PCOS）患者，這些病人血LH水平較高，應用HMG促排卵容易引起刺激過度（因為HMG中含有75IU的FSH和75IU的LH），因此單獨應用FSH效果更好些。

對于做IUI來講，啟動促排卵最好于月經周期第5天以后進行，這樣可以避免過多的卵泡發(fā)育，造成多胎妊娠。因為藥物促排卵時間越早，生長卵泡形成的數量就越多，多胎的可能性就越大，這樣的臨床教訓很多。（四）精液處理1）上游法原理：利用活動精子的自主泳動能力，會從試管底部向上游動，接近培養(yǎng)液的液面層。而活動力差的精子、死精子、凝集的精子以及其它細胞成份則留在試管底部。通過吸取試管液面層的培養(yǎng)液，就可收集到活力較好的精子，達到優(yōu)選精子的目的。上游法可以收集到更多的活力較好的、形態(tài)正常的精子，對于少、弱精癥效果較差。2）下游法原理：利用精子自身的重力作用，活力較差的精子會運動到試管底部含有營養(yǎng)成份高的液層中。下游法可以提高精子的回收率和精子活動率，因此適用少弱精癥病人及冷凍精液的處理。（四）精液處理3）密度梯度離心法Pecoll（聚乙烯吡咯烷酮包被硅膠液）梯度離心法原理：將percoll液配成由低到高的不同濃度的梯度層，把液化的精液置于最上層。離心后，根據精子質量不同以及其它成份比重的不同，進入到不同的濃度層。大多數活力好、形態(tài)正常的精子進入到高密度的percoll層，活力差的精子進入到低密度percoll層，而白細胞及其它一些細胞進入到與精液相交界的percoll層內。用這種方法可將質量好的精子分離出來。（五）授精時間一般于肌肉注射10000IUHCG后36~48小時內進行人工授精，因為卵子排放大約在HCG注射后36~40小時。有的單位采用二次授精法，即24小時和40小時各授精一次，以提高授精率；也有的單位在超聲波證實排卵后進行授精，當然也有測血中LH峰值出現后24小時授精的，然而各種方法最后的授精率都沒有顯著差別，因為在排卵前后12小時內都是授精的理想范圍內，一般不會影響精卵受精的質量。（六）黃體支持人工授精后的第2天開始，常規(guī)進行黃體支持。臨床上有兩種方法：（1）黃體酮支持

于授精后第二天開始，每天肌肉注射20~40mg的黃體酮或采用陰道栓劑黃體酮支持。（2）HCG支持

于授精后第2天肌肉注射1500~2000IUHCG，然后，每隔3~4天注射一次同樣劑量的HCG，共4~5次。值得一提的是，有卵巢刺激過度綜合征（HOSS）跡象或者出現卵巢過度刺激癥狀的患者，禁用或停用HCG，以免引起或加重HOSS。授精后第16天，若月經不來，可以測定血βHCG。如果陽性，說明妊娠；也可以測定尿中hCG的濃度。

二、體外受精-胚胎移植及其衍生技術胚胎移植時間的改進：胚胎移植應在受精后第3～5天進行，第五天移植胚胎可通過胚胎的自篩選幫助我們從中選擇出最好的胚胎，從而通過減少需要移植的胚胎的數量降低多胎率。輔助孵化的應用：可提高“試管嬰兒”成功率，尤其對年齡較大的婦女及前一次“試管嬰兒”助孕失敗者。單精子卵母細胞漿內顯微注射授精（ICSI，Intracyto-plasmicSpermInjection）是將單個精子直接注射到卵細胞漿內，又稱第二代“試管嬰兒”技術。

體外受精-胚胎移植的治療步驟

控制性促排卵：自然周期中通常只有一個優(yōu)勢卵泡發(fā)育，受精后只能形成一個胚胎，移植一個胚胎后的妊娠率很低，而且自然月經周期的長短因人而異，甚至同一患者不同的周期也存在差異，不易安排取卵時間，所以需要采用控制性促排卵，以達到不受自然周期限制、獲取多個健康、成熟卵子的目的，提供受精后多個胚胎移植，并盡可能使黃體與內膜功能同時能對妊娠發(fā)生與妊娠維持相適應。促卵泡成熟：當主導卵泡發(fā)育到18毫米以上時，注射hCG促進卵泡成熟。采卵：注射hCG后36小時，在陰道B超下穿刺采卵。該手術快捷，創(chuàng)傷小，病人易接受，可以重復進行，不需麻醉。取精：采卵的同時，丈夫手淫法取精液于一無菌容器內。精液的處理：采用上游法或梯度離心法。受精：取卵后4～5小時加精。胚胎移植：目前我所多在受精后3～5天移植胚胎。

注：目前IVF-ET的成功率為35%左右。年輕女性成功率較高，年齡超過35歲，成功率有所下降。

體外受精/胚胎移植適應癥女方因輸卵管因素造成精子與卵子遇合困難。排卵障礙。子宮內膜異位癥。男方少、弱精子癥。不明原因不育。女性免疫性不孕。卵胞漿內單精子注射（ICSI）適應癥嚴重的少、弱、畸精子癥。梗阻性無精子癥。生精功能障礙。男性免疫性不育。體外受精-胚胎移植（IVF-ET）受精失敗。精子無頂體或頂體功能異常。

植入前胚胎遺傳學診斷（PGD）種植前基因診斷又稱為第三代“試管嬰兒”，它是指從體外受精的胚胎中取1～2個細胞或者取卵細胞的第一極體在種植前進行基因分析，可用以鑒定胚胎性別，分析胚胎染色體，然后移植基因正常的胚胎，從而達到優(yōu)生優(yōu)育的目的。1990年首例應用種植前基因診斷鑒定性別后，選擇女性胚胎移植得以妊娠。目前全世界已進行了大約1200個PGD周期，300多例臨床妊娠。種植前基因診斷還適用于年齡超過35歲的婦女篩選非整倍體，解決年長婦女因胚胎基因異常引起的不孕或流產；對平衡易位的夫婦選擇基因平衡的胚胎進行移植。從根本上提高第一、二代“試管嬰兒”的妊娠成功率，降低自然流產率，提高妊娠質量，可有效地避免因盲目地移植了攜帶異?；虻呐咛ザ坏貌辉谠衅诮K止妊娠。PGD診斷技術1、分子細胞遺傳學診斷

是應用熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）技術對受精卵中的極體或卵裂球進行分析，可以對染色體數目異常、結構異常進行檢測，也可以進行性別診斷，從而避免非整倍體胚胎和結構異常染色體胚胎的植入。同時，由于可以對X-連鎖隱性遺傳疾病的性別診斷，避免了伴性遺傳性疾病胎兒的出生。PGD診斷技術2、基因診斷

是應用聚合酶鏈反應（PolymerasechainreactionPCR）技術進行單基因疾?。ㄈ纾旱刂泻Ｘ氀?、鐮刀樣細胞貧血、纖維囊性變等）的診斷。近幾年分子生物學技術的發(fā)展證實：一部分非梗阻性無精子癥及部分嚴重少精子癥患者的發(fā)生原因是由于他們的Y染色體長臂遠側端與精子發(fā)生相關基因發(fā)生了缺失或突變，從而引起精子發(fā)生的異常，這些基因被稱之為無精子因子（Azoospermiafactor,AZF）。過去這些都是“絕對”不育的患者，然而由于卵胞漿內單精子注射授精（ICSI）技術的開展，使得那些AZF因子缺失的精子受精成為可能。其最終結果是：出生的男性后代也可能是AZF因子缺失者，將來也存在不育的可能。而通過事先的PGD基因檢測可以避免這一后果的發(fā)生。植入前胚胎遺傳學診斷（PGD）適應癥凡是能夠被診斷的遺傳性疾病都可以適用于植入前胚胎遺傳學診斷（PGD）。主要用于Ｘ連鎖遺傳病、單基因相關遺傳病、染色體病及可能生育以上患兒的高風險人群等。其他技術適應癥接受卵子贈送喪失產生卵子的能力。女方是嚴重的遺傳性疾病基因攜帶者或患者。具有明顯的影響卵子數量和質量的因素。接受胚胎贈送夫妻雙方同時喪失產生配子的能力。夫妻雙方有嚴重的遺傳性疾病或攜帶導致遺傳性疾病的基因，不能產生功能正常的配子。不能獲得發(fā)育潛能正常的胚胎。體外受精/胚胎移植及其衍生技術禁忌癥提供配子的任何一方患生殖、泌尿系統(tǒng)急性感染和性傳播疾病或具有酗酒、吸毒等不良嗜好。提供配子的任何一方接觸致畸量的射線、毒物、藥品并處于作用期。接受胚胎贈送/卵子贈送的夫婦女方患生殖、泌尿系統(tǒng)急性感染和性傳播疾病，或具有酗酒、吸毒等不良嗜好。女方子宮不具備妊娠功能或嚴重軀體疾病不能承受妊娠。第一代試管嬰兒,是指讓精子和卵子自己在試管中完成受精過程的技術.第二代試管嬰兒,是指人工幫助精子進入卵細胞的技術.第三代試管嬰兒,是在細胞移植前,進行遺傳學診斷,剔除可能帶有遺傳性疾病的卵子.第四代試管嬰兒,是把他人健康的卵漿注入質量不高的卵子中,或者把即將受精的卵細胞核植入健康的卵細胞中.

專題：“試管嬰兒”“試管嬰兒”“試管嬰兒”男女雙方必須身心健康，無遺傳性疾病，女方年齡一般不超過40歲，男方不超過55歲。因為女方年齡過大，自然受孕后懷孕后流產率高，胎兒畸形發(fā)生可能性也比年輕者大，妊娠期合并癥增加，作試管嬰兒的大齡不孕婦女除了同樣存在以上的問題外，在促排卵時常常反應不好，在第一階段被迫放棄試管嬰兒治療，卵子的質量相對差，妊娠率低，不容易成功。

試管嬰兒的適應癥包括：雙側輸卵管不通：無論是炎癥、結核或子宮內膜異位癥導致的卵管梗阻或蠕動能力差、先天性的輸卵管缺如還是宮外孕等原因導致卵管切除均使精卵無法相遇，試管嬰兒技術為這些患者架起了一座橋梁?？梢哉f雙側輸卵管不通是“試管嬰兒”的絕對適應癥。免疫性不孕：精液經過洗滌，在體外授精，避免免疫因素干擾。男性因素：精液經洗滌濃縮后，在體外培養(yǎng)下可以明確是否有授精能力。不明原因性不孕：在目前的檢查條件下未找到明顯的病因，經其它治療沒有成功的患者，可以應用體外授精胚胎移植技術獲得約25%的妊娠率。卵胞漿內單精子注射授精

（Intracytoplasmicspermeinjection，ICSI）（一）適應癥1）嚴重的少、弱精子癥。精子密度<5x106/ml、精子活率<30%、精子活動力1級，甚至精子無運動能力，但伊紅染色證實有活精子者。2）梗阻性無精子癥。3）生精功能障礙。4）男性免疫性不育。5）精子無頂體及頂體功能異常者。6）精子嚴重畸形癥(精子畸形率>90%，且無遺傳原因者)；7）嚴重逆行性射精者8）體外授精-胚胎移植（IVF-ET）失敗多次。ICSI（二）取精方式

1、手淫法取精2、附睪抽吸法(microepididymalspermaspiration， MESA)取精，用于梗阻性無精子癥患者。3、睪丸穿刺抽吸法(Testicularspermaspiration,TESA) 取精，可以用于梗阻性無精子癥患者或精子發(fā)生障礙者。4、睪丸活檢法（Testicularbiopsy），用于非梗阻性無 精子癥取精。ICSI（三）授精方法1、注射前準備

在每次實施單精子卵胞漿內顯微授精（ICSI）前，必須對顯微注射系統(tǒng)進行檢查和準備，這些包括對Holding針和injectiongpipette針的調節(jié)、趕去注射器膠管內的氣泡等。2、精子制動在將精子吸入injectiongpipette前必須前制動精子，也就是使活動精子失去活動能力。具體方法為：在選中一活動精子后，馬上把注射針（injectiongpipette）移至該精子的尾部上方，輕輕的壓住精子

，然后迅即劃過精子尾部。此時，該精子因尾部受損，立刻失去活動能力。ICSI3、卵漿內單精子注射將上述培養(yǎng)皿置于單精子注射系統(tǒng)的操作平臺上，用Holding針固定住卵子，保持極體在6點或12點鐘的位置，而固定針在9點鐘的位置。把已制動的精子吸入到injectiongpipette內，將精子慢慢的推到注射針的尖端，然后在3點鐘的位置（與固定針基本同一水平）將注射針注入卵子內，先輕輕的吸出少許卵漿，以證實確實在卵漿內，再緩緩的將精子注入到卵漿內，退出注射針，隨即洗去“受精卵”外面的油跡，將其移入另一含培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，放置CO2或三氣培養(yǎng)箱內，待第二天觀察是否受精。ICSI（四）胚胎培養(yǎng)和質量評判無論是IVF-ET還是ICSI，一般在授精后培養(yǎng)至：

19－20小時后，可以看到二個細胞前核（雌、雄原核），即2PN。

24小時后――2個細胞

35小時后――4個細胞

48小時后――8～10個細胞

72小時后――32～34個細胞

96小時后――桑椹胚

100小時后——出現囊胚腔

115小時后——出現內細胞團理想胚胎的標準：體積大小適中；

卵裂球大小勻稱一致，多成偶數；第一極體無分裂現象；受精卵表面皮質顆粒大小均勻，覆蓋住表面，而非核性碎片<10％。ICSI（五）植入和黃體支持1、

植入一般于體外培養(yǎng)48小時后，將發(fā)育成4~8個細胞期的質量最好的胚胎移植到子宮腔內，一次植入3~4個胚胎。植入的方法，常用的為經陰道宮內植入法。2、黃體支持于胚胎植入第三天起，每隔三天肌肉注射2000IU的HCG，共二~三次；或每天注射20mg的黃體酮，也可以每天使用40mg的黃體酮陰道栓劑分早晚二次。ICSI（六）生物妊娠及臨床妊娠在胚胎移植15天后測血βHCG，10天后若無月經再測一次βHCG，第六周時可做B超觀察胎囊以確定懷孕。如：HCG陽性而B超未觀察到胎囊時，過4~5天再做一次B超，測孕酮，以排除異位妊娠的可能。ICSI（七）試管嬰兒”的遺傳風險及其它1、卵胞漿內單精子注射授精技術的開展使得許多無精子患者或者嚴重少精子患者通過附睪抽吸或睪丸穿刺等方法獲得精子并完成受精，但是由于造成無精子癥或者嚴重少精子癥的原因是各種各樣的，而且相當部分與遺傳因素有關。因此，通過ICSI所生產的嬰兒就有繼承這些遺傳病的可能。ICSI（七）試管嬰兒”的遺傳風險及其它從第一代、第二代“試管嬰兒”的產生過程來看：前者與正常嬰兒似乎沒有太大的區(qū)別，體外授精技術只是克服了精卵結合的物理障礙，縮短了兩者之間的距離，而整個受精過程與普通受精過程一樣都是自然狀態(tài)下進行的。而后者與前者不同，首先精子是由操作者“挑選”的，一般操作者都是以“貌”取“精”，選擇外形好精子；其次，操作者“強行”將精子注射到卵子內使兩者受精，剝奪了精子和卵子自己的擇“偶”權利。兩點問題：第一、那些從睪丸或者附睪內取出的精子以及質量差的精子本身就可能存在著一定的問題，雖然操作者主觀上選擇的是“好”的精子，但這只是表面上的，并不能反映它們內在的質量和遺傳性狀。再者，顯微注射授精（ICSI）技術引導的不是一個自發(fā)的受精過程，它違反了精卵結合的自然生物學法則，因此必然會增加一定的遺傳風險。目前的一些統(tǒng)計數據也表明：第一代“試管嬰兒”出生后先天性畸形的發(fā)生率并不比普通嬰兒出生后的高（都<1%），而第二代“試管嬰兒”出生后先天性畸形的發(fā)生率比前兩者都高(1%-3%)。第二篇人類精子庫精子的特點精子是人類最寶貴且最豐富的人類繁衍生物資源精子的特點：細胞核致密胞漿很少能運動具有受精能力人類精子庫概念與原理深低溫冷凍儲藏人精子的設備和場所精子或精液進行冷凍儲藏原理：低溫條件下使精子迅速降溫、凝固形成非損傷性結冰精子細胞內分子遠動速度減慢、停止細胞內代謝降低、處于休眠狀態(tài)達到冷凍儲藏的目的可保存10年或更長時間精液冷凍保存原理室溫5C 溫度休克階段5C-5C 冰晶的潛熱階段-5C-15C 冰晶形成階段-15C-80C 再結晶階段-80C-196C 儲藏階段-196C室溫 復溫階段精液冷凍技術冷凍保護劑的選擇外膜保護劑 不易透過細胞膜的物質如卵黃、類脂質等內膜保護劑 能進入細胞內的物質如甘油、二甲基亞砜等（檸檬酸、葡萄糖、果糖、青霉素、鏈霉素、新鮮卵黃、甘油等）制冷源：液氮蒸汽法儲藏方法：顆粒法安瓶法細管法人類精子庫相關主要技術供精者的篩選精液分析、精子功能評估免疫學檢查：抗精子抗體、體液免疫、細胞免疫細胞遺傳學檢查：染色體性傳播性疾病檢查：供精前、供精后6個月復查我國精子庫現狀我國精子庫、人工受精技術的開展：缺乏“精子庫”、“人工受精”概念的認識供精者取精前、取精后無管理規(guī)章缺乏合乎科學、倫理法規(guī)管理制度缺乏現代化科學儀器設備-單純而簡單地液氮罐保存缺乏專業(yè)管理人才缺乏社會文化的普及教育缺乏各級領導的重視有商業(yè)化趨勢目前衛(wèi)生部尚未正式批準任何精子庫2001年國家頒布：人類精子庫、人工受精管理條理人類精子庫的現代化設備標本儲存罐1個（可儲存標本10，000份）檔案管理專用電腦1臺程序降溫儀1套攪拌機1臺精子運輸罐3個純水制作裝置1個液氮保存罐2個（34升/個）冰箱1臺恒溫培養(yǎng)箱1臺離心機1臺水浴箱1臺加熱平臺1臺百級超凈臺1臺電子消毒器5個相差顯微鏡1臺精液分析設備1套恒溫操作臺1套電子天平1個精子庫相關技術與操作規(guī)程精液分析操作規(guī)程精液冷凍復蘇技術操作規(guī)程免疫學檢查操作規(guī)程細胞遺傳學的實驗室檢查操作規(guī)程精液的生化檢查操作規(guī)程衣原體與支原體檢查操作規(guī)程男性激素檢測操作規(guī)程人類精子庫相關規(guī)章制度精子庫工作人員守則精子庫負責人責任制度精子庫設備管理制度精子庫工作人員保密制度精子庫檔案管理制度精子庫工作人員行為準則精子庫材料管理制度精子庫自查制度精子庫分工責任制人類精子庫工作流程圖建立供精者網絡篩選供精者精液分裝、冷藏精液復蘇供應精液或精子授精者隨訪精液質量反饋嚴格按操作規(guī)程和操作制度進行管理人類精子庫的用途開展生殖保險為人工受精技術提供精子人類精子庫相關主要技術供精者健康狀況檢查精液分析、精子功能評估免疫學檢查：抗精子抗體、體液免疫、細胞免疫細胞遺傳學檢查：染色體傳染病性傳播性疾病檢查：精液采集供精者復查供精后6個月復查人類精子庫工作程序精液采集組供精網絡 供精者須知、捐精者登記供精者篩選 體檢、實驗室檢查供精者隨訪 體檢、實驗室檢查精液凍蘇處理組：精液收集、冷藏、復蘇、編碼登記精液供給組：實施方法、資料反饋、列表登記行政管理組：規(guī)章制度、操作常規(guī)、供精協(xié)議、保密制度、倫理法規(guī)信息網微機網絡管理、信息表技術培訓與管理：培訓計劃、考核、日常管理人類精子庫供精者篩選步驟（1）初篩1、工作人員向供精者介紹相關知識與情況2、供精者簽署知情同意書3、面談及其體檢 a.詢問供精者相關既往病史和遺傳病史 b.供精者必須身體健康，心、肺、肝腎脾無異常，四肢無多次靜脈注射痕跡。人類精子庫供精者篩選步驟（2）第二次篩選（實驗室檢查）染色體檢查傳染性疾病以及性傳播性疾病檢查乙肝、丙肝相關檢查梅毒、淋病、愛滋病相關檢查精液相關檢查精子冷凍復蘇率檢查人類精子庫供精者篩選步驟（3）綜合評定供精員健康狀況、合格供精者信息登記。人類精子庫供精者篩選步驟（4）供精者捐獻精液總共取精5次每次都需添加保存液編碼并冷凍保存最后供精結束后進行健康復檢合格為已經取得輔助生育技術批準證書的醫(yī)療機構提供精子并建立合同書精液復蘇并檢測樣品提供精液樣品第三篇

人類輔助生殖技術和人類精子庫倫理原則

一、人類輔助生殖技術倫理原則

人類輔助生殖技術是治療不育癥的一種醫(yī)療手段。為安全、有效、合理地實施人類輔助生殖技術，保障個人、家庭以及后代的健康和利益，維護社會公益，特制定以下倫理原則。(一)有利于患者的原則。1、綜合考慮患者病理、生理、心理及社會因素，醫(yī)務人員有義務告訴患者目前可供選擇的治療手段、利弊及其所承擔的風險，在患者充分知情的情況下，提出有醫(yī)學指征的選擇和最有利于患者的治療方案；2、禁止以多胎和商業(yè)化供卵為目的的促排卵；3、不育夫婦對實施人類輔助生殖技術過程中獲得的配子、胚胎擁有其選擇處理方式的權利，技術服務機構必須對此有詳細的記錄，并獲得夫、婦或雙方的書面知情同意；4、患者的配子和胚胎在末征得其知情同意情況下，不得進行任何處理，更不得進行買賣。(二)知情同意的原則。

l、人類輔助生殖技術必須在夫婦雙方自愿同意并簽署書面知情同意書后方可實施；2、醫(yī)務人員對人類輔助生殖技術適應癥的夫婦，須使其了解：實施該技術的必要性、實施程序、可能承受的風險以及為降低這些風險所采取的措施、該機構穩(wěn)定的成功率、每周期大致的總費用及進口、國產藥物選擇等與患者作出合理選擇相關的實質性信息；3、接受人類輔助生殖技術的夫婦在任何時候都有權提出中止該技術的實施，并且不會影響對其今后的治療；4、醫(yī)務人員必須告知接受人類輔助生殖技術的夫婦及其已出生的孩子隨訪的必要性；5、醫(yī)務人員有義務告知捐贈者對其進行健康檢查的必要性，并獲取書面知情同意書。(三)保護后代的原則。

1、醫(yī)務人員有義務告知受者通過人類輔助生殖技術出生的后代與自然受孕分娩的后代享有同樣的法律權利和義務，包括后代的繼承權、受教育權、贍養(yǎng)父母的義務、父母離異時對孩子監(jiān)護權的裁定等；2、醫(yī)務人員有義務告知接受人類輔助生殖技術治療的夫婦，他們通過對該技術出生的孩子(包括對有出生缺陷的孩子)負有倫理、道德和法律上的權利和義務；3、如果有證據表明實施人類輔助生殖技術將會對后代產生嚴重的生理、心理和社會損害，醫(yī)務人員有義務停止該技術的實施；4、醫(yī)務人員不得對近親間及任何不符合倫理、道德原則的精子和卵子實施人類輔助生殖技術；5、醫(yī)務人員不得實施代孕技術；6、醫(yī)務人員不得實施胚胎贈送助孕技術；7、在尚未解決人卵胞漿移植和人卵核移植技術安全性問題之前，醫(yī)務人員不得實施以治療不育為目的的人卵胞漿移植和人卵核移植技術；8、同一供者的精子、卵子最多只能使5名婦女受孕；9、醫(yī)務人員不得實施以生育為目的的嵌合體胚胎技術。(四)社會公益原則。1、醫(yī)務人員必須嚴格貫徹國家人口和計劃生育法律法規(guī)，不得對不符合國家人口和計劃生育法規(guī)和條例規(guī)定的夫婦和單身婦女實施人類輔助生殖技術；2、根據《母嬰保健法》，醫(yī)務人員不得實施非醫(yī)學需要的性別選擇；3、醫(yī)務人員不得實施生殖性克隆技術；4、醫(yī)務人員不得將異種配子和胚胎用于人類輔助生殖技術；5、醫(yī)務人員不得進行各種違反倫理、道德原則的配子和胚胎實驗研究及臨床工作。(五)保密原則。

1、互盲原則：凡使用供精實施的人類輔助生殖技術，供方與受方夫婦應保持互盲、供方與實施人類輔助生殖技術的醫(yī)務人員應保持互盲、供方與后代保持互盲；2、機構和醫(yī)務人員對使用人類輔助生殖技術的所有參與者(如卵子捐贈者和受者)有實行匿名和保密的義務。匿名是藏匿供體的身份；保密是藏匿受體參與配子捐贈的事實以及對受者有關信息的保密；3、醫(yī)務人員有義務告知捐贈者不可查詢受者及其后代的一切信息，并簽署書面知情同意書。(六)嚴防商業(yè)化的原則。

機構和醫(yī)務人員對要求實施人類輔助生殖技術的夫婦，要嚴格掌握適應癥，不能受經濟利益驅動而濫用人類輔助生殖技術。供精、供卵只能是以捐贈助人為目的，禁止買賣，但是可以給予捐贈者必要的誤工、交通和醫(yī)療補償。(七)倫理監(jiān)督的原則。

1、為確保以上原則的實施，實施人類輔助