標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 14926.55-2001 實驗動物 免疫酶組織化學(xué)法》作為一項國家標(biāo)準(zhǔn)，為實驗動物研究中的免疫酶組織化學(xué)技術(shù)提供了詳細(xì)的操作規(guī)范和要求。與未明確提及的前一版標(biāo)準(zhǔn)或同類方法相比，該標(biāo)準(zhǔn)引入了多項改進和更新，以提升實驗的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。以下幾點概括了其主要變更內(nèi)容：

  1. 技術(shù)細(xì)節(jié)優(yōu)化：標(biāo)準(zhǔn)細(xì)化了實驗準(zhǔn)備步驟，包括樣本固定、脫水、包埋及切片等預(yù)處理過程的具體操作指南，旨在減少因技術(shù)差異導(dǎo)致的實驗變異性。

  2. 試劑與抗體選擇指導(dǎo)：新增了關(guān)于抗體特異性和工作濃度選擇的推薦指導(dǎo)，以及酶標(biāo)二抗的選擇原則，幫助研究人員更科學(xué)地選擇實驗材料，提高檢測靈敏度和特異性。

  3. 染色與顯色條件：對染色步驟進行了詳細(xì)規(guī)定，包括底物顯色時間、溫度控制等，確保染色結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。同時，引入了優(yōu)化的對照組設(shè)置要求，以便于結(jié)果的準(zhǔn)確判讀。

  4. 結(jié)果評價與記錄：標(biāo)準(zhǔn)明確了結(jié)果觀察與評價的標(biāo)準(zhǔn)，包括如何通過顯微鏡下觀察判斷陽性信號的強度和分布，以及如何進行客觀量化分析。同時，強調(diào)了實驗記錄的完整性，要求詳細(xì)記錄實驗條件和步驟，便于復(fù)核和追蹤。

  5. 質(zhì)量控制與實驗室管理：增加了質(zhì)量控制方面的內(nèi)容，如定期校準(zhǔn)儀器、使用標(biāo)準(zhǔn)化陽性及陰性對照等，確保實驗結(jié)果的可靠性和實驗室間的可比性。此外，對實驗室環(huán)境、人員培訓(xùn)等方面也提出了具體要求。

  6. 安全與倫理考量：雖然未直接提及與前標(biāo)準(zhǔn)的對比，但該標(biāo)準(zhǔn)強調(diào)了實驗操作過程中的生物安全和個人防護措施，以及遵循實驗動物倫理原則的重要性，體現(xiàn)了對科研活動人文關(guān)懷的提升。

這些變更綜合反映了實驗動物免疫酶組織化學(xué)領(lǐng)域方法學(xué)的最新進展，旨在促進實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和實驗過程的規(guī)范化。


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  • 2002-05-01 實施
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ICS65.020.30B44中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.55-2001實驗動物免疫酶組織化學(xué)法Laboratory2001-08-29發(fā)布2002-05-01實施中華民：共和玉發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T14926.55-2001前本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫酶組織化學(xué)法所用試劑、器材和操作步驛等.本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部提出并歸口，本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國實驗動物學(xué)會。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賀爭鳴。

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)實驗動物免疫酶組織化學(xué)法GB/T14926.55—2001Laboratoryanimal-lmmunohistochemistry(IH)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫酶組織化學(xué)法(IH)所用試劑、器材和操作步驃等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于實驗動物病毒抗原的檢測，2原理用已知的特異性抗體與標(biāo)本中待測抗原反應(yīng),如待測抗原是特異性抗體的相應(yīng)抗原則形成抗原抗體復(fù)合物。此抗原抗體復(fù)合物仍保持其抗原活性，可與相應(yīng)的第二抗體酶結(jié)合物結(jié)合,遇酶底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)。在普通顯微鏡下，根據(jù)顏色的反應(yīng)判定結(jié)果。主要試劑與器材3.1試劑3.1.1抗病毒單克隆抗體或抗血清3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴1gG抗體標(biāo)記辣根過氧化物酶3.1.3PBS(0.01mol/L.pH7.6)氯化鈉8.5g磷酸二氫鈉(NaH.PO，·2H.O)0.20g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·12H.O)3.12g蒸餡水加至1000mL3.1.4底物溶液33,3-二胺基聯(lián)苯胺鹽酸鹽(DAB)40mgPBS100mL丙酮5mL3%過氧化氫0.1mL3.2器材3.2.1石蠟切片機或冰凍切片機3.2.2載玻片及蓋玻片。3.2.3普通顯微鏡4操作步驥4.1冰凍切片風(fēng)干后用丙酮固定10～15min,石蠟切片，常規(guī)脫蠟至PBS(切片應(yīng)用白膠或鉻礬明膠做粘合劑，以防脫片)。4.2去內(nèi)源酶用0.3%過氧化氫甲醇溶液或1%鹽酸酒精37C作用30min.

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