儀器流式細(xì)胞儀(術(shù))2010

流式細(xì)胞儀（術(shù)）FlowCytometry(FCM)雙激光(488nm,635nm)四熒光參數(shù)分選加細(xì)胞富集系統(tǒng)FACSCaliburFACSVantageSE多激光多波長八熒光參數(shù)

高速分選單細(xì)胞點對點分選什么是流式細(xì)胞術(shù)？流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是利用細(xì)胞生物學(xué)，電子學(xué)，流體力學(xué)，免疫學(xué)，激光技術(shù)，電腦技術(shù)對各種血細(xì)胞及組織細(xì)胞，微生物的理化特性進(jìn)行定量分析，并能對特定細(xì)胞群體加以分選的細(xì)胞參量分析技術(shù)?！傲魇健笔侵笢y量過程中細(xì)胞是流動的，不是靜止的。這是與在此之前的細(xì)胞測量技術(shù)的最大差異之處。FCM應(yīng)用范圍細(xì)胞大小細(xì)胞的復(fù)雜程度細(xì)胞表面抗原（標(biāo)志物）的檢測細(xì)胞漿內(nèi)標(biāo)志物（細(xì)胞因子、細(xì)胞器）的檢測細(xì)胞核內(nèi)因子的檢測（如P53）DNA含量/細(xì)胞周期的測定細(xì)胞功能測定（活化、凋亡、死亡）FCM的結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)激發(fā)光源及光束形成系統(tǒng)細(xì)胞信號檢測與分析、顯示、記錄系統(tǒng)各系統(tǒng)按三個互為垂直的軸線安置X軸方向——激發(fā)光軸線Y軸方向——細(xì)胞熒光信號檢測軸線Z軸方向——細(xì)胞流軸線原理圖和流動室圖FCM工作原理

待細(xì)胞被制備成單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進(jìn)入流動室。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的約束下，細(xì)胞排成單列由噴嘴流出，成為細(xì)胞液柱。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點為檢測區(qū)。每一個細(xì)胞通過檢測區(qū)時受到激光照射，產(chǎn)生散射光信號和熒光信號，這些信號由yi的檢測系統(tǒng)收集、分析、處理。FCM液流系統(tǒng)示意圖不同樣本速率形成的樣本流

低速高速長通濾片短通濾片帶通濾片工作流程示意圖細(xì)胞信號的檢測與分析細(xì)胞散射光信號前向角散射信號——FSC（ForwardScatter)側(cè)向角散射信號——SSC(SideScatter)細(xì)胞散射光信號新鮮未經(jīng)處理的細(xì)胞受到光照時產(chǎn)生的散射現(xiàn)象前向角散射信號——FSC（ForwardScatter)意義：反映細(xì)胞大小與活力，細(xì)胞越大，活力越強，信號越強用途：設(shè)閾值排除碎片對被測細(xì)胞的干擾。設(shè)門分析所需細(xì)胞亞群。區(qū)分死活細(xì)胞。前向角散射信號FALSSensorLaser側(cè)向角散射信號——SSC(SideScatter)意義：反映細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)形態(tài)等信息，特別是胞質(zhì)內(nèi)的顆粒成分。內(nèi)部結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，信號越強。用途：外周血樣品中區(qū)分顆粒細(xì)胞與其他白細(xì)胞。同一細(xì)胞群中部分細(xì)胞生理或病理變化，如細(xì)胞凋亡時SSC增大。側(cè)向角散射信號FALSSensor90LSSensorLaser外周血細(xì)胞亞群細(xì)胞熒光信號經(jīng)過特異熒光染色后，細(xì)胞受激光照射而發(fā)射的熒光信號FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L4四個熒光通道分別接收四種不同波長的熒光信號。如何選擇合適的熒光素所選熒光素必須被機器所配激光管激發(fā)熒光素的發(fā)射光譜必須與濾波片相適合多種熒光素光譜之間的重疊應(yīng)該最小PropidiumIodide碘化丙啶400nm500nm600nm700nmPIDNAExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmFluorescein(FITC)

異硫氰酸熒光素400nm500nm600nm700nmWavelengthProteinExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmPhycoerytherin(PE)

藻紅蛋白ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmProteinAllophycocyanin(APC)

別藻藍(lán)蛋白Protein632.5nm(HeNe)ExcitationEmisson300nm400nm500nm600nm700nmFITC和PE熒光光譜補償模型圖補償前后比較熒光信號的測量方式熒光信號的線性測量：放大器的輸出與輸入是線性關(guān)系，用于熒光信號變化范圍較小的參量。如DNA、RNA、總蛋白含量的測量。熒光信號的對數(shù)測量：放大器的輸出與輸入是對數(shù)關(guān)系，用于熒光信號變化范圍大，參量相差幾十，幾百倍，如細(xì)胞膜表面抗原DNA直方圖，二維點圖FCM的數(shù)據(jù)顯示和分析單參數(shù)直方圖顯示FCM的數(shù)據(jù)顯示和分析雙參數(shù)數(shù)據(jù)顯示：提供細(xì)胞與二個參數(shù)之間的關(guān)系，同時提供二個參數(shù)之間的相關(guān)關(guān)系FCM的數(shù)據(jù)顯示和分析多參數(shù)數(shù)據(jù)顯示：目前FCM對細(xì)胞測量已是多參數(shù)的，要在單一圖上顯示這眾多參數(shù)是不可能的。同時對參數(shù)的“設(shè)門”分析可以調(diào)出其他參數(shù)的有關(guān)關(guān)系。多參數(shù)數(shù)據(jù)顯示FCM的數(shù)據(jù)分析單參數(shù)分布直方圖的設(shè)區(qū)分析——陽性細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞DNA含量分布的數(shù)據(jù)分析——計算機擬合法雙參數(shù)數(shù)據(jù)的設(shè)門分區(qū)分析多參數(shù)的數(shù)據(jù)分析流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制FCM儀器的校準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)化：標(biāo)準(zhǔn)熒光微球（Beads）和雞紅細(xì)胞（CRBC）是最常用的參考標(biāo)準(zhǔn)。FCM的測量分辨率一般用變異系數(shù)CV值表示，CV值越小，分辨率越高FCM儀器光學(xué)調(diào)整到最佳狀態(tài)時，標(biāo)準(zhǔn)微球CV值＜＝2%，雞紅細(xì)胞，人外周血淋巴細(xì)胞CV值越為3%流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制FCM檢測DNA倍體的標(biāo)準(zhǔn)

分離正常人外周血淋巴細(xì)胞是最常用的DNA分析和DNA異倍體（DNAAneuploid，DA）檢測的對照物免疫熒光研究中的對照細(xì)胞自發(fā)熒光用同型免疫球蛋白（isotype）測得非特異熒光值用已知陰性細(xì)胞或陽性細(xì)胞雙熒光或多熒光FCM分析中的熒光補償（Flouorescencecompersation）FCM的樣品制備技術(shù)一、單層培養(yǎng)細(xì)胞分散為單個細(xì)胞1）將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液棄去2）加入少量0.25%胰酶過一遍3）加入1-2ml0.25%胰酶，在倒置顯微鏡下見細(xì)胞變圓，立即豎起培養(yǎng)瓶棄去胰酶4）加入3-4ml無Ca2+、Mg2+的PBS，用吸管反復(fù)吹打，使之成單細(xì)胞懸液，移入離心管。5）離心，棄上清，約留0.5ml細(xì)胞懸液，用震蕩器使細(xì)胞分散。6）用細(xì)滴管或注射器迅速將細(xì)胞注入4oC，70%冷乙醇，保存于-20oC冰箱中。FCM的樣品制備技術(shù)二、實體組織分散為單個細(xì)胞對于不同來源的組織，雖然每用通用方法，常用的分散細(xì)胞的方法如下：1）酶消化法：原理酶是蛋白質(zhì)大分子，不能進(jìn)入活細(xì)胞膜，但可破壞細(xì)胞間的膠原纖維，水解細(xì)胞間的粘多糖成分，分解細(xì)胞之間的緊密連接，使細(xì)胞從組織上游離到懸液中，制成細(xì)胞懸液。FCM的樣品制備技術(shù)常用酶類試劑： 胃蛋白酶、胰蛋白酶、彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，膠質(zhì)酶，透明質(zhì)酸酶酶消化的最佳溫度與持續(xù)時間 溫度：37oC

時間：15-20分鐘 用量：每克組織10-15mlFCM的樣品制備技術(shù)2）機械法：用物理方法給組織較大壓力，使細(xì)胞從組織中分散開剪碎法：用鋒利尖刀將組織剪碎成糊狀。網(wǎng)搓法：將小塊組織置于金屬網(wǎng)、尼龍網(wǎng)上搓磨研磨法：用細(xì)胞研磨器將小塊組織研磨成勻漿*機械法制成的細(xì)胞懸液須用尼龍網(wǎng)過濾除去大團(tuán)塊，低速離心，棄上清，去除細(xì)胞碎片。FCM的樣品制備技術(shù)3）化學(xué)試劑處理法：常用試劑：EDTA、EGTA、TPB、TrionX-100FCM的樣品制備技術(shù)三、細(xì)胞熒光染色方法1）免疫熒光染色利用FCM與單克隆抗體技術(shù)相結(jié)合，極大的推動免疫學(xué)的發(fā)展，使傳統(tǒng)免疫學(xué)提高到定量研究水平。采用試劑：各種熒光探針標(biāo)記單克隆抗體檢測范圍：細(xì)胞膜抗原、細(xì)胞內(nèi)功能性抗原，癌基因表達(dá)蛋白等染色方式：直標(biāo)、間標(biāo)Directstaining直接染色FluorescentprobeattachedtoantibodySpecificsignal:weakNonspecificbinding:lowIndirectstaining間接染色Fluorescentprobeattachedtoa2ndantibodySpecificsignal:strong,5-62ndAb/each1stAb;Nonspecificbinding:highFCM的樣品制備技術(shù)熒光抗體的選擇：對同時檢測細(xì)胞幾種不同抗原的表達(dá)量時需選擇幾種不同的熒光素標(biāo)記的抗體。當(dāng)被激光照射后，由于不同的熒光素具有不同的發(fā)射波長，因此被相應(yīng)的熒光通道接收，每一通道接收的熒光信號代表相應(yīng)標(biāo)記抗體特異結(jié)合的抗原雙標(biāo)記染色FCM的樣品制備技術(shù)2）特異性熒光探針染色一些熒光探針對細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)成分，特殊結(jié)構(gòu)，具有特異性結(jié)合能力，如：DNA探針（DNAprobes）:PI、EB、AO、Ho33258/33342、FAHO、DAPI、CA3等RNA探針（RANprobes）:AO，PY蛋白質(zhì)探針（proteinprobes）:FITC線粒體探針（mitodiondrialprobes_):Rh123,DiDc6Ca2+探針:Quin-1,Fara-2,Indo-I,Fluo-3FCM在醫(yī)學(xué)生物學(xué)中的應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)免疫學(xué)腫瘤學(xué)血液學(xué)藥理學(xué)生殖醫(yī)學(xué)微生物學(xué)寄生蟲學(xué)FCM在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用

CellProliferationCellCycle

細(xì)胞增殖細(xì)胞周期*細(xì)胞DNA含量*增殖相關(guān)抗原的表達(dá)*BrdUrd的插入*示蹤染料FCM在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用1）細(xì)胞周期分析

用PI染色可測出細(xì)胞各時相（G0/G1，S，G2/M）所占百分比正常細(xì)胞周期G2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNAAnalysisDNAcontentCount2N4N典型DNA直方圖G0-G1SG2-MFluorescenceIntensity#ofEvents2）細(xì)胞增殖的檢測

DNA含量檢測

PCNA：增殖細(xì)胞核抗原，表達(dá)S期比率

Ki-67：細(xì)胞增殖相關(guān)抗原，表達(dá)于G1，S，G2M各階段細(xì)胞上

Ki-S1：細(xì)胞增殖相關(guān)抗原

CD71（轉(zhuǎn)鐵蛋白受體）：表達(dá)在大多數(shù)增殖細(xì)胞上

cyclinD1，E，A，B1

FCM在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用BrdUrdIncorporation溴脫氧尿核苷，是胸腺嘧啶類似物?？梢詼y定細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期狀態(tài)。BrdU插入到細(xì)胞周期的DNA中。插入的BrdU可以被抗BrdU抗體檢測到。BrdUrdIncorporationFCM在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用3）細(xì)胞凋亡I）DNA亞二倍體峰，檢測晚期凋亡II）AnnexinV檢測早期凋亡III）線粒體功能檢測Apo2-7，位于線粒體膜上，早期凋亡時出現(xiàn)IV）缺口末端標(biāo)記法：Tunel或TDT法V）Caspase-3檢測FlowcytometryofapoptoticcelldeathCelllightscatterDuringtheinitialstagesofapoptosisthecellshrinks,asaconsequencetheFSCdecreases,whileSSCincreasesorremainsunchanged.DNA亞二倍體峰，檢測晚期凋亡PI-Fluorescence#EventsApoptoticcellsNormalG0/G1cells熒光顯微鏡和電子顯微鏡照片缺口末端標(biāo)記法：Tunel或TDT法Tunel法Tunel法FCM在免疫學(xué)中的應(yīng)用人細(xì)胞表面分子檢測，CD系列人三大免疫細(xì)胞水平檢測T，B，NK活化淋巴細(xì)胞檢測CD69，CD25，CD71，HLA-DR細(xì)胞內(nèi)部各種細(xì)胞因子檢測IFN-γ，IFN-α

，IL-2，IL-4等移植配型自身免疫性疾?。篠LE，強直性脊柱炎AIDS：檢測病程及患者免疫狀態(tài)FCM在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)中的應(yīng)用淋巴細(xì)胞免疫分型 熒光染料標(biāo)記單克隆抗體與淋巴細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，結(jié)合多色熒光分析。即可以把各種不同功能的淋巴亞群區(qū)分開來，進(jìn)而得到各亞群的相對比例。FCM在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)中的應(yīng)用CD45/CD14：區(qū)分粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞IsotypeControl（1/2a）：陰性對照，確定FL1和FL2的非特異性結(jié)合水平，界定陰性和陽性細(xì)胞群體。CD3/CD19：鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞CD3/CD4：鑒別T輔助/誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞CD3/CD8：鑒別T抑制/毒性淋巴細(xì)胞CD3/CD16+56：鑒別T淋巴細(xì)胞和NK淋巴細(xì)胞全血樣本熒光抗體染色步驟在各實驗管中加入20ul抗體每管加入100ul全血，振蕩混勻，室溫暗處反應(yīng)15分鐘。加入2ulFACS溶血素，震蕩混勻，室溫暗處10分鐘。300×g離心5分鐘，棄上清。震蕩混勻加入1ml洗液。300×g離心5分鐘，棄上清。震蕩混勻，加入300ul1%多聚甲醛。2-8oC暗處保存，24小時內(nèi)上機檢測。淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性溶血性貧血重癥肌無力免疫缺陷病愛滋病病毒感染傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性活動性肝炎活動性肝硬化腫瘤消化道癌,肝癌,肺癌再生障礙性貧血粒細(xì)胞減少癥淋巴細(xì)胞亞群檢測意義疾病機理研究

疾病輔助診斷移植后免疫檢測治療方案的確定及療效評價CD25高于正常值5-10%,表明即將或已發(fā)生排斥CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險感染

<0.2時,必須停用免疫抑制劑CD2+HLA-DR+增加5-10%,且不伴有CD25的增加,提示巨細(xì)胞病毒感染慢性疲勞,感染后綜合征,纖維肌痛,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,過敏等

疾病預(yù)防淋巴細(xì)胞亞群檢測意義

Control（n=20)ActiveSLE(n=17)StableSLE(n=13)CD370.4±5.8765.8±10.968.5±8.95CD435.0±5.7022.1±4.15**34.5±4.23CD827.9±5.7345.7±9.58**32.7±9.01CD4/CD81.27±0.140.43±0.12**1.05±0.26*NK17.8±5.484.37±3.31**7.59±5.01**鑒別活動期和非活動期SLETh1/Th2細(xì)胞PMA+Ionomycin刺激4-6hrTraditionalCytokineFlowCytometryIL-2PhycoerythrinCD4FITCAntigenSpecific

CytokineFlowCytometryCD69PEanti-TNFFITCFCM細(xì)胞因子染色步驟細(xì)胞經(jīng)4-8小時培養(yǎng)。每管加2ml紅細(xì)胞裂解液，避光10分鐘，1000r/分離心5分鐘，棄上清。加2mlPBS緩沖液洗1次離心，棄上清。每管加單抗20ul，室溫避光15分鐘。2ml緩沖液洗1次。1000r/分離心5分鐘，棄上清。每管加4%多聚甲醛500ul，固定20分鐘。1000r/分，離心5分鐘棄上清。FCM細(xì)胞因子染色步驟每管加0.1%皂素的PBS2ml破膜10分鐘，1000r/分離心5分鐘，棄上清。每管加抗細(xì)胞因子單抗0.2ul，室溫避光孵育30分鐘。2ml含0.1%皂素PBS洗1次，1000r/分，離心5分鐘，棄上清。每管加500ulPBS/2%多聚甲醛懸浮細(xì)胞，上機檢測。*細(xì)胞培養(yǎng)需加入刺激劑：PMA：ionomycin蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑：MonensinTh1/Th2失衡相關(guān)疾病嗜曙紅細(xì)胞增多和IgE升高相關(guān)疾病

Ommen’sSyndrome(Ommen’s綜合征)HyperosinophilicSyndrome(高嗜曙紅細(xì)胞綜合征)Kimura’sDisease(Kimura’s疾病)Well’sSyndrome(Well’s綜合征)傳染病

病毒性疾病

人類免疫缺陷性病毒感染和愛滋病(AIDS)

麻疹

呼吸道合胞體病毒感染

慢性活動性乙型肝炎病毒感染

分枝桿菌和其它細(xì)菌感染

麻瘋病

肺結(jié)核

鳥結(jié)核分枝桿菌復(fù)合感染

細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染

滑膜炎反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎

淋病和梅毒

Th1/Th2失衡相關(guān)疾病

寄生蟲病

原寄生蟲感染：皮膚和內(nèi)臟利什曼病

蠕蟲?。航z蟲病和血吸蟲病真菌性疾病

過敏性支氣管肺霉菌病

念珠菌病

隱球菌病

類球孢子菌病

芽生菌病

球孢子菌病

組織胞漿菌病惡性腫瘤

皮膚基底細(xì)胞和鱗細(xì)胞癌

SezarySyndrome(Sezary綜合征)

淋巴瘤

EBV相關(guān)的B細(xì)胞和非何杰金氏淋巴瘤

何杰金氏淋巴瘤

大細(xì)胞退行性(CD30+)淋巴瘤

多發(fā)性骨髓瘤和Castleman’s綜合征

卡氏肉瘤Th1/Th2失衡相關(guān)疾病變應(yīng)性疾病

皮膚性哮喘

變應(yīng)性哮喘

春季結(jié)膜炎炎性和自身免疫性疾病

巨細(xì)胞(暫時性的)動脈炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

自身免疫性甲狀腺疾病

類肉瘤病

銀屑病(牛皮癬)IgA腎病

多發(fā)性硬化Th1/Th2細(xì)胞檢測意義疾病治療發(fā)病機制研究使用Th1和Th2相關(guān)的細(xì)胞因子

IFN-治療麻瘋病

用抗Th1和Th2相關(guān)細(xì)胞因子或其受體的抗體

抗IL-4抗體治療真菌和寄生蟲感染

使用調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子平衡的藥物:

薩力多胺(Thaliodomide)治療巨細(xì)胞動脈炎疾病治療監(jiān)測FCM檢測外周血樹突狀細(xì)胞 DC（DendritiCell）主要功能是吸收抗原，進(jìn)行加工，并向T淋巴細(xì)胞呈遞，它與其他有此功能的細(xì)胞不同的是，DC具有誘發(fā)初發(fā)免疫反應(yīng)的獨特功能。DC存在于外周淋巴組織中，已在血液和非淋巴組織中發(fā)現(xiàn)了不同類型的DC細(xì)胞，被認(rèn)為是淋巴組織中細(xì)胞的前體。目前研究DC細(xì)胞進(jìn)行抗腫瘤，抗感染治療。FCM檢測外周血樹突狀細(xì)胞外周血中兩種類型DC：CD123+、CD11c+DC活化的標(biāo)志：CD83、CMPF-44DC檢測DC檢測FCM檢測外周血樹突狀細(xì)胞FCM檢測外周血樹突狀細(xì)胞FCM檢測外周血樹突狀細(xì)胞FCM在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用FCM細(xì)胞DNA含量測定已用于 臨床腫瘤診斷 檢測癌前病變 交界性腫瘤診斷 腫瘤預(yù)后估計 療效評價檢測癌基因和抑癌基因的表達(dá)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用FCM在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用DNA指數(shù)（DNAIndex，DI）通常用來描述DNA含量的偏離程度和倍體水平。定義正常二倍體細(xì)胞，DI=1.0。被測樣品DI為

被測樣品G0/G1細(xì)胞DNA量平均數(shù)DI=

正常二倍體細(xì)胞DNA量平均數(shù)FCM在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用DNA指數(shù)（DI）意義0.5單倍體2.0四倍體非0.5、1.0、2.0非整倍體或異倍體＜

1.0亞二倍體＞1.0超二倍體二倍體與異倍體療效評價腫瘤檢測基因表達(dá)蛋白的檢測

細(xì)胞癌基因和抗癌基因的各種蛋白的產(chǎn)物在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和腫瘤的發(fā)生中起著重要的作用?；驒z測抗癌基因檢測Rb、P53（V）、P16癌基因檢測P21、Bcl-2、C-erbB-2調(diào)整基因檢測CD44（S）、CD44（V5）、CD44（V6）、nm23其他基因表達(dá)蛋白P-170、CD95：Apo-1/FasFCM在血液學(xué)中的應(yīng)用

FCM通過對外周血或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測，對各種血液病的診斷、預(yù)后起著舉足輕重的作用FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用白血病的診斷和治療各種血細(xì)胞系統(tǒng)都具有其獨特的抗原，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢查難以區(qū)別時，免疫表型、參數(shù)對各種白血病的診斷和鑒別診斷有決定性的作用FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用各系血細(xì)胞的獨特抗原 干系：CD34

髓系：CD13、CD14 B系：CD10、CD19、CD20 T系：CD2、CD3、CD5、CD7FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用移植配型

FCM測定CD34，HLA-DR，CD33成為干細(xì)胞移植技術(shù)的重要手段FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用陣發(fā)性血紅蛋白尿癥（PNH）

PNH是一種獲得性克隆基因失調(diào)，CD59、CD55抗原表達(dá)減低是該病的一個特征。臨床表現(xiàn)是血管內(nèi)皮出血和再栓塞。PNH的診斷FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用網(wǎng)織紅細(xì)胞的測定 網(wǎng)織紅細(xì)胞的計數(shù)是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)。FCM通過某些熒光染料與紅細(xì)胞中的RNA結(jié)合，定量測定網(wǎng)織紅細(xì)胞中的RNA，得到網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分比。FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用臨床應(yīng)用

干細(xì)胞移植術(shù)后恢復(fù)的判斷 貧血的治療檢測 腫瘤病化療對骨髓的抑制狀況FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用血小板功能檢測 血小板活化時其質(zhì)膜糖蛋白較其靜止時發(fā)生著顯著改變。FCM可通過單抗的免疫熒光標(biāo)記血小板膜糖蛋白、CD36、CD41、CD61、CD62p、CD63、PAC-1。監(jiān)測血小板功能及活化狀態(tài)。FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用

臨床應(yīng)用先天性或獲得性血小板疾病。如：血小板無力癥，巨血小板綜合癥，骨髓增生性疾病血栓栓塞性疾病：心肌梗死、腦栓塞、心絞痛、短暫性腦缺血發(fā)作等血小板減少性紫癜評價血小板活化程度抗血小板藥物治療檢測FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用FCM在藥理學(xué)中的應(yīng)用

從FCMDNA直方圖變化分析，研究化療藥物的作用機制和位點，是否周期特異性或時相特異性，直觀了解化療藥物對癌細(xì)胞動力學(xué)干擾和影響。FCM在藥理學(xué)中的應(yīng)用用藥前用藥后FCM在生殖醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用FCM在精子發(fā)生學(xué)，睪丸瘤，不育癥，藥物對精細(xì)胞的干擾等研究都可進(jìn)行定量研究。特別是可以進(jìn)行X、Y精子的分選FCM在生殖醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用FCM在生