標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19495.3-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法》是中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布的一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)提供統(tǒng)一、規(guī)范的核酸（DNA或RNA）提取和純化操作流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從轉(zhuǎn)基因植物、動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品中有效提取和純化核酸的步驟、所需材料、質(zhì)量控制指標(biāo)及注意事項(xiàng)，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。下面是該標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容的詳細(xì)介紹：

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因植物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其制品中DNA或RNA的提取與純化，是進(jìn)行后續(xù)轉(zhuǎn)基因成分定性或定量檢測(cè)的前提步驟。它覆蓋了從樣本預(yù)處理到最終核酸溶液制備的全過(guò)程。

關(guān)鍵內(nèi)容概述

  1. 樣本準(zhǔn)備：標(biāo)準(zhǔn)明確了樣本采集、保存的條件和方法，確保樣本中的核酸完整性不被破壞，并減少外界污染。

  2. 核酸提取：詳細(xì)描述了采用物理、化學(xué)或酶學(xué)方法破碎細(xì)胞壁和膜的過(guò)程，釋放出核酸。這一步可能包括使用特定的裂解液、蛋白酶K等試劑，以及通過(guò)離心、吸附、洗滌等手段分離核酸。

  3. 純化過(guò)程：闡述了如何通過(guò)柱層析、沉淀等技術(shù)去除蛋白質(zhì)、多糖、酚類(lèi)等雜質(zhì)，獲得高純度的核酸。強(qiáng)調(diào)了在純化過(guò)程中避免核酸降解和污染的重要性。

  4. 質(zhì)量控制：提出了核酸提取純化后應(yīng)進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)，如紫外吸收比值（A260/A280）、電泳檢測(cè)等，用以評(píng)估核酸的純度和完整性。

  5. 操作安全與環(huán)境控制：標(biāo)準(zhǔn)中還包含了實(shí)驗(yàn)操作的安全指導(dǎo)原則和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制要求，確保實(shí)驗(yàn)人員安全及防止交叉污染。

  6. 記錄與報(bào)告：強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中詳細(xì)記錄每一步操作及所觀察到的現(xiàn)象的重要性，以及如何編寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，確保實(shí)驗(yàn)的可追溯性和透明度。

注意事項(xiàng)

  • 強(qiáng)調(diào)個(gè)性化調(diào)整：雖然提供了通用流程，但也指出根據(jù)不同的樣本類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赡苄枰獙?duì)提取方案做適當(dāng)調(diào)整。
  • 試劑與設(shè)備選擇：推薦使用高質(zhì)量的試劑和合適的儀器設(shè)備，以保證提取效率和核酸質(zhì)量。
  • 實(shí)驗(yàn)室技能：標(biāo)準(zhǔn)雖提供了詳細(xì)指導(dǎo)，但實(shí)施者需具備一定的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技能和經(jīng)驗(yàn)。


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  • 2004-04-13 頒布
  • 2004-04-13 實(shí)施
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ICS67.050B04中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-Nucleicacidextraction2004-04-13發(fā)布2004-04-13實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局愛(ài)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19495.3-2004三次前言范圍2規(guī)范性引用文件原則實(shí)驗(yàn)室通用要求45提取步強(qiáng)6測(cè)試報(bào)告附錄A（規(guī)范性附錄)-三氯甲烷法提取DNA附錄B（規(guī)范性附錄)PVP法提取DNA附錄C（規(guī)范性附錄）CTAB法提取DNA附錄D（規(guī)范性附錄)硅土法提取DNA附錄E（規(guī)范性附錄)順-三氯甲燒法提取DNA19附錄F（資料性附錄）提取DNA方法應(yīng)用實(shí)例·20參考文獻(xiàn)22

GB/T19495.3—2004GB/T19495《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)》為系列標(biāo)準(zhǔn)：GB/T19495.1-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義：GB/T19495.2—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求：GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法；-GB/T19495.4—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定性PCR檢測(cè)方法；GB/T19495.5—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法；-GB/T19495.6—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)基因芯片檢測(cè)方法;GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)抽樣和制樣方法；-GB/T19495.8—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)蛋白質(zhì)檢測(cè)方法：本部分引用了ENISO/DIS21571中的部分內(nèi)容。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D和附錄E為規(guī)范性附錄，附錄F資料性附錄本部分由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本部分由中華人民共和國(guó)質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局批準(zhǔn)發(fā)布本部分起草單位：中華人民共和國(guó)山東出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)汕頭出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局動(dòng)植物檢疫實(shí)驗(yàn)所、中國(guó)農(nóng)科院生物技術(shù)所、山東農(nóng)科院植保所。本部分主要起草人：高宏偉、相大鵬、草文、朱水芳、陳長(zhǎng)法、蔡穎、許業(yè)莉、莊逸林、梁希揚(yáng)、甄宇江、金蕪軍、路興波。本部分系首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T19495.3—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法范圍GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中DNA提取純化方法以及DNA溶液濃度測(cè)定的基本要本部分適用于轉(zhuǎn)基因食品等加工產(chǎn)品·也適用于轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品。范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分，然而,鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)通用要求和定義GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求GB/T19495.5-2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸定量PCR檢測(cè)方法GB/T19495.7—2004轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)油樣和制樣方法原則3.1一一般性原則核酸提取的目的是提供合適的用于后續(xù)分析的DNA。DNA的質(zhì)量包括提取的DNA分子的平均長(zhǎng)度，化學(xué)純度以及DNA序列及雙螺旋的完整性.例如,DNA堿基的鏈內(nèi)、鏈間的聯(lián)系,單鏈間隙的聯(lián)系等。而且，這些情況是序列特異性的，因此在基因組中不是隨機(jī)分布的3.2提取DNA提取的基本原則是釋放樣品中的DNA.隨后純化DNA去除PCR反應(yīng)抑制劑。附錄A中不同的DNA提取純化方法適用于不同的樣品。DNA定量有助于后續(xù)的PCR分析，可以通過(guò)物理方法(測(cè)量特定波長(zhǎng)下的光吸收).化學(xué)-物理方法(結(jié)合可以發(fā)熒光的物質(zhì)).酶法(生物熒光檢測(cè))或者定量PCR方法。后者最適用于多組分樣品以及含量低或已降解的DNA.實(shí)驗(yàn)室通用要求隨機(jī)的DNA污染來(lái)源于灰塵及氣溶膠。因此，實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域的組織以及良好的實(shí)驗(yàn)操作（GLP）基于：實(shí)驗(yàn)操作中每一步驛的系統(tǒng)控制：樣品操作的“單向流動(dòng)”原則。后者可以保證被分析的DNA以及PCR產(chǎn)生的DNA保持分離性。具體

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