標準解讀
《GB/T 18448.2-2008 實驗動物 弓形蟲檢測方法》與《GB/T 18448.2-2001 實驗動物 弓形蟲檢測方法》相比,主要在以下幾個方面進行了更新和調整:
-
檢測技術的更新:2008版標準融入了近年來在實驗動物弓形蟲檢測領域的新技術和新方法,如改進的免疫學檢測技術(如酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA)和分子生物學技術(如PCR),以提高檢測的敏感性和特異性,而2001版標準主要依賴于傳統(tǒng)的一些微生物學和血清學方法。
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檢測對象范圍的明確:2008版標準對適用的實驗動物種類和樣本類型(如血液、組織、排泄物等)進行了更詳細的分類和說明,使得檢測范圍更加明確和廣泛,有利于實際操作中的準確應用。
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采樣和前處理方法優(yōu)化:新版標準對樣品采集、保存及預處理步驟進行了優(yōu)化,提供了更為詳細的操作指導,旨在減少因樣本處理不當導致的假陽性或假陰性結果,提高檢測的準確性。
-
質量控制要求提升:2008版標準加強了實驗室質量控制要求,包括內部質控、外部質控以及對檢測試劑和設備的校準與驗證,確保檢測結果的可靠性和可比性。
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結果判定標準的修訂:根據新的檢測技術和科學研究進展,新版標準對弓形蟲感染的判定標準進行了修訂,明確了陽性和陰性的具體判定指標,以及可疑結果的處理方式,提高了檢測結果解釋的一致性和科學性。
-
安全性和倫理考量:2008版標準在實驗操作過程中增加了對實驗人員的安全防護指導和動物福利的考慮,強調了實驗操作應遵循相關的生物安全和倫理原則。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2008-12-03 頒布
- 2009-03-01 實施
下載本文檔
文檔簡介
犐犆犛65.020.30
犅44
中華人民共和國國家標準
犌犅/犜18448.2—2008
代替GB/T18448.2—2001
實驗動物弓形蟲檢測方法
犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犪狀犻犿犪犾—犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犜狅狓狅狆犾犪狊犿犪犵狅狀犱犻犻
20081203發(fā)布20090301實施
中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局
發(fā)布
中國國家標準化管理委員會
書
犌犅/犜18448.2—2008
前言
GB/T18448《實驗動物》由10項實驗動物寄生蟲檢測方法組成。
本部分為GB/T18448的第2部分《實驗動物弓形蟲檢測方法》。
本部分自實施之日起代替GB/T18448.2—2001。
本部分與GB/T18448.2—2001相比主要技術差異如下:
a)增加弓形蟲酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和免疫酶染色試驗(IEA),將PCR檢測方法列入附錄
內容,保留間接血凝試驗(IHA)作為推薦方法之一;
b)將檢測方法所需的“材料與試劑”和“檢測步驟”分別敘述。
本部分附錄A是規(guī)范性附錄。
本部分由全國實驗動物標準化技術委員會提出并歸口。
本部分起草單位:全國實驗動物標準化技術委員會。
本部分主要起草人:潘振業(yè)、屈霞琴、陳俏梅、李冠民、王彥平。
本部分所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為:
———GB/T14926.34—1994,GB/T18448.2—2001。
Ⅰ
書
犌犅/犜18448.2—2008
實驗動物弓形蟲檢測方法
1范圍
GB/T18448的本部分規(guī)定了實驗動物弓形蟲的檢測方法和試劑等。
本部分適用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬及猴等實驗動物弓形蟲的檢測。
2原理
根據免疫學原理,采用弓形蟲抗原檢測被檢動物血清中的弓形蟲抗體。
3主要試劑和器材
3.1試劑
3.1.1ELISA抗原
3.1.1.1特異性抗原
弓形蟲(RH株)速殖子腹腔接種清潔級以上實驗小鼠(KM、ICR、BALB/c等均可),3d~5d后,以
無菌生理鹽水灌洗被接種小鼠的腹腔,收集含有蟲體的小鼠腹腔液,3000r/min離心10min,取沉淀,
PBS洗3次。沉淀物加適量蒸餾水反復凍融5次,或用超聲波處理后,10000r/min離心30min,取上
清液。上清液用葡聚糖凝膠G200進行純化(柱內徑×柱高:1.5cm×60cm),流速為0.2mL/min。每
管收集2mL左右。共收集60管以上。分別測定每個收集管中蛋白在280nm下的吸光度值。分離純
化后,出現(xiàn)2個蛋白峰;將第一峰各管合并,即為弓形蟲特異性抗原(也稱弓形蟲可溶性抗原)。
3.1.1.2正??乖?/p>
以無菌生理鹽水注射清潔級以上實驗小鼠(與制備抗原的小鼠同品種或品系)腹腔,3d~5d后,以
無菌生理鹽水灌洗被注射小鼠腹腔,收集小鼠腹腔液,3000r/min離心10min,取沉淀,PBS洗3次。
沉淀物加適量蒸餾水反復凍融5次,或用超聲波處理后,10000r/min離心30min,取上清液,即為正常
抗原。
3.1.2抗原片
弓形蟲RH株速殖子腹腔接種清潔級以上實驗小鼠(KM、ICR、BALB/c等均可),3d~5d后處
死,收取蟲體,胰酶消化,以一定濃度涂片,充分晾干后冷丙酮固定,-20℃保存。
3.1.3弓形蟲抗原致敏綿羊紅細胞
將綿羊紅細胞與一定濃度的鞣酸液反應,制成鞣化紅細胞,然后,用弓形蟲可溶性抗原在適宜的條
件下致敏鞣化紅細胞,制成弓形蟲抗原致敏綿羊紅細胞。
3.1.4正常對照綿羊紅細胞。
3.1.5陽性對照血清
自然感染弓形蟲的相應動物抗體陽性血清,或弓形蟲免疫血清。
3.1.6陰性對照血清
確證無弓形蟲感染的動物血清。
3.1.7酶結合物
辣根過氧化物酶標記的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬和猴IgG
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