維生素類藥物的分析

AnalysisofVitamines第十章

維生素類

藥物的分析藥物分析教研室概述一.定義：

維生素是維持人體正常代謝功能所必須的一類微量的生物活性物質(zhì)，主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)。二.特點(diǎn)：1.維生素均以維生素原的形式存在于食物中。2.機(jī)體自身不能合成或合成量不足，必須通過食物獲得。3.維生素的作用是參與機(jī)體代謝調(diào)節(jié)。4.人體維生素的需要量很小，但一旦缺乏就會(huì)引發(fā)相應(yīng)的維生素缺乏癥。三、分類VA的分析VC的分析VE的分析VB1的分析VD的分析VitaminsContents第一節(jié)VitA的分析概述維生素A包括有維生素A1(視黃醇)、去氫維生素A（維生素A2），和去水維生素A（維生素A3）。通常所說的維生素A指的是維生素A1912345678Retinol(VitA醇)VA

醋酸酯VA

棕櫚酸酯一、結(jié)構(gòu)分析與性質(zhì)

USPBPCh.pVA及醋酸酯、棕櫚酸酯混合物的食用油溶液維生素A醋酸酯、丙酸酯和棕櫚酸酯混合物的植物油溶液維生素A醋酸酯。收載了維生素A膠丸、AD膠丸和AD滴劑一、主要性質(zhì)紫外吸收不穩(wěn)定性存在多種立體異構(gòu)體氧化反應(yīng)酸性條件下反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)VitASbCl3CHCl3(無水、無醇)藍(lán)色紫紅色1.三氯化銻反應(yīng)(Carr-Price反應(yīng))注意：反應(yīng)需在無水無醇條件下進(jìn)行。水可使SbCl3水解成SbOCl。乙醇可與正碳離子作用使正電荷消失。溶劑：飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液。2.紫外分光光度法VitAVitA3（1）維生素A：5個(gè)共軛雙鍵，其無水乙醇液在326nm波長(zhǎng)處有最大吸收。（2）去水維生素A(A3)：6個(gè)共軛雙鍵，其最大吸收波長(zhǎng)向紅移，在340nm-390nm波長(zhǎng)間出現(xiàn)3個(gè)最大吸收峰。（348、367、389）三、含量測(cè)定一、②維生素A的異構(gòu)體名稱順反異構(gòu)λmax（nm）相對(duì)效價(jià)新維生素Aa2-順32875%新維生素Ab4-順31924%新維生素Ac2,4-二順31115%異維生素Aa6-順32321%異維生素Ab2,6-二順32424%③氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物、醛、酸④中間體、副產(chǎn)物⑤裂解產(chǎn)物⑥原料為鯨魚時(shí)，提取可能含有鯨醇。鯨醇為維生素A的二聚體，無生物活性。⑦不相關(guān)物質(zhì)：抗氧劑、稀釋用油等。AnmVitAsampleimpurities2.三點(diǎn)校正法的基本原理雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減??；物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。3.波長(zhǎng)的選擇第一法——等波長(zhǎng)差法λ2λ1λ3nmAVitA樣品維生素A純品雜質(zhì)328340316A1A2A3Aλ1Aλ2Aλ3X1X2X3A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)測(cè)定VitA醋酸酯圖1：維生素A等波長(zhǎng)差校正法圖解（1）方法（適用于維生素A醋酸酯）取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每ml含有9-15個(gè)單位的溶液，測(cè)定吸收峰的波長(zhǎng)，看最大吸收波長(zhǎng)是否在326-329nm之間，如不在這個(gè)范圍，就選用第二法。如果吸收峰的波長(zhǎng)在326-329nm之間，就分別在規(guī)定的波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各波長(zhǎng)下的吸光度與波長(zhǎng)328nm處的吸光度的比值，將這個(gè)比值與規(guī)定值進(jìn)行比較。（2）數(shù)據(jù)處理波長(zhǎng)（nm）300316328340360吸光度A1A2A3A4A5計(jì)算比值A(chǔ)1/A3A2/A31.000A4/A3A5/A3規(guī)定值0.5550.9071.0000.8110.299每個(gè)差值【-0.02，+0.02】，就不需要計(jì)算A328的校正值，直接用A328進(jìn)行下一步計(jì)算。每個(gè)差值<-0.02，>+0.02，需要計(jì)算A328的校正值。數(shù)據(jù)處理第二法——等吸收比法（6/7A法、皂化法）Aλ2λ1λ3nm310325334A1A2A3Aλ2Aλ1Aλ3FLDMEVitA醇維生素A樣品維生素A純品雜質(zhì)第二法—等吸收比法（6/7A法、皂化法）VitA醇測(cè)定維生素A醇幾何校正法圖解Aλ2λ1λ3nm310325334A1A2A3Aλ2Aλ1Aλ3FLDME維生素A樣品維生素A純品雜質(zhì)(二)三氯化銻比色法λmax618nm-620nm1.原理：2.方法：取維生素A對(duì)照品，制成系列濃度的三氯甲烷溶液，加入一定量的三氯化銻氯仿溶液，在5-10s內(nèi)，于620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。按同法測(cè)定供試品溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。缺點(diǎn)呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分有干擾溫度影響大（+1℃）三氯化銻有腐蝕性優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快遞3.討論第二節(jié)維生素E的分析概述

USPBPCh.p右旋或外消旋ɑ-生育酚及其醋酸酯和琥珀酸酯外消旋ɑ-生育酚醋酸酯和ɑ-生育酚合成：消旋體天然：右旋ɑ-生育酚醋酸酯一、結(jié)構(gòu)分析與性質(zhì)1.結(jié)構(gòu)2.性質(zhì)水解性氧化性紫外吸收特性溶解性二、鑒別試驗(yàn)1.硝酸反應(yīng)生育酚75℃【O】（橙紅色）生育紅2.三氯化鐵反應(yīng)方法：取本品約10mg,加乙醇制成氫氧化鉀試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml振搖，靜置使分層，取乙醚液2ml,加2,2‘聯(lián)吡啶的乙醇溶液數(shù)滴和三氯化鐵的乙醇液數(shù)滴，應(yīng)顯血紅色。3.紫外分光光度法4.薄層色譜法薄層板：硅膠G板展開劑：環(huán)己烷-乙醚（4:1）顯色劑：硫酸（105℃）VitERf=0.7ɑ-生育酚和ɑ-生育醌的Rf值分別為0.5和0.9。三、雜質(zhì)檢查1.生育酚（1）原理（2）方法：取本品0.1g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰滴定液（0.01mol/l）滴定，消耗硫酸鈰滴定液（0.01mol/l）不得過1.0ml。第三節(jié)維生素C概述

維生素C又叫L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，能夠治療壞血病并且具有酸性，所以稱作抗壞血酸。維生素C是最不穩(wěn)定的一種維生素，由于它容易被氧化。微量的銅、鐵離子可加快破壞的速度。

植物及絕大多數(shù)動(dòng)物均可在自身體內(nèi)合成維生素C，可是人因缺乏將L-古洛酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素C的酶類，不能合成維生素C。維生素C在人體內(nèi)的半衰期較長(zhǎng)（大約16天），所以食用不含維生素C的食物3~4個(gè)月后才會(huì)出現(xiàn)壞血病。維生素C的主要功能是幫助人體完成氧化還原反應(yīng)，提高人體滅菌能力和解毒能力。一、結(jié)構(gòu)分析與性質(zhì)1.結(jié)構(gòu)2.性質(zhì)（1）旋光性：2個(gè)手型C原子有4個(gè)光學(xué)異構(gòu)體。比旋：+20.5-21.5度（2）水解性（3）酸性（4）還原性L-抗壞血酸(有生物活性)L-二酮古洛糖酸L-去氫抗壞血酸無生物活性（有生物活性）（5）糖類的性質(zhì)（6）紫外吸收特性二、鑒別試驗(yàn)1.與AgNO3反應(yīng)2.與2,6-二氯靛酚反應(yīng)3.糖類的反應(yīng)4.紫外分光光度法維生素C在0.01mol/l鹽酸溶液中，在243nm波長(zhǎng)處有唯一的最大吸收，利用此特征進(jìn)行鑒別。（BP）三、雜質(zhì)檢查鐵、銅離子的檢查由于微量鐵鹽和銅鹽的存在會(huì)加速維生素C的氧化和分解，所以在中國(guó)藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)立了鐵和銅的檢查項(xiàng)。利用的是原子吸收分光光度法。四、含量測(cè)定1.碘量法（1）原理：維生素C在醋酸酸性條件下，可被碘定量氧化。（2）實(shí)驗(yàn)方法：取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的維生素C。（3）討論新沸過的冷水：減少水中溶解的氧對(duì)測(cè)定的影響。稀醋酸：酸性介質(zhì)中維生素C受空氣中氧的氧化速度減慢。中國(guó)藥典采用碘量法對(duì)維生素C原料、片劑、顆粒劑和注射劑進(jìn)行含量測(cè)定。為了消除注射劑中抗氧劑亞硫酸氫鈉對(duì)測(cè)定的影響，測(cè)定前需要加丙酮或甲醛。2.2,6二氯靛酚滴定法（1）原理：2,6二氯靛酚在酸性溶液中為顯紅色的氧化型物質(zhì)，在堿性溶液中為顯藍(lán)色的氧化型物質(zhì)，與維生素C反應(yīng)后立即變?yōu)闊o色的酚亞胺。（2）原理樣品2,6二氯靛酚滴定液偏磷酸-醋酸終點(diǎn)：無色--玫瑰紅色（3）討論酸性環(huán)境：HPO3-HAC穩(wěn)定VitC；快速滴定：2min內(nèi)，防止其他還原物質(zhì)干擾；注意隨行空白；剩余比色測(cè)定；該方法干擾多；滴定液不穩(wěn)定，需要經(jīng)常標(biāo)定。3.HPLC法人血清中維生素C穩(wěn)態(tài)血漿濃度分析根據(jù)穩(wěn)態(tài)血漿濃度評(píng)價(jià)高校學(xué)生人群維生素C營(yíng)養(yǎng)狀況。采用高效液相色譜法測(cè)定128名男性大學(xué)生在正常飲食條件下，以及其中14名受試者連續(xù)13d每天口服補(bǔ)充200mg維生素C后，血漿中維生素C的穩(wěn)態(tài)濃度。發(fā)現(xiàn)正常飲食條件下受試者血漿中維生素C的穩(wěn)態(tài)水平偏低，平均為（4.7±2.7）μg/mL，其中血漿濃度低于正常營(yíng)養(yǎng)水平下4μg/mL者68例，占總?cè)藬?shù)的3%；補(bǔ)充維生素C后，受試者穩(wěn)態(tài)血漿濃度顯著提高，達(dá)到（12.4±1.9）μg/mL(P<0.01)。說明目前高校學(xué)生從飲食中攝入維生素C量嚴(yán)重不足，待改善飲食結(jié)構(gòu)或予以補(bǔ)充。1、在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是

A.氯氮卓

B.維生素AC.普魯卡因

D.鹽酸嗎啡

E.維生素C2.既具有酸性又具有還原性的藥物是（）A.維生素AB.咖啡因C.苯巴比妥D.氯丙嗪E.維生素C3.測(cè)定維生素C注射液的含量時(shí)，在操作過程中要加入丙酮，這是為了（）A.保持維生素C的穩(wěn)定B.增加維生素C的溶解度C.使反應(yīng)完全D.加快反應(yīng)速度E.消除注射液中抗氧劑的干擾4.維生素A的鑒別實(shí)驗(yàn)為（）A.三氯化鐵反應(yīng)B.硫酸銻反應(yīng)C.2，6-二氯靛酚反應(yīng)D.三氯化銻反應(yīng)E.間二硝基苯的堿性乙醇液反應(yīng)5.紫外法（第一法）測(cè)定維生素A含量時(shí)，在哪些情況下需應(yīng)用校正值計(jì)算含量A.[A328(校正)-A328]/A328×100%<-15%或>+3%B.A/A328值未超過規(guī)定比值的±0.02C.[A328(校正)-A328]/A328×100%<±3D.λmax不在326~329nmE.[A328(校正)-A328]/A328×100%在-15%~+3%5、使用碘量法測(cè)定維C的含量,已知維生素C的分子量為176.13，每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于維生素C的量為

A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mgB多項(xiàng)選擇中國(guó)藥典（2010年版）規(guī)定維生素A的測(cè)定采用紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法），此法又分為（）A.等波長(zhǎng)差法B.等吸收比法C.6/7A法D.差示分光法E.雙波長(zhǎng)法維生素C的鑒別反應(yīng)是（）A.與硝酸銀反應(yīng)B.與2，6-二氯靛酚反應(yīng)C.與三氯化鐵反應(yīng)D.與茚三酮反應(yīng)E.與四氮唑鹽反應(yīng)3、維C的鑒別反應(yīng)，常采用的試劑有

A.硝酸銀

B.碘化鉍鉀

C.乙酰丙酮

D.三氯醋酸和吡咯4、中國(guó)藥典（2005年版）規(guī)定維生素A的測(cè)定采用紫外分光光度法（三點(diǎn)校正法），此法又分為

A．等波長(zhǎng)差法

B．等吸收度法

C．6/7A法

D．差示分光法

E．雙波長(zhǎng)法5、維生素E的鑒別試驗(yàn)有A．硫色素反應(yīng)

B．硝酸氧化呈色反應(yīng)

C．硫酸-乙醇呈色反應(yīng)

D．堿性水解后加三氯化鐵乙醇液與2,2-聯(lián)吡啶乙醇液呈色反應(yīng)

E．Marquis反應(yīng)6、下面哪些描述適用于維生素AA.分子具有長(zhǎng)二烯醇側(cè)鏈，易被氧化

B.具有較長(zhǎng)的全反式共軛多烯結(jié)構(gòu)

C.含酯鍵，經(jīng)水解后產(chǎn)生苯并二氫吡喃衍生物，易被氧化

D.與三氯化銻的無醇氯仿液中呈不穩(wěn)定蘭色，很快轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色

維生素A與

反應(yīng)即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色；反應(yīng)需在

條件下進(jìn)行。

三氯化銻無水

維生素E在酸性或堿性溶液中加熱可水解生成游離

，當(dāng)有氧或其他氧化劑存在時(shí)，則進(jìn)一步被氧化成醌型