實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的配制

實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的配制第一頁，共二十三頁，2022年，8月28日重要考點(diǎn)3：培養(yǎng)基的配制組內(nèi)合作：1、說出培養(yǎng)基配制流程；2、討論消毒與滅菌的區(qū)別，小結(jié)常用滅菌方法。第二頁，共二十三頁，2022年，8月28日1、計(jì)算2、稱量牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0gH2O1000mL瓊脂2.0g第三頁，共二十三頁，2022年，8月28日3、熔化4、調(diào)節(jié)pH第四頁，共二十三頁，2022年，8月28日5、分裝第五頁，共二十三頁，2022年，8月28日6、滅菌第六頁，共二十三頁，2022年，8月28日滅菌——高壓滅菌1.05kg/cm2、121℃，15—30min滅菌鍋高壓滅菌作用：殺死所有活的微生物及芽孢第七頁，共二十三頁，2022年，8月28日（補(bǔ)充：倒“平板”）超凈工作臺第八頁，共二十三頁，2022年，8月28日倒平板約50℃防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴落污染培養(yǎng)基灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基第九頁，共二十三頁，2022年，8月28日7、恒溫培養(yǎng)（恒溫培養(yǎng)箱）第十頁，共二十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制

稱量

熔化

滅菌

調(diào)節(jié)pH

分裝加熱熔化瓊脂（攪拌）倒入三角燒瓶，與其他器具一起放入滅菌鍋高壓滅菌定容調(diào)節(jié)PH至計(jì)算恒溫培養(yǎng)第十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日（一般需要作無菌檢查）核心：保證無菌操作超凈工作臺超凈工作臺、酒精燈火焰旁操作第十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日分析與討論1、如何檢驗(yàn)培養(yǎng)基是無菌的？2、常用滅菌方法有哪些？將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫培養(yǎng)箱中適宜條件下培養(yǎng)2-3d，如果無菌落產(chǎn)生，則培養(yǎng)基是無菌的。高壓（蒸氣）滅菌灼燒滅菌用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、錐形瓶等用于接種環(huán)等金屬器具第十三頁，共二十三頁，2022年，8月28日3、消毒與滅菌的區(qū)別（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精擦拭等）僅殺死活的微生物，不能殺死芽孢。（2）滅菌（高壓滅菌1.05kg/cm2、121℃、15-30min；灼燒滅菌、干熱滅菌等）能殺死所有微生物及其芽孢。第十四頁，共二十三頁，2022年，8月28日微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)2——微生物的培養(yǎng)掌握劃線法接種方法與作用第十五頁，共二十三頁，2022年，8月28日單個(gè)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。3.功能：1.定義：補(bǔ)充：菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體菌落是由單個(gè)細(xì)胞分裂形成的種群第十六頁，共二十三頁，2022年，8月28日常用工具圖示接種環(huán)玻璃刮鏟第十七頁，共二十三頁，2022年，8月28日微生物（如大腸桿菌）的培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算2.稱量3.熔化4.調(diào)節(jié)pH5.分裝6.滅菌7.恒溫培養(yǎng)第十八頁，共二十三頁，2022年，8月28日二.大腸桿菌的培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡培養(yǎng)大腸桿菌：（超凈工作臺上、酒精燈火焰旁進(jìn)行）劃線法菌種1.接種：接種環(huán)劃線法接種冷卻后刮取菌苔劃線法接種：使接種物逐漸稀釋，培養(yǎng)后出現(xiàn)單個(gè)菌落第十九頁，共二十三頁，2022年，8月28日枯草桿菌菌落菌落灰白色，較大，邊緣比較粗糙大腸桿菌菌落菌落灰白色，圓形，透明或半透明滕黃八疊球菌菌落菌落黃色，圓形、邊緣光滑第二十頁，共二十三頁，2022年，8月28日問題討論為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上的微生物污染培養(yǎng)物殺死殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)接種物逐漸稀釋，培養(yǎng)后得到單個(gè)菌落。避免接種環(huán)上的細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第二十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日劃線法二.大腸桿菌的培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡培養(yǎng)大腸桿菌：1.接種：2.培養(yǎng)：將接種后的平板倒置放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)2～3d第二十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日Q：為什么劃線法接種能觀察到單個(gè)菌落？劃線法接種時(shí)，使接種物逐漸稀釋