標準解讀

《GB/T 14926.55-2001 實驗動物 免疫酶組織化學法》作為一項國家標準，為實驗動物研究中的免疫酶組織化學技術(shù)提供了詳細的操作規(guī)范和要求。與未明確提及的前一版標準或同類方法相比，該標準引入了多項改進和更新，以提升實驗的準確性和可重復性。以下幾點概括了其主要變更內(nèi)容：

  1. 技術(shù)細節(jié)優(yōu)化：標準細化了實驗準備步驟，包括樣本固定、脫水、包埋及切片等預處理過程的具體操作指南，旨在減少因技術(shù)差異導致的實驗變異性。

  2. 試劑與抗體選擇指導：新增了關于抗體特異性和工作濃度選擇的推薦指導，以及酶標二抗的選擇原則，幫助研究人員更科學地選擇實驗材料，提高檢測靈敏度和特異性。

  3. 染色與顯色條件：對染色步驟進行了詳細規(guī)定，包括底物顯色時間、溫度控制等，確保染色結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。同時，引入了優(yōu)化的對照組設置要求，以便于結(jié)果的準確判讀。

  4. 結(jié)果評價與記錄：標準明確了結(jié)果觀察與評價的標準，包括如何通過顯微鏡下觀察判斷陽性信號的強度和分布，以及如何進行客觀量化分析。同時，強調(diào)了實驗記錄的完整性，要求詳細記錄實驗條件和步驟，便于復核和追蹤。

  5. 質(zhì)量控制與實驗室管理：增加了質(zhì)量控制方面的內(nèi)容，如定期校準儀器、使用標準化陽性及陰性對照等，確保實驗結(jié)果的可靠性和實驗室間的可比性。此外，對實驗室環(huán)境、人員培訓等方面也提出了具體要求。

  6. 安全與倫理考量：雖然未直接提及與前標準的對比，但該標準強調(diào)了實驗操作過程中的生物安全和個人防護措施，以及遵循實驗動物倫理原則的重要性，體現(xiàn)了對科研活動人文關懷的提升。

這些變更綜合反映了實驗動物免疫酶組織化學領域方法學的最新進展，旨在促進實驗結(jié)果的準確性和實驗過程的規(guī)范化。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2001-08-29 頒布
  • 2002-05-01 實施
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ICS65.020.30B44中華人民共和國國家標準GB/T14926.55-2001實驗動物免疫酶組織化學法Laboratory2001-08-29發(fā)布2002-05-01實施中華民：共和玉發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T14926.55-2001前本標準規(guī)定了免疫酶組織化學法所用試劑、器材和操作步驛等.本標準由中華人民共和國科學技術(shù)部提出并歸口，本標準起草單位：中國實驗動物學會。本標準主要起草人：賀爭鳴。

中華人民共和國國家標準實驗動物免疫酶組織化學法GB/T14926.55—2001Laboratoryanimal-lmmunohistochemistry(IH)范圍本標準規(guī)定了免疫酶組織化學法(IH)所用試劑、器材和操作步驃等。本標準適用于實驗動物病毒抗原的檢測，2原理用已知的特異性抗體與標本中待測抗原反應,如待測抗原是特異性抗體的相應抗原則形成抗原抗體復合物。此抗原抗體復合物仍保持其抗原活性，可與相應的第二抗體酶結(jié)合物結(jié)合,遇酶底物產(chǎn)生顏色反應。在普通顯微鏡下，根據(jù)顏色的反應判定結(jié)果。主要試劑與器材3.1試劑3.1.1抗病毒單克隆抗體或抗血清3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴1gG抗體標記辣根過氧化物酶3.1.3PBS(0.01mol/L.pH7.6)氯化鈉8.5g磷酸二氫鈉(NaH.PO，·2H.O)0.20g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·12H.O)3.12g蒸餡水加至1000mL3.1.4底物溶液33,3-二胺基聯(lián)苯胺鹽酸鹽(DAB)40mgPBS100mL丙酮5mL3%過氧化氫0.1mL3.2器材3.2.1石蠟切片機或冰凍切片機3.2.2載玻片及蓋玻片。3.2.3普通顯微鏡4操作步驥4.1冰凍切片風干后用丙酮固定10～15min,石蠟切片，常規(guī)脫蠟至PBS(切片應用白膠或鉻礬明膠做粘合劑，以防脫片)。4.2去內(nèi)源酶用0.3%過氧化氫甲醇溶液或1%鹽酸酒精37C作用30min.

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