版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
WB問(wèn)題條帶分析
報(bào)告人:楊羚1、目的條帶啥也沒(méi)有原因:只重復(fù)做沒(méi)有思考。這次目的條帶和內(nèi)參的二抗種屬是不同的。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn):一點(diǎn)沒(méi)有,甚至連內(nèi)參都沒(méi)有,可能抗體加錯(cuò)了,轉(zhuǎn)膜問(wèn)題甚至膜放反;
條帶細(xì)微接近沒(méi)有,上樣量少,一抗?jié)舛鹊?,顯色液失效...........解決辦法:實(shí)驗(yàn)前檢查抗體種屬是否加錯(cuò),確認(rèn)轉(zhuǎn)膜沒(méi)有問(wèn)題。20150825_重復(fù)做CST1只有點(diǎn)內(nèi)參20150826_CST1重做2、高背景20150814_JNk高效價(jià)第一次.bmp原因:封閉不夠好,洗膜不充充分,抗體濃度特別是二抗過(guò)高。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn):奶粉封閉時(shí)間夠,注意操作規(guī)范,不偷工減料洗膜實(shí)際解決方法:奶粉封閉時(shí)間延長(zhǎng)了半個(gè)小時(shí),對(duì)于這種剪小后的片,用小洗滌盒洗,總之保證其洗膜充分20150816_JNK高效價(jià)第二次.bmp3、出現(xiàn)許多黑點(diǎn)和斑原因:膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結(jié)合。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn):不要封閉時(shí)才去匆忙配奶粉,要確保奶粉完全溶解,否則不溶顆粒附著膜上。溶解后靜止,輕吸上層牛奶封閉,封閉結(jié)束,三次洗膜徹底
201507內(nèi)參略成功.bmp20150829sirt3失敗品4、條帶拖尾可能原因:蛋白量太大,一抗?jié)舛群蜁r(shí)間太長(zhǎng);個(gè)人猜測(cè),跑膠的問(wèn)題解決辦法:調(diào)整蛋白量,同時(shí)一抗?jié)舛瓤s小和孵育時(shí)間縮短
201508-HSF-LXF..jpg5、出現(xiàn)非均一性背景原因:膜可能干過(guò)!解決辦法:確保蛋白面不要被風(fēng)干很長(zhǎng)時(shí)間,一定要用不漏水的封閉盒并蓋上蓋子,防止過(guò)夜16個(gè)小時(shí)液體流失。
Gapdh.jpg6、條帶中出現(xiàn)規(guī)則白圈原因:轉(zhuǎn)膜出現(xiàn)氣泡!網(wǎng)絡(luò)經(jīng)驗(yàn):放膜時(shí)候,使膜U型放,兩邊下壓;蓋海綿前,確定氣泡除盡,蓋后放置動(dòng)作要小幅輕微,防止產(chǎn)生不必要的氣泡。
7、最邊緣條帶彎曲原因:電泳電流不均解決辦法:盡量不使用兩邊的兩孔
BNP+Gapdh.jpg8、其他電泳過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題現(xiàn)象(1)整個(gè)條帶呈“︶”狀:凝膠冷卻不均一,電泳槽老化。(2)整個(gè)條帶呈“︵”:凝膠左右兩頭沒(méi)有凝固好(3)溴酚藍(lán)拖尾:樣品溶解不好。(4)縱向的紋理:上樣樣品中存在不溶性顆粒(5)溴酚藍(lán)很粗:濃縮膠濃縮效果不好,可能是濃縮膠太短,或者是濃縮膠配錯(cuò)。(6)在分離膠中跑不動(dòng):Tris-ClPH值不對(duì),或者忘記加SDS。8、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗——條帶變形
原因:膠體中存在氣泡,或不溶性雜質(zhì),膠不均不平整解決辦法:配膠的小燒杯,水,SDS,tris等等干凈無(wú)雜質(zhì)。貼邊角加入液體,凝固時(shí)間避免大幅度動(dòng)作觸碰。
9、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗——條帶啞鈴狀原因:配膠問(wèn)題,可能是插或拔梳子引起的凹凸不平整;還有可能,樣品含較多雜質(zhì)雜質(zhì)沉積空中間.......10、其他(1)蛋白分子量偏高或者偏低??赡苁悄z的濃度與目的蛋白的濃度不對(duì)應(yīng),比如說(shuō)100KD的蛋白你用12%的膠跑,或者說(shuō)20KD的蛋白你用6%的膠跑。(2)蛋白質(zhì)降解。蛋白質(zhì)降解后很可能會(huì)在比原來(lái)位置低的地方出現(xiàn)主帶,然后會(huì)出現(xiàn)一些其他帶,最主要特點(diǎn)是所有的條帶比正常的都低,并且條帶模糊不清晰。(3)所有條帶連成一片沒(méi)有間隔。原因最可能是上樣量過(guò)多,其次是樣品彌散(比如電泳長(zhǎng)時(shí)間停止樣品彌散)。(4).
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2024年熱反射玻璃(非采暖區(qū)用)項(xiàng)目發(fā)展計(jì)劃
- 實(shí)驗(yàn)室廢物處置程序
- 2024年鉑族金屬用絡(luò)合物項(xiàng)目建議書
- 2024年印前處理設(shè)備:照排機(jī)項(xiàng)目建議書
- 2024年高純氧化鋁絕緣材料項(xiàng)目發(fā)展計(jì)劃
- 2024年軟泡聚醚合作協(xié)議書
- 2024年三唑類殺菌劑合作協(xié)議書
- 2024年海洋環(huán)保儀器及采樣設(shè)備項(xiàng)目發(fā)展計(jì)劃
- 秋季六上英語(yǔ)人教PEP版老師個(gè)人工作計(jì)劃
- 山東省德州市樂(lè)陵市2024年四上數(shù)學(xué)期末綜合測(cè)試模擬試題含解析
- GB/Z 44071-2024液壓傳動(dòng)連接軟管總成操作規(guī)程
- 酒吧廚房承包合同
- 2024北京市賽導(dǎo)游理論考試題庫(kù)(含答案)
- 滅火機(jī)器人畢業(yè)設(shè)計(jì)
- DL-T5333-2021水電水利工程爆破安全監(jiān)測(cè)規(guī)程
- 職業(yè)技能大賽茶葉加工題庫(kù)(后附答案)
- 施工重點(diǎn)難點(diǎn)分析及解決措施和方案
- 七年級(jí)語(yǔ)文下冊(cè)專項(xiàng)練習(xí)知識(shí)(對(duì)聯(lián))
- 商業(yè)大廈招商方案
- 幼兒園社會(huì)教育專題-考核測(cè)試題四(第七、八章)-國(guó)開(ZJ)-參考資料
- 化工廠安全事故案例心得體會(huì)(14篇)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論