天然藥物化學

（Flavonoids）黃酮類化合物本章內容

第一節(jié)概述

第二節(jié)理化性質

第三節(jié)提取與分離

第四節(jié)結構測定一、基本結構與分類（一）黃酮類化合物的基本結構色原酮2-苯基色原酮

第一節(jié)

概述

a.中央三碳鏈的氧化程度b.B-環(huán)聯(lián)接位置（2-或3-位）c.三碳鏈是否構成環(huán)狀（二）黃酮類化合物的分類1．黃酮類（flavones）2．黃酮醇類（flavonol）3．二氫黃酮類（flavanones）4．二氫黃酮醇類（flavanonols）5．異黃酮類（isoflavones）6．查耳酮類（chalcones）7．花色素類8．黃烷-3-醇類9．橙酮類形態(tài)：黃酮類化合物多為晶性固體，少數(shù)為無定形粉末。顏色：

黃酮（醇）及其苷：顯灰黃--黃色。若7-及4’-位引入-OH和–OCH3等，顏色加深。

查爾酮：顯黃--橙黃色。

二氫黃酮（醇）及異黃酮：不顯色或顯微黃色。

花色苷及苷元：顏色隨pH不同而變化：

pH<7顯紅色；pH=8.5顯紫色；pH>8.5顯蘭色。第二節(jié)黃酮類的理化性質及顯色反應

一、性狀黃酮類化合物的溶解行為與其結構及存在狀態(tài)有很大的關系苷元：

難溶或不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機溶劑苷：

可溶于水、乙醇、甲醇中，難溶于苯和氯仿水溶度：

苷元＜苷，連糖越多，水溶度越大

二、溶解性1．苷與苷元

三、酸性與堿性

（一）酸性酸性：酚羥基可溶于堿水、吡啶、DMF中酸性強弱取決于羥基數(shù)目和位置：7、4’－二OH>7－或4’－OH>一般酚OH>5－OH>3－OH應用:

用于提取、分離及鑒定工作

（二）堿性——強酸下形成洋鹽

γ-吡喃酮環(huán)上的1-氧原子，因有未共用的電子對，故表現(xiàn)微弱的堿性，可與強無機酸生成鹽，但生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。

四、呈色反應

還原反應與金屬鹽類試劑的絡合反應硼酸顯色反應堿性試劑顯色反應練習二----鑒別(化學方法)ABCD

第三節(jié)黃酮類化合物的提取與分離

一、提取存在形式：花、葉、果等組織中——苷木部堅硬組織中——游離苷元提取原理：黃酮類化合物的溶解性和酸性

相似相溶與酸堿理論選擇溶劑：苷元：極性小的溶劑，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取苷及極性大的苷元：

用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取極性稍大的甙元一般指：羥基黃酮、雙黃酮、橙酮、查爾酮多糖苷類：一般用沸水提取花青素類：可加少量酸（如0.l％鹽酸）

溶劑萃取法（系統(tǒng)分離法）堿提酸沉法炭粉吸附法樹脂吸附提取法

二、粗分藥材水或醇-水，加熱提取提取液濃縮，加3-4倍醇醇水液沉淀（水雜）濃縮，回收醇，加水水液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚層氯仿層乙酸乙酯層正丁醇層水層葉綠素等脂溶性成分黃酮苷元大極性苷元小極性的苷黃酮苷多糖蛋白質原理：利用黃酮類與其它雜質極性不同，選不同溶劑進行萃?。ㄒ唬┤軇┹腿》ㄔ恚悍恿u基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出堿：常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水)優(yōu)點

A：使含酚羥基化合物成鹽溶解

B：使含羧基雜質（果膠、粘液質、蛋白質等）形成沉淀注意

A：提取時，堿液濃度不宜過高

B：加酸酸化時，酸性也不宜過強應用：蘆丁和槲皮素的提取、分離和鑒定（二）堿提酸沉法（三）活性炭吸附法——適于苷類的精制甲醇粗提液活性炭

黃酮—活性炭

沸水

沸甲醇

7％酚/水

15%酚/醇

（四）樹脂吸附提取法

——適于苷類的精制

極性氫鍵分子大?。浚┧嵝蕴厥饨Y構硅膠聚酰胺凝膠梯度pH萃取法金屬鹽絡合法柱色譜法三、分離方法（一）柱色譜法

常用的分離方法有柱層析法、萃取法、鉛鹽法、HPLC法、薄層層析法等

常用的吸附劑或載體有硅膠聚酰胺葡聚糖凝膠纖維素粉氧化鋁氧化鎂硅藻土等硅膠是一種高活性吸附材料，其化學分子式為mSiO2·nH2O

應用范圍：主要分離小極性和中等極性的化合物，應用最為廣泛。異黃酮、二氫黃酮（醇）、高度甲基化（乙?；┑狞S、酮及黃酮醇多羥基黃酮、黃酮醇及其苷類：硅膠加水去活化吸附規(guī)律：

極性大吸附能力強eg：

A苷元B二糖苷C單糖苷

Rf：A>C>B1.硅膠柱色譜

（1）分離對象：酚、醌、硝基化合物2．聚酰胺柱色譜（2）原理：氫鍵吸附

（3）影響因素：黃酮類分子中羥基的數(shù)目與位置

聚酰胺與黃酮類溶劑與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大?。?）洗脫規(guī)律（先→后順序）叁糖苷＞雙糖苷＞單糖苷＞苷元

①

苷元相同：③-OH位置：羥基數(shù)目相同時，有締合羥基>無締合羥基C=O鄰位-OH黃酮＞C=O對位（或間位）-OH黃酮

②-OH數(shù)目：母核上羥基增加，洗脫順序遞減＞

④黃酮類型：

異黃酮＞二氫黃酮醇＞黃酮＞黃酮醇⑤芳香程度：分子中芳香程度高、共軛雙鍵多，則聚酰胺對其的吸附力強，故難于洗脫二氫黃酮＞查耳酮

＞

正相色譜反相色譜苷與苷元聚酰胺色譜聚酰胺：極性固定相（極性酰胺基團）非極性固定相（非極性脂肪鏈）洗脫劑：有機溶劑（氯仿-甲醇，極性小）含水溶劑（甲醇-水，極性大）先洗脫：游離黃酮（苷元，極性?。┸眨O性大）（柱色譜分離）

Rf值：苷元>苷苷元<苷（TLC色譜鑒別）聚酰胺的雙重色譜性硅膠固定相（硅醇）極性>流動相（醇）極性時為正相聚酰胺固定相（聚酰胺脂肪鏈）極性<流動相（醇水）極性時為反相槲皮素對照品槲皮素蘆丁蘆丁對照品槲皮素對照品槲皮素蘆丁蘆丁對照品聚酰胺TLC硅膠TLC正相與反相層析常用型號：Sephadex-G和Sephadex-LH20原理：吸附作用和分子篩對游離黃酮，主要是吸附作用,吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，苷元的羥基數(shù)目越多，越難洗脫對黃酮苷，主要是分子篩原理,洗脫時按分子量由大到小先后洗脫下來常用洗脫劑：堿性水溶液（0.1mol/LNH4OH），鹽水溶液(0.05mol/LNaCl)

醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等其它溶劑：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝膠會膨脹，體積變大)3．葡聚糖凝膠柱色譜黃酮類化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo黃酮類化合物取代情況Ve/Vo芹菜素5,7,4’－三OH5.3木犀草素5,7,3’,4’－四OH6.3槲皮素3,5,7,3’,4’－五OH8.3楊梅素3,5,7,3’,4’,5’－六OH9.2山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-蕓香糖苷雙糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷單糖苷4.9規(guī)律：苷元的羥基數(shù)越多，Ve/Vo越大，越難以洗脫。

吸附作用苷的分子量越大,其上聯(lián)結糖的數(shù)目越多,Ve/Vo越小,容易洗脫。

分子篩原理苷比苷元先洗脫。

（二）梯度pH萃取法——酸性不同的黃酮苷元的分離酸性：黃酮類化合物具有酸性、且不同數(shù)目和不同位置的酚羥基的酸性強弱不同7,4’-OH＞7-或

4’-OH＞一般Ar-OH

＞5-OH5%NaHCO3

5%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH溶解的堿水乙醚液（脂雜）乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液堿液(3或5-OH黃酮)堿液(一般酚OH黃酮)堿液(7,4’-二OH黃酮)堿液(7或4’-OH黃酮)5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH梯度pH萃取法原理：利用分子中某些特定官能團性質進行分離具有鄰二酚羥基的成分，用醋酸鉛沉淀不具有鄰二酚羥基的成分，用堿式醋酸鉛沉淀

具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物還可以與硼酸反應形成溶于水的硼酸絡合物，可以與不具有鄰二酚羥基的其它黃酮類化合物分離（三）金屬鹽絡合法從檸檬果皮中分離降血壓有效成分目的：使要得到的化合物溶解，而使蛋白質、黏液質等大極性成分形成沉淀除去水提醇沉法提取分離實例1從檸檬果皮中分離降血壓有效成分溶劑萃取法鉛鹽沉淀法凝膠色譜法硅膠色譜法目的：除去Pb，生成PbCO3

提取分離實例1滿山紅化學成分

的提取分離

提取分離實例2去除鞣質等減少雜質

一色譜法的應用

二紫外光譜

三1H-NMR

四13C-NMR

五質譜第四節(jié)黃酮類化合物的檢識與結構測定顏色：多呈黃色母核檢識：

鹽酸-鎂粉反應黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇硼氫化鈉反應二氫黃酮（醇）類取代基團檢識：鋯鹽-枸櫞酸反應3-OH、5-OH黃酮鑒別氨性氯化鍶反應鄰二酚羥基色譜檢識:

硅膠TLC聚酰胺TLC紙層析（PC）理化檢識硅膠TLC：

用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。展開劑：甲苯-甲酸甲酯-甲酸(5:4:1)，苯-甲醇，氯仿-甲醇等。聚酰胺TLC：

適合于含游離酚OH的黃酮及其苷類的分析。

聚酰胺對黃酮類化合物吸附能力強，大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。紙色譜（PC）：適用于各種黃酮類化合物及其苷類的分析色譜法第一相展開采用醇性展開劑如:BAWn-BuOH:HOAc:H2O=4:1:5上層

TBAt-BuOH:HOAc:H2O=3:1:1

水飽和n-BuOH層析行為:Rf值:苷元>單糖苷>雙糖苷一般:苷元在0.70以上，而苷則小于0.7。分配作用第二相展開采用水性展開劑

如：2~6%HOAc水溶液

3%NaCl水溶液

HOAc:濃HCl:H2O=30:3:10層析行為:連接糖鏈越長,Rf

越大(>0.5);

苷元Rf較小，有的留在原點。吸附作用ABCDABCD苷元苷元紙色譜雙向PC

第I向醇性展開劑第II向水性展開劑（BAW、TBA、水飽和正丁醇）（2~8%HAc、3%NaCl、1%HCl）

正相色譜反相色譜固定相（水）極性>流動