標準解讀

《GB/T 19495.3-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法》是中國國家標準化管理委員會發(fā)布的一項國家標準，旨在為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測提供統(tǒng)一、規(guī)范的核酸（DNA或RNA）提取和純化操作流程。該標準詳細規(guī)定了從轉(zhuǎn)基因植物、動物及其衍生產(chǎn)品中有效提取和純化核酸的步驟、所需材料、質(zhì)量控制指標及注意事項，以確保檢測結(jié)果的準確性和可重復(fù)性。下面是該標準內(nèi)容的詳細介紹：

標準適用范圍

本標準適用于轉(zhuǎn)基因植物、轉(zhuǎn)基因動物及其制品中DNA或RNA的提取與純化，是進行后續(xù)轉(zhuǎn)基因成分定性或定量檢測的前提步驟。它覆蓋了從樣本預(yù)處理到最終核酸溶液制備的全過程。

關(guān)鍵內(nèi)容概述

  1. 樣本準備：標準明確了樣本采集、保存的條件和方法，確保樣本中的核酸完整性不被破壞，并減少外界污染。

  2. 核酸提取：詳細描述了采用物理、化學或酶學方法破碎細胞壁和膜的過程，釋放出核酸。這一步可能包括使用特定的裂解液、蛋白酶K等試劑，以及通過離心、吸附、洗滌等手段分離核酸。

  3. 純化過程：闡述了如何通過柱層析、沉淀等技術(shù)去除蛋白質(zhì)、多糖、酚類等雜質(zhì)，獲得高純度的核酸。強調(diào)了在純化過程中避免核酸降解和污染的重要性。

  4. 質(zhì)量控制：提出了核酸提取純化后應(yīng)進行的質(zhì)量評估指標，如紫外吸收比值（A260/A280）、電泳檢測等，用以評估核酸的純度和完整性。

  5. 操作安全與環(huán)境控制：標準中還包含了實驗操作的安全指導(dǎo)原則和實驗室環(huán)境控制要求，確保實驗人員安全及防止交叉污染。

  6. 記錄與報告：強調(diào)了實驗過程中詳細記錄每一步操作及所觀察到的現(xiàn)象的重要性，以及如何編寫實驗報告，確保實驗的可追溯性和透明度。

注意事項

  • 強調(diào)個性化調(diào)整：雖然提供了通用流程，但也指出根據(jù)不同的樣本類型和實驗?zāi)康模赡苄枰獙μ崛》桨缸鲞m當調(diào)整。
  • 試劑與設(shè)備選擇：推薦使用高質(zhì)量的試劑和合適的儀器設(shè)備，以保證提取效率和核酸質(zhì)量。
  • 實驗室技能：標準雖提供了詳細指導(dǎo)，但實施者需具備一定的分子生物學實驗技能和經(jīng)驗。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2004-04-13 頒布
  • 2004-04-13 實施
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文檔簡介

ICS67.050B04中華人民共和國國家標準GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-Nucleicacidextraction2004-04-13發(fā)布2004-04-13實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局愛布中國國家標準化管理委員會

GB/T19495.3-2004三次前言范圍2規(guī)范性引用文件原則實驗室通用要求45提取步強6測試報告附錄A（規(guī)范性附錄)-三氯甲烷法提取DNA附錄B（規(guī)范性附錄)PVP法提取DNA附錄C（規(guī)范性附錄）CTAB法提取DNA附錄D（規(guī)范性附錄)硅土法提取DNA附錄E（規(guī)范性附錄)順-三氯甲燒法提取DNA19附錄F（資料性附錄）提取DNA方法應(yīng)用實例·20參考文獻22

GB/T19495.3—2004GB/T19495《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測》為系列標準：GB/T19495.1-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義：GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求：GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法；-GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定性PCR檢測方法；GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法；-GB/T19495.6—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測基因芯片檢測方法;GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測抽樣和制樣方法；-GB/T19495.8—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測蛋白質(zhì)檢測方法：本部分引用了ENISO/DIS21571中的部分內(nèi)容。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D和附錄E為規(guī)范性附錄，附錄F資料性附錄本部分由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本部分由中華人民共和國質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局批準發(fā)布本部分起草單位：中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國汕頭出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國廣州出入境檢驗檢疫局、國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局動植物檢疫實驗所、中國農(nóng)科院生物技術(shù)所、山東農(nóng)科院植保所。本部分主要起草人：高宏偉、相大鵬、草文、朱水芳、陳長法、蔡穎、許業(yè)莉、莊逸林、梁希揚、甄宇江、金蕪軍、路興波。本部分系首次發(fā)布的國家標準

GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法范圍GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中DNA提取純化方法以及DNA溶液濃度測定的基本要本部分適用于轉(zhuǎn)基因食品等加工產(chǎn)品·也適用于轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品。范性引用文件下列文件中的條款通過GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分，然而,鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求GB/T19495.5-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸定量PCR檢測方法GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測油樣和制樣方法原則3.1一一般性原則核酸提取的目的是提供合適的用于后續(xù)分析的DNA。DNA的質(zhì)量包括提取的DNA分子的平均長度，化學純度以及DNA序列及雙螺旋的完整性.例如,DNA堿基的鏈內(nèi)、鏈間的聯(lián)系,單鏈間隙的聯(lián)系等。而且，這些情況是序列特異性的，因此在基因組中不是隨機分布的3.2提取DNA提取的基本原則是釋放樣品中的DNA.隨后純化DNA去除PCR反應(yīng)抑制劑。附錄A中不同的DNA提取純化方法適用于不同的樣品。DNA定量有助于后續(xù)的PCR分析，可以通過物理方法(測量特定波長下的光吸收).化學-物理方法(結(jié)合可以發(fā)熒光的物質(zhì)).酶法(生物熒光檢測)或者定量PCR方法。后者最適用于多組分樣品以及含量低或已降解的DNA.實驗室通用要求隨機的DNA污染來源于灰塵及氣溶膠。因此，實驗室工作區(qū)域的組織以及良好的實驗操作（GLP）基于：實驗操作中每一步驛的系統(tǒng)控制：樣品操作的“單向流動”原則。后者可以保證被分析的DNA以及PCR產(chǎn)生的DNA保持分離性。具體

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