花藥花粉培養(yǎng)技術(shù)

花藥(花粉)培養(yǎng)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花粉培養(yǎng)：是將花粉從花藥中分離出來,接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的過程。油菜成熟花藥的結(jié)構(gòu)第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)一、花藥和花粉的培養(yǎng)方法：（一）花粉發(fā)育時(shí)期：1、適宜時(shí)期：單核期,尤其是單核中、晚期(單核靠邊期)雄配子體的發(fā)育營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞精子第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)2、花粉發(fā)育時(shí)期的檢測：外部形態(tài)觀察：(單核靠邊期的花粉)小麥旗葉和旗葉下一葉之葉耳距離約是5～15cm。煙草中，花蕾的花冠大約與萼片等長。壓片染色法：是檢測花粉發(fā)育時(shí)期的簡便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程

1花藥培養(yǎng)過程1）預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法煙草7～9℃，7～14d黑麥1～3℃

，7～14d第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程

2）表面消毒

用70%酒精噴灑或擦拭花器或包被著麥穗的葉鞘表面，即可以達(dá)到滅菌的要求。第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程

3）接種在無菌的條件下把雄蕊上的花藥從花絲上摘下，水平地放在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。不要使花藥受到損傷，否則會(huì)刺激花藥壁形成二倍體愈傷組織。接種的“密度效應(yīng)”，要有一個(gè)合理的群體數(shù)量。

第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程4）培養(yǎng)形成花粉植株。

花粉---愈傷組織---苗花粉---胚狀體---苗選幼年樹花蕾第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（二）培養(yǎng)過程4）培養(yǎng)形成花粉植株。培養(yǎng)方式：①瓊脂固化培養(yǎng)基表面培養(yǎng)②30%Ficoll的液體培養(yǎng)基表面漂浮培養(yǎng)③固-液雙層培養(yǎng)

第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)水稻花藥培養(yǎng)過程：旗葉鞘用70％酒精擦洗一遍剝?nèi)テ烊~鞘，取出稻穗10％漂白粉10min無菌水洗3次培養(yǎng)5天，花藥變褐，20天后花藥裂開，長出淡黃色的花粉愈傷組織，先長芽，后長根，形成幼苗。用接種環(huán)接種到培養(yǎng)基上左手持穗，右手用鑷子取花藥，放無菌培養(yǎng)皿中第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)脫毒技術(shù)1974年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；花藥采取時(shí)期單核期：花蕾4-6mm，花藥1mm花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+瓊脂7g/L增殖分化培養(yǎng)基MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+瓊脂7g/L生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+瓊脂7g/L第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)草莓花藥愈傷組織,花藥植株第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)2、花粉培養(yǎng)花粉培養(yǎng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)比較:相同點(diǎn)：胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑不同點(diǎn)：花粉培養(yǎng)：

需進(jìn)行花粉的分離

特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)花粉培養(yǎng)過程取花蕾（鏡檢）預(yù)培養(yǎng)數(shù)天取花藥消毒分離花粉接種培養(yǎng)愈傷組織發(fā)生第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)二、培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基激素種類和濃度蔗糖濃度第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（一）基本培養(yǎng)基：

B5培養(yǎng)基：適合豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；N6培養(yǎng)基：適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)胞分裂素可促進(jìn)胚狀體形成；

生長素可誘導(dǎo)愈傷組織形成。

細(xì)胞分裂素與生長素比值高時(shí)可誘導(dǎo)愈傷組織分化苗（二）激素種類和濃度較高濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織；較低濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗。第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)（三）蔗糖濃度三、單倍體植株染色體加倍的方法第一節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù)1、自然加倍：花粉細(xì)胞核有絲分裂或核融合，染色體可自然加倍，獲得純合二倍體。2、人工加倍：用秋水仙素處理單倍體植物，可使染色體加倍（溶液浸苗、處理愈傷組織和用含0.4%秋水仙素的羊毛脂涂抹單倍體植株的頂芽、腋芽，可得到能結(jié)實(shí)的二倍體植株）3、將單倍體植株誘導(dǎo)的愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)，再分化可得到二倍體植株?；ㄋ幒突ǚ叟囵B(yǎng)的應(yīng)用

----單倍體植株育種1、克服后代分離，縮短育種周期；2、有利于篩選隱性突變體，選擇效率高;3、有利于隱性基因控制性狀的選擇4、快速獲得自交系的超雄株第二節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用大大縮短育種周期第二節(jié)花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用(1)花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞