標準解讀

《GB/T 19915.7-2005 豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法》是中國關(guān)于豬鏈球菌2型檢測的一項國家標準，旨在為相關(guān)領(lǐng)域提供一種快速、靈敏且特異的檢測手段。該標準詳細規(guī)定了利用熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, F-PCR）技術(shù)來鑒定和定量檢測豬鏈球菌2型的方法步驟、所需材料、操作條件及質(zhì)量控制要求，以確保檢測結(jié)果的準確性和可重復(fù)性。下面是該標準的主要內(nèi)容概述：

標準適用范圍

本標準適用于生豬臨床樣本（如血液、組織、分泌物等）中豬鏈球菌2型的定性及定量檢測，對于豬鏈球菌病的診斷、疫情監(jiān)測及防控具有重要意義。

檢測原理

熒光PCR技術(shù)基于傳統(tǒng)PCR擴增原理，通過在反應(yīng)體系中加入特異性的熒光探針或熒光染料，實現(xiàn)在DNA復(fù)制過程中熒光信號的累積，進而通過對熒光信號的實時監(jiān)測來定量分析目標DNA序列的存在及其初始濃度。

關(guān)鍵要素

  1. 引物設(shè)計：標準中詳細說明了設(shè)計針對豬鏈球菌2型特異性基因序列的引物原則和要求，確保檢測的特異性和敏感性。
  2. 樣本處理：規(guī)范了樣本采集、保存、前處理及核酸提取的具體步驟，以減少污染風(fēng)險并保證樣本質(zhì)量。
  3. 反應(yīng)體系與條件：列出了熒光PCR反應(yīng)所需的各種試劑成分比例、反應(yīng)體積及最佳循環(huán)參數(shù)（包括退火溫度、延伸時間等），以優(yōu)化檢測效率。
  4. 熒光檢測與數(shù)據(jù)分析：闡述了熒光信號的實時監(jiān)測方法，以及如何根據(jù)熒光曲線分析判斷陽性或陰性結(jié)果，并提供了Ct值（循環(huán)閾值）的計算方法用于定量分析。
  5. 質(zhì)量控制：強調(diào)了實驗過程中的內(nèi)外對照使用、儀器校準及實驗人員培訓(xùn)的重要性，以確保檢測結(jié)果的可靠性。

結(jié)果判定與報告

標準明確了陽性和陰性結(jié)果的判定標準，要求報告中應(yīng)包含樣本信息、檢測方法、實驗日期、檢測結(jié)果及必要的質(zhì)量控制信息。

注意事項

雖然未直接要求總結(jié)，但理解上需注意，執(zhí)行該標準時需嚴格遵守實驗室生物安全規(guī)程，確保人員及環(huán)境安全；同時，定期進行方法驗證和性能確認，以維持檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性和準確性。

該標準通過上述內(nèi)容，為豬鏈球菌2型的熒光PCR檢測提供了科學(xué)、統(tǒng)一的技術(shù)指導(dǎo)，有助于提升我國動物疫病防控水平和食品安全管理能力。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實施
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GB/T 19915.7-2005豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T19915.7—2005豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofStreptococcussuistype22005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19915.7—2005前本標準的附錄A是規(guī)范性附錄，附錄B是資料性附錄本標準由國家標準化管理委員會提出。本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會歸口本標準起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標準主要起草人：張鶴曉、宋立、高志強、寧宜寶、喬彩霞、王甲正、楊承槐、吳丹、谷強本標準系首次發(fā)布的國家標準

GB/T19915.7—2005豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法范圍本標準規(guī)定了豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法本標準適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬斌子、豬組織樣品中豬鏈球菌2型的檢測規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準.然而.鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法縮略語本標準采用下列縮略語：熒光PCR熒光聚合酶鏈反應(yīng)C值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達到設(shè)定的閩值時所經(jīng)歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TA酶TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TaqMan方法,在比對豬鏈球菌2型英膜抗原2」基因（cDs2J)序列的基礎(chǔ)上.設(shè)計針對該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標記探針進行配對。探針5端標記FAM熒光素為報告熒光基團(用R表示）.3'端標記TAMRA熒光素為澤滅熒光基團(用Q表示）,它在近距離內(nèi)能吸收5°端熒光基團發(fā)出的熒光信號。PCR反應(yīng)進入退火階段時,引物和探針同時與目的基因片段結(jié)合.此時探針上R基團發(fā)出的熒光信號被Q基團所吸收,儀器檢測不到熒光信號；而反應(yīng)進行到延伸階段時.Taq酶的5"→3的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團游離出來,所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測儀所接收。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)進行,PCR產(chǎn)物與熒光信號的增長呈現(xiàn)對應(yīng)關(guān)系5豬鏈球菌2型熒光PCR檢測實驗室的標準化設(shè)置與管理豬鏈球苗2型熒光PCR檢測實驗室的標準化設(shè)置與管理見GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1試劑除另有說明，所用試劑均為分析純。6.1.1無水乙醇：-20℃預(yù)冷。6.1.275%乙醇:用新開啟的無水乙醇和無DNA酶的滅菌純化

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