標準解讀
GB/T 18654.13-2008 是一項中國國家標準,全稱為《養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗 第13部分:同工酶電泳分析》。該標準主要規(guī)定了利用同工酶電泳技術(shù)對養(yǎng)殖魚類種質(zhì)進行質(zhì)量檢測的方法、步驟和要求,以確保魚類種質(zhì)資源的優(yōu)良性狀得以保持和改善,促進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。下面是對該標準內(nèi)容的具體說明:
標準適用范圍
本標準適用于養(yǎng)殖魚類種質(zhì)的同工酶電泳分析,通過這種方法可以鑒定魚類品種的純度、遺傳多樣性及種群間的遺傳關(guān)系,為魚類種質(zhì)資源的評估、選育及保護提供科學依據(jù)。
同工酶電泳基本原理
同工酶是指催化相同化學反應(yīng)但分子結(jié)構(gòu)有所差異的一組酶。同工酶電泳是一種生物化學技術(shù),通過電場作用下蛋白質(zhì)(此處指同工酶)在凝膠介質(zhì)中的分離,來分析其多態(tài)性。不同基因型的個體,其同工酶譜帶表現(xiàn)會有所差異,據(jù)此可進行遺傳差異分析。
檢驗材料與樣品制備
- 樣品選擇:應(yīng)從目標魚類的不同群體中隨機選取健康、無疾病的個體作為檢測對象。
- 組織采集:通常采集肌肉、肝臟、鰓等組織,具體依魚種及實驗需求而定。
- 樣品保存與處理:采樣后需迅速冷凍或冷藏,以防止酶活性變化,隨后根據(jù)實驗要求進行提取和制備。
電泳條件與操作步驟
標準詳細規(guī)定了電泳緩沖液的配制、凝膠的制備、樣品加載、電泳條件(如電壓、電流、時間)以及染色與脫色等具體操作步驟,確保實驗結(jié)果的重復性和準確性。
結(jié)果分析與判定
- 譜帶觀察:電泳結(jié)束后,通過特定染色方法使同工酶條帶顯色,然后對比分析各條帶的位置、數(shù)量和強度。
- 數(shù)據(jù)記錄與比較:記錄各樣品的同工酶圖譜,通過比對不同樣品間譜帶的異同,評估遺傳相似性或差異。
- 判定標準:根據(jù)譜帶特征,可判定魚類的遺傳純度、雜交程度或種群間的親緣關(guān)系。
質(zhì)量控制與注意事項
標準強調(diào)了實驗過程中的質(zhì)量控制措施,包括實驗室環(huán)境控制、試劑與儀器校準、操作規(guī)范性等,確保檢驗結(jié)果的可靠性。同時提醒操作人員注意個人防護,遵守生物安全原則。
文檔與報告
要求詳細記錄實驗過程、所用材料、操作步驟及觀察結(jié)果,并按照標準格式編制檢驗報告,以便于信息交流和后續(xù)研究。
該標準通過規(guī)范同工酶電泳分析方法,為養(yǎng)殖魚類種質(zhì)的科學管理和遺傳改良提供了重要的技術(shù)支持和質(zhì)量保障。
如需獲取更多詳盡信息,請直接參考下方經(jīng)官方授權(quán)發(fā)布的權(quán)威標準文檔。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2008-06-27 頒布
- 2008-10-01 實施
文檔簡介
犐犆犛65.150
犅50
中華人民共和國國家標準
犌犅/犜18654.13—2008
養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗
第13部分:同工酶電泳分析
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20080627發(fā)布20081001實施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局
發(fā)布
中國國家標準化管理委員會
書
犌犅/犜18654.13—2008
前言
GB/T18654《養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗》分為下列部分:
———第1部分:檢驗規(guī)則;
———第2部分:抽樣方法;
———第3部分:性狀測定;
———第4部分:年齡與生長的測定;
———第5部分:食性分析;
———第6部分:繁殖性能的測定;
———第7部分:生態(tài)特性分析;
———第8部分:耗氧率與臨界窒息點的測定;
———第9部分:含肉率測定;
———第10部分:肌肉營養(yǎng)成分的測定;
———第11部分:肌肉中主要氨基酸含量的測定;
———第12部分:染色體組型分析;
———第13部分:同工酶電泳分析;
———第14部分:DNA含量的測定;
———第15部分:RAPD分析;
……
本部分為GB/T18654的第13部分。
本部分的附錄A為規(guī)范性附錄。
本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本部分由全國水產(chǎn)標準化技術(shù)委員會淡水養(yǎng)殖分技術(shù)委員會歸口。
本部分起草單位:上海水產(chǎn)大學、中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所。
本部分主要起草人:李思發(fā)、趙金良、徐忠法、蔡完其、鄒曙明。
Ⅰ
書
犌犅/犜18654.13—2008
養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗
第13部分:同工酶電泳分析
1范圍
GB/T18654的本部分規(guī)定了魚類同工酶聚丙烯酰胺凝膠水平電泳分析的試劑與材料、儀器和設(shè)
備、抽樣、分析步驟和結(jié)果判定。
本部分適用于魚類同工酶電泳分析。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過GB/T18654的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文
件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據(jù)本部分達成
協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本
部分。
GB/T18654.1—2002養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第1部分:檢驗規(guī)則
GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第2部分:抽樣方法
3原理
同工酶為該酶基因產(chǎn)物的表現(xiàn)型,根據(jù)其所帶電荷的不同和分子大小、形狀的不同,在電場和凝膠
中出現(xiàn)各同工酶組分不同的遷移率,經(jīng)催化、染色、掃描,根據(jù)酶帶遷移距離、數(shù)目及吸收強度進行分析
比較,判定魚類物種、種群的遺傳特性。
4試劑和材料
除非另有說明,在分析中僅使用確認為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水。
4.1丙烯酰胺(Arc)。
4.2犖′,犖′亞甲基雙丙烯酰胺或甲叉雙丙烯酰胺(Bis)。
4.3四甲基乙二胺(TEMED)。
4.4過硫酸胺。
4.5三羥甲基氨基甲烷(Tris)。
4.6檸檬酸。
4.7乙二胺四乙酸(EDTA)。
4.8硼酸。
4.9L組氨酸。
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