標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 17999.4-1999是一項(xiàng)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱為《SPF雞 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)》。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用SPF（Specific Pathogen Free，無(wú)特定病原體）雞進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的方法、要求及判定準(zhǔn)則，旨在為獸醫(yī)學(xué)研究、疫苗效力評(píng)估及禽類疾病診斷提供統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)SPF雞體內(nèi)是否存在特定抗原或抗體，通過(guò)瓊脂擴(kuò)散技術(shù)來(lái)分析和判斷雞只血清中針對(duì)某些病原體的免疫反應(yīng)狀態(tài)。

試驗(yàn)材料與試劑

  • SPF雞：確保試驗(yàn)雞群無(wú)特定病原體感染。
  • 瓊脂板：適宜的凝膠介質(zhì)，用于抗原或抗體的擴(kuò)散。
  • 抗原/抗體溶液：根據(jù)檢測(cè)需要準(zhǔn)備相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)抗原或抗體對(duì)照。
  • 雞血清樣本：從SPF雞采集，作為檢測(cè)樣品。

實(shí)驗(yàn)步驟

  1. 準(zhǔn)備瓊脂板：在瓊脂中加入適量的電解質(zhì)溶液，使其適合抗原-抗體反應(yīng)的發(fā)生。
  2. 樣品與對(duì)照處理：在瓊脂平板上打孔，分別加入測(cè)試雞血清樣本和已知陽(yáng)性、陰性對(duì)照抗血清。
  3. 抗原/抗體擴(kuò)散：在適宜條件下（如恒溫箱內(nèi)），允許抗原和抗體在瓊脂中擴(kuò)散并形成沉淀線。
  4. 結(jié)果觀察與記錄：經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，觀察瓊脂板上是否形成沉淀環(huán)或線，記錄其形態(tài)、大小及位置。

結(jié)果判定

  • 沉淀線的出現(xiàn)與特征：陽(yáng)性結(jié)果通常表現(xiàn)為清晰的沉淀線或環(huán)，表明存在特異性抗原-抗體反應(yīng)。
  • 對(duì)照解釋：通過(guò)與陽(yáng)性及陰性對(duì)照的對(duì)比，確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果的有效性。
  • 結(jié)果報(bào)告：詳細(xì)記錄每份樣品的檢測(cè)結(jié)果，并對(duì)異常結(jié)果進(jìn)行說(shuō)明。

注意事項(xiàng)

  • 實(shí)驗(yàn)室條件控制：確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境無(wú)菌，避免交叉污染。
  • 操作標(biāo)準(zhǔn)化：嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，保證試驗(yàn)的重復(fù)性和可比性。
  • 人員培訓(xùn)：操作人員需具備相應(yīng)技能，熟悉試驗(yàn)流程和安全措施。

該標(biāo)準(zhǔn)為SPF雞的健康狀況監(jiān)測(cè)及疾病研究提供了科學(xué)依據(jù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)方法，能夠有效評(píng)估雞群的免疫狀態(tài)及病原體感染情況。


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  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17999.5-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實(shí)施
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TCS.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)SPFchicken-Agargelprecipitationtest1999-11-10發(fā)布2000-04-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.4--1999本標(biāo)準(zhǔn)是在我國(guó)建立的瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)的基礎(chǔ)上,并參照美國(guó)SPAFAS公司AGP操作規(guī)程編制而成。SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家系列標(biāo)準(zhǔn)，包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)》SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法還包括以下部分：GB/T17999.1—1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn);GB/T17999.2—1999SPF雞血清中和試驗(yàn)；GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn)；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);GB/T17999.6-1999SPF雞胚敏感試驗(yàn)：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白癇沙門氏菌檢驗(yàn);GB/T17999.8-1999SPF雞，試管凝集試驗(yàn)；GB/T17999.9—1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部、國(guó)家科學(xué)技術(shù)部提出本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心、山東省農(nóng)科院家禽研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙立紅、陳德威、張秀美、靳彥華、秦卓明。

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.4-1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)SPrchicken--Agargelprecipitationtest范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)所用試劑、材料，操作程序及結(jié)果判定等本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染以下病毒后的沉淀抗體的監(jiān)測(cè)：禽流感病毒A型（AvianInfluezaVirusTypeA）、傳染性支氣管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus）、傳染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus）、傳染性喉氣管炎病毒（InfectiousLaryngotracheitisVirus)、禽痘病毒（FowlPoxVirus)、馬立克氏病病毒（Marek'sDiseaseVirus）、禽腦脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelitisVirus）、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒(ReticuloendotheliosisVirus）、禽呼腸孤病毒(病毒性關(guān)節(jié)炎）AvianReovirus)、禽腺病毒1群（AvianAdenovirusGroupI）、多殺性巴氏桿菌（Paslerrellamrltociaa)。2原理瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是一種沉淀反應(yīng)?？乖⒖贵w在含有電解質(zhì)的瓊脂凝膠中，可以向四周自由擴(kuò)散,二者互相結(jié)合，在最適比例處出現(xiàn)沉淀線。常采用已知抗原檢測(cè)相應(yīng)的沉淀抗體。3試劑和材料3.1試劑3.1.1瓊擴(kuò)抗原3.1.2陽(yáng)性血清3.1.3被檢血清。3.1.40.01M.pH7.2、8%氯化鈉磷酸緩沖液3.1.5優(yōu)質(zhì)瓊脂粉或瓊脂糖。3.2材料3.2.1瓊擴(kuò)板。3.2.22打孔器。3.2.3移液器。4操作程序4.1瓊脂板制備1g優(yōu)質(zhì)瓊脂粉或0.8g～1g瓊脂糖加人100mL0.01M.pH7.2.8%氯化鈉磷酸緩沖液中(檢測(cè)禽流感病毒感染時(shí),同0.01mol/L、DH6.4的8%氯化鈉磷酸緩沖液配制瓊脂)水浴加熱融化，硝涼(60C～65C）.倒入瓊擴(kuò)板內(nèi)(厚度為3mm).待瓊脂凝固后,4C冰箱保存?zhèn)溆?.2打孔用六

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