第二章紫外可見分光光度法

紫外可見分光光度法劉曉燕主要內(nèi)容：

&重點(diǎn)難點(diǎn)：q紫外可見分光光度分析的基本原理紫外可見分光光度分析的條件選擇紫外可見分光光度計(jì)的基本構(gòu)造和使用流程qqqq重點(diǎn)朗伯－比耳定律、分光光度分析的條件選擇。難點(diǎn)

朗伯－比耳定律。第一章分光光度分析

(Vis-UVSpectrophotometry)第二章紫外可見分光光度法

1.概念：分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜和光的吸收定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析的一種儀器分析方法。

2.方法分類：根據(jù)測(cè)定時(shí)所選用的光源：

可見分光光度法(400800nm)

紫外分光光度法(200400nm)

紅外分光光度法(800nm50m)

優(yōu)點(diǎn)：⑴靈敏度高,主要用于微量分析；⑵準(zhǔn)確度高,濃度測(cè)量相對(duì)誤差僅有1~3%；⑶操作簡(jiǎn)便、迅速，所需設(shè)備并不復(fù)雜；

⑷應(yīng)用廣泛。缺點(diǎn)：

⑴僅適合微量分析；⑵所需儀器相對(duì)昂貴。3.紫外分光光度法的優(yōu)缺點(diǎn)11.定性分析各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線2純度的鑒定用紫外吸收光譜確定試樣的純度是比較方便的。如果一化合物在紫外區(qū)沒有吸收峰，而其雜質(zhì)有較強(qiáng)吸收，就可方便的檢出該化合物中的痕量雜質(zhì)。3結(jié)構(gòu)分析紫外-可見吸收光譜一般不用于化合物的結(jié)構(gòu)分析，但利用紫外吸收光譜鑒定化合物中的共軛結(jié)構(gòu)和芳環(huán)結(jié)構(gòu)還是有一定價(jià)值。應(yīng)用5第一節(jié)紫外可見分光光度計(jì)的構(gòu)造分光光度計(jì)工作原理：采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的裝置，通過系列分光裝置，得到一束平行的波長(zhǎng)范圍很窄的單色光，透過一定厚度的試樣溶液后，部分光被吸收，剩余的光照射到光電元件上，產(chǎn)生光電流，在儀器上可讀取相應(yīng)的吸光度或透光率，完成測(cè)定。一．紫外可見分光光度計(jì)的基本組成光源單色器吸收池檢測(cè)器讀出系統(tǒng)1．光源在所需光譜區(qū)域內(nèi)發(fā)射連續(xù)的、足夠強(qiáng)度、穩(wěn)定的輻射光?？梢妳^(qū)：鎢燈；紫外區(qū)：氫燈、氘燈通常用6～12V鎢絲燈作可見光區(qū)的光源，最適宜的使用范圍在360—800nm。光源應(yīng)該穩(wěn)定，即要求電源電壓保持穩(wěn)定。為此，通常在儀器內(nèi)同時(shí)配有電源穩(wěn)壓器。/nm鎢燈（熱輻射光源）4006008001000氙燈（氣體放電光源）氫燈強(qiáng)度氙燈氫燈鎢燈色散原理：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過棱鏡時(shí)折射率不同分光入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ28006005004002．單色器單色器是將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。單色器由棱鏡或光柵等色散元件及狹縫和透鏡等組成。其中色散元件是關(guān)鍵部件。

棱鏡是根據(jù)光的折射原理而將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過一個(gè)很窄的狹縫照射到吸收池上。它由玻璃或石英制成。玻璃棱鏡用于可見光范圍，石英棱鏡則在紫外和可見光范圍均可使用。光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖原理：利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.光柵是根據(jù)光的衍射和干涉原理將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過狹縫照射到吸收池上。它的分辨率比棱鏡大，可用的波長(zhǎng)范圍也較寬。入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器，用于限制雜散光進(jìn)入單色器準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，使入射光成為平行光束色散元件：棱鏡或光柵，將復(fù)合光分解成單色光準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫出射狹縫：用于限制通帶寬度3．吸收池吸收池也稱比色皿，用于盛放參比溶液或待測(cè)溶液。它是由無(wú)色透明、耐腐蝕、化學(xué)性質(zhì)相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分為0.5cm，1cm，2cm，3cm和5cm。在可見光區(qū)測(cè)量吸光度時(shí)使用玻璃吸收池，紫外區(qū)則使用石英吸收池。使用比色皿時(shí)應(yīng)注意保持清潔、透明，避免磨損透光面。使用時(shí)注意點(diǎn)4．檢測(cè)器檢測(cè)器的作用是接受從比色皿發(fā)出的透射光并轉(zhuǎn)換成電信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。分為光電管和光電倍增管。光電管是一個(gè)真空或充有少量惰性氣體的二極管。陰極是金屬做成的半圓筒，內(nèi)側(cè)涂有光敏物質(zhì)，陽(yáng)極為一金屬絲。光電管依其對(duì)光敏感的波長(zhǎng)范圍不同分為紅敏和紫敏兩種。紅敏光電管是在陰極表面涂銀和氧化銫，適用波長(zhǎng)范圍為625—1000nm；紫敏光電管是陰極表面涂銻和銫，適用波長(zhǎng)范圍為200—625nm。

光電倍增管是由光電管改進(jìn)而成的，管中有若干個(gè)稱為倍增極的附加電極。因此，可使光激發(fā)的電流得以放大，一個(gè)光子約產(chǎn)生106～107個(gè)電子。它的靈敏度比光電管高200多倍。適用波長(zhǎng)范圍為160～700nm。光電倍增管在現(xiàn)代的分光光度計(jì)中被廣泛采用。

5．顯示裝置顯示裝置的作用是把放大的信號(hào)以吸光度A或透光率T的方式顯示或記錄下來(lái)。分光光度計(jì)常用的顯示裝置是檢流計(jì)、微安表、數(shù)字顯示記錄儀。二、紫外可見分光光度計(jì)類型1.單光束分光光度計(jì)2.雙光束分光光度計(jì)3.雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)721分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性，且操作麻煩，任一波長(zhǎng)的光均要用參比調(diào)T=100﹪后，再測(cè)樣品儀器可見分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分器自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。裂儀器紫外-可見分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)光源單色器單色器切光源檢測(cè)器吸收池不需要參比溶液；可以消除背景吸收干擾；適合多組分混合物、渾濁試樣的定量分析，可進(jìn)行導(dǎo)數(shù)光譜分析。價(jià)格昂貴三、儀器使用基本流程紫外可見分光光度計(jì)1、分光光度計(jì)的保養(yǎng)與維護(hù)2、操作的注意事項(xiàng)3、定性分析依據(jù)？？？定量依據(jù)？？？定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收在一定實(shí)驗(yàn)條件下,A∝cAc增大AB

A第二節(jié)紫外可見分光光度法的定性分析1．分子吸收光譜的產(chǎn)生當(dāng)一束光照射到某物質(zhì)或某溶液時(shí)，組成該物質(zhì)的分子、原子或離子等粒子與吸光子作用，光子的能量發(fā)生轉(zhuǎn)移，使這些粒子由低能量軌道躍遷到高能量軌道，即由基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)。M(基態(tài))+hM*(激發(fā)態(tài))M(基態(tài))+hM*(激發(fā)態(tài))這個(gè)過程即是物質(zhì)對(duì)光的吸收。由于分子、原子或離子的能級(jí)是量子化的，不連續(xù)的，只有光子的能量(h)與被照射物質(zhì)粒子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差(E)相等時(shí)，才能被吸收。不同物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)的能量差不同，選擇吸收光子的能量也不同，即吸收的波長(zhǎng)不同。2、光的種類具有單一波長(zhǎng)的光叫單色光，比如紅光，藍(lán)光等。由不同波長(zhǎng)的光組成的光叫復(fù)色光。比如日光等如果兩種適當(dāng)顏色的單色光按適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度比例混合能得到白光，則這兩種顏色的光叫做互補(bǔ)色光。

互補(bǔ)色光

紫紅橙黃綠青藍(lán)青藍(lán)白光溶液的顏色

⑴溶液為什么會(huì)有顏色？溶液之所以呈現(xiàn)不同的顏色，是由于溶液中的質(zhì)點(diǎn)選擇性地吸收某種顏色的光所引起的。

⑵吸收光與溶液顏色的關(guān)系：當(dāng)白光通過某一均勻溶液時(shí)：CuSO4溶液：之所以呈藍(lán)色，是因?yàn)槲樟税坠庵械狞S光，透過其黃光的互補(bǔ)光藍(lán)光。①如溶液對(duì)其全不吸收，光全透過，溶液為無(wú)色；②如溶液對(duì)其全部吸收，無(wú)光透過，溶液呈黑色；③如溶液對(duì)其部分吸收，其余光透過，溶液呈透過光的顏色。

又例如：

KMnO4溶液，吸收了白光中的綠光，透過的為其互補(bǔ)光紫色，故其溶液呈紫色。

再例如：NaCl、KNO3溶液，對(duì)其射入的可見光全不吸收，光全透過，因此溶液為無(wú)色。2、吸收光譜曲線

某一溶液對(duì)何種波長(zhǎng)的光吸收？吸收的程度如何？

這可通過使不同波長(zhǎng)的光通過某一固定濃度的有色溶液，分別測(cè)量每一波長(zhǎng)下對(duì)應(yīng)的光的吸收程度[吸光度

A]，作A-λ曲線，即吸收光譜曲線。溶液的光吸收曲線最大吸收波長(zhǎng)maxKMnO4溶液的max=525nmmax/nm吸收強(qiáng)度吸收強(qiáng)度特點(diǎn):①具有最大吸收波長(zhǎng)。②不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似，max不變。但是不同物質(zhì)，其吸收曲線形狀和max不一樣，所以可作為定性分析的依據(jù)。③不同濃度的同一種物質(zhì)，在max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，測(cè)定的靈敏度最高，所以通常選取在max處測(cè)量。3、常用術(shù)語(yǔ)1）生色團(tuán)：含有π鍵的不飽和基團(tuán)，簡(jiǎn)單的生色團(tuán)由雙鍵或三鍵組成（如乙烯基、乙炔基等）2）助色團(tuán)：本身沒有生色功能（不能吸收波長(zhǎng)大于200nm的光），但當(dāng)與生色團(tuán)連接時(shí)，有增強(qiáng)生色團(tuán)生色能力的基團(tuán)（如—OH，—NH2，—NHR等）3）藍(lán)移（或紫移）：指吸收峰向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)，紅移：指吸收峰向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)。吸收峰強(qiáng)度變化包括增色效應(yīng)和減色效應(yīng)。前者指吸收強(qiáng)度增加，后者指吸收強(qiáng)度減小。各種因素對(duì)吸收譜帶的影響結(jié)果下圖

4、常見有機(jī)化合物的紫外可見吸收光譜（1）270-750nm無(wú)吸收峰。飽和化合物，單烯。（2）

270-350nm有吸收峰（ε=10-100L/（mol*cm）），n→π*躍遷，含有一個(gè)簡(jiǎn)單的非共軛且含有n電子的生色團(tuán)（3）

250-300nm有中等強(qiáng)度的吸收峰,（ε=200-2000L/（mol*cm

），如苯環(huán)。（4）

210-250nm有強(qiáng)吸收峰，表明可能含有2個(gè)共軛雙鍵；在260nm,300nm,330nm有強(qiáng)吸收峰，說明是3個(gè)或3個(gè)以上雙鍵的共軛體系。

（5)若吸收峰延伸至可見光區(qū)，則可能是長(zhǎng)鏈共軛或稠環(huán)化合物一、朗伯-比爾定律

朗伯-比爾定律是說明物質(zhì)對(duì)單色光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)的濃度和液層厚度間關(guān)系的定律第三節(jié)紫外可見分光光度法的定量分析1、透光率和吸光度入射光強(qiáng)度I0，吸收光強(qiáng)度Ia，透過光強(qiáng)度It，反射光強(qiáng)度為IrI0

＝Ia+It+Ir被測(cè)溶液和參比溶液的吸收池同樣材料和厚度，反射光強(qiáng)度影響相互抵消，上式簡(jiǎn)化為I0＝

Ia+It透射光的強(qiáng)度It與入射光的強(qiáng)度I0的比值稱為透光率(T)透光率愈大，溶液對(duì)光的吸收愈少。透光率的負(fù)對(duì)數(shù)稱為吸光度(A)吸光度愈大，溶液對(duì)光的吸收愈多。

1760年，Lambert指出：一束平行單色光通過有色溶液后，光的吸收程度與溶液液層的厚度成正比。A=k1·b

1852年，Beer指出：一束平行單色光通過有色溶液后，光的吸收程度與溶液的濃度成正比。A=k2·c將Lambert定律和Beer定律合并起來(lái)，就得到Lambert-Beer定律。A=K·b·c2、光的吸收定律

(Lambert-Beer定律)A=K·b·c

c：物質(zhì)的量濃度(mol·L-1)

b：為液層厚度(cm)

K:吸光系數(shù)。應(yīng)用的條件：入射光必須是單色光；吸收發(fā)生在稀的均勻的介質(zhì)中；吸收過程中，吸收物質(zhì)互相不發(fā)生作用。3、吸光系數(shù)其數(shù)值的大小，與物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溶劑種類及溶液溫度等因素有關(guān)。當(dāng)波長(zhǎng)等其他因素一定時(shí)，只與物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。兩種表示方法：

a：質(zhì)量吸光系數(shù)(L·g-1·cm-1)；：摩爾吸光系數(shù)(L·mol-1·cm-1)。特點(diǎn)：不隨濃度和液層厚度的改變而改變，作為定性鑒別的參數(shù)；在max處的摩爾吸光系數(shù)，常用max表示，。不同物質(zhì)的λmax有時(shí)可能相同，但εmax不一定相同，作為定性的依據(jù)；max越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，用光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度越高例：Cd2+濃度為140umol·L-1

，雙硫腙法顯色測(cè)定波長(zhǎng)為520nm，液層厚度2cm，吸光度為0.22，求和T。解：(1)

A=bc

0.22=

214010-6

=785.7L·mol-1·cm-1(2)A=－lgT

=0.22

lgT=－0.22

T=10－0.22

=0.60=60%[例]一有色溶液的濃度為cmol/L，透光率為T

。求濃度為原來(lái)的1/2時(shí)，透光率為多少？解：

T=10-bc

cT

[例]有色溶液的液層厚度增加一倍后，透光率和吸光度的改變?yōu)槎嗌?？解?/p>

T=10-bc

bTA

1/2cT

1/2T22A2b4、對(duì)朗伯—比耳定律的偏離標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯—比耳定律的偏離。引起這種偏離的因素（兩大類）：（1）物理性因素，即儀器的非理想引起的；（2）化學(xué)性因素。1.非單色光引起的偏離abA2A1A3A4123A正偏離負(fù)偏離Ac標(biāo)準(zhǔn)曲線非單色光的影響（1）物理性因素

單色光不純，導(dǎo)致負(fù)偏差。

散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不是垂直通過比色皿（非平行入射光）產(chǎn)生正偏差為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。(2)化學(xué)性因素吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差，朗伯-比爾定律只適合于稀溶液（C<10-2mol/L)。

平衡效應(yīng)：溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)。使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。

例：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：

CrO42-＋2H＋

=Cr2O72-＋H2O

溶液中CrO42-、Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時(shí)溶液pH對(duì)測(cè)定有重要影響。

１．朗伯－比耳定律：A=abc。其中符號(hào)c代表

b代表當(dāng)c的單位為mol/L，b的單位為cm,則a以符號(hào)

表示，并稱為有色物質(zhì)的濃度光通過有色溶液的厚度摩爾吸收系數(shù)。

２符合朗伯－比爾定律的某有色溶液當(dāng)濃度為Cg·mol-1時(shí)，透光度為T0、吸光度為A0；若濃度減小一倍，則此溶液的透光度為，吸光度為。T01/20.5A03.下列說法中正確的是（）A.當(dāng)溶液濃度變大時(shí)其最大吸收波長(zhǎng)變長(zhǎng)；B.當(dāng)波長(zhǎng)固定時(shí)，被測(cè)溶液濃度變小時(shí)，其吸光度也變??；C.吸收池厚度增加一倍，其摩爾吸光系數(shù)縮小一倍；D.標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率越小，說明檢測(cè)的靈敏度越高。B4.已知某波長(zhǎng)的單色光經(jīng)過液層厚度為1.00cm的吸收池后，吸光度為0.19，求該溶液的透光率。5.若將某波長(zhǎng)的單色光通過液層厚度為1.00cm的溶液，則透過光強(qiáng)度為入射光強(qiáng)度的1/4，問當(dāng)該溶液液層厚度為2.00cm時(shí)，透光率（T）和吸光度（A）為多少？

（T=65%）（A2=2A1=1.20，T2=(T1)2=1/16）

根據(jù)Lambert-Beer定律，以該物質(zhì)吸收光譜圖中的λmax為入射光，首先配制一個(gè)與被測(cè)溶液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液cs，測(cè)其As，再將樣品溶液推入光路，測(cè)其Ax

，則試樣溶液的濃度cx為：此法適于非經(jīng)常性的分析工作，準(zhǔn)確度不如標(biāo)準(zhǔn)曲線法。二、紫外可見分光光度法的定量方法1.單一組分的測(cè)定（1）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法06:22:11例：維生素B12的含量測(cè)定精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀釋至10.00mL；另配制對(duì)照液，精密稱定對(duì)照品25.00mg，加水稀釋至1000mL。在361nm處，用1cm吸收池，分別測(cè)定吸光度為0.508和0.518，求B12注射液注射液的濃度（單位ug/mL)1）對(duì)照法

⑴測(cè)定步驟

①首先配制一系列被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)其吸光度，繪出A-c工作曲線；②在相同條件下，測(cè)出被測(cè)物的吸光度Ax;③根據(jù)Ax的值在工作曲線上查處cx的大小。⑵適用范圍大批重復(fù)試樣的分析。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線法(工作曲線法)未知物的吸光度未知物的濃度2、多組分的定量方法三種情況：（1）兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）

兩組分在各自λmax下不重疊→分別按單組分定量令E=εb（2）．兩組分吸收光譜部分重疊

λ1→測(cè)A1→b組分不干擾→可按單組分定量測(cè)Caλ2→測(cè)A2→a組分干擾→不能按單組分定量測(cè)Ca06:22:11步驟：（3）．兩組分吸收光譜完全重疊——混合樣品測(cè)定物質(zhì)的吸收光譜與測(cè)定條件有密切的關(guān)系。測(cè)定條件（溫度、溶劑極性、pH等）不同，吸收光譜的形狀、吸收峰的位置、吸收強(qiáng)度等都可能發(fā)生變化。63第四節(jié)紫外可見分光光度法的條件選擇1086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434濃度測(cè)量的相對(duì)誤差與T(或A)的關(guān)系實(shí)際工作中，應(yīng)控制T在10～70％,

A在0.15～1.0之間(調(diào)c,b,)一、試樣濃度的選擇：最佳值最佳讀數(shù)范圍二、入射光的波長(zhǎng)的選擇“吸收最大max

，干擾最小”AXmaxY(2)三、顯色條件的選擇1.顯色劑的選擇

1.靈敏度高，選擇性好。（一對(duì)一）

Cu~NH3

e620=1.2×102

Cu~雙硫腙

e533=5.0×1042.顯色產(chǎn)物組成恒定,性質(zhì)穩(wěn)定。

3.顯色產(chǎn)物與顯色劑色差大,顯色時(shí)顏色變化明顯.試劑空白值小。

4.顯色條件要易于控制，以保證其有較好的在線性。

2.顯色劑的用量（由實(shí)驗(yàn)確定）

M+R

=MR

(被測(cè)組分)(顯色劑)(有色化合物)R過量,反應(yīng)完全,MR穩(wěn)定,A值穩(wěn)定.

AAACRCRCRabab000A與CR關(guān)系圖選擇曲線變化平坦處。顯色劑用量過量、適量、定量。

3顯色溫度、時(shí)間適宜的顯色時(shí)間和溫度由實(shí)驗(yàn)確定（曲線平坦部分對(duì)應(yīng)的時(shí)間和溫度就是測(cè)定吸光度的最適宜時(shí)間）

At25℃50℃t/minA四、酸度的選擇OH-酸度的影響副反應(yīng)M+nR=MRnH+存在型體的變化RH=R-+H+

生成不同配比的絡(luò)合物例，磺基水楊酸(ssal)–Fe3+pH=2~3FeR紫紅色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黃色

pH>12Fe(OH)3

沉淀pH1<pH<pH2選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)ApH五.干擾離子的影響及其消除方法A、控制溶液酸度B、加入掩蔽劑C、利用氧化還原反應(yīng)，改變干擾離子的價(jià)態(tài)D、利用校正系數(shù)E、利用參比溶液F、選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)G、增加顯色劑用量H、采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法，分離干擾離子

E.參比溶液(空白溶液)在測(cè)定時(shí)用空白溶液調(diào)節(jié)儀器A=0(T=100%),以消除溶液中其它物質(zhì)的干擾,抵消比色皿對(duì)光反射、吸收.1)溶劑參比

試液、試劑、顯色劑均無(wú)色(無(wú)吸收)

則可用溶劑如純水作參比溶液.

2)試劑參比試液無(wú)色,顯色劑或其它試劑有色(有吸收),則應(yīng)選試劑空白.3)試液參比試劑、顯色劑均無(wú)色(無(wú)吸收),試液中其它組分有色,則應(yīng)采用不加顯色劑的試液作參比溶液.選擇參比溶液的總原則是:使試液的吸光度能真正反映待測(cè)組分的濃度.06:22:11例1．取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密稱取10.00mg，加少量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，加水至刻度線，取此溶液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL4mL，加水至刻度線。取此溶液于1cm比色池中，在323nm處測(cè)定吸光度為0.463，已知該波長(zhǎng)處的，求咖啡酸百分含量。解：1、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突出優(yōu)點(diǎn)是()(1)可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍(2)可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)(3)可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差(4)可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差1、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突出優(yōu)點(diǎn)是()(1)可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍(2)可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)(3)可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差(4)可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是()(1)試樣吸收與參比吸收之差(2)試樣在1和2處吸收之差(3)試樣在1和2處吸收之和(4)試樣在1的吸收與參比在2的吸收之差

3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，CuSO4

溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（）

(1)藍(lán)色光(2)綠色光

(3)黃色光(4)紅色光2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是()(1)試樣吸收與參比吸收之差(2)試樣在1和2處吸收之差(3)試樣在1和2處吸收之和(4)試樣在1的吸收與參比在2的吸收之差

3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，CuSO4

溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（）

(1)藍(lán)色光(2)綠色光

(3)黃色光(4)紅色光2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是()(1)試樣吸收與參比吸收之差(2)試樣在1和2處吸收之差(3)試樣在1和2處吸收之和(4)試樣在1的吸收與參比在2的吸收之差

3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，CuSO4

溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（）

(1)藍(lán)色光(2)綠色光

(3)黃色光

(4)紅色光5、KO4法氧化Mn2+到MnO4－，然后用分光光度法測(cè)定，選擇合適的空白為（）

(1)蒸餾水(2)試劑空白

(3)除