標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 28642-2012《飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)對(duì)飼料中的沙門(mén)氏菌進(jìn)行快速檢測(cè)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于各種類(lèi)型的飼料原料及成品中沙門(mén)氏菌的定性分析。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程主要包括樣品準(zhǔn)備、DNA提取、引物設(shè)計(jì)與選擇、PCR擴(kuò)增條件設(shè)定、產(chǎn)物分析等幾個(gè)關(guān)鍵步驟。首先，在樣品準(zhǔn)備階段，需要從待測(cè)飼料中取樣，并按照規(guī)定的方法處理以獲取適合后續(xù)操作的樣本。接著是DNA提取環(huán)節(jié)，這里要求使用有效的手段從處理后的樣品中分離出細(xì)菌DNA，作為下一步實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)材料。

對(duì)于引物的選擇，標(biāo)準(zhǔn)推薦了幾種針對(duì)沙門(mén)氏菌特定基因序列設(shè)計(jì)的引物組合，這些引物能夠特異性地識(shí)別目標(biāo)微生物，從而保證了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨后，在設(shè)定好的條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，通過(guò)控制溫度循環(huán)來(lái)復(fù)制目標(biāo)DNA片段，使得微量存在的病原體DNA得以放大至可被檢測(cè)到的程度。

最后一步是對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析，通常采用凝膠電泳法或其他適當(dāng)?shù)募夹g(shù)手段，觀察是否存在預(yù)期大小的DNA條帶，以此判斷原始樣品中是否含有沙門(mén)氏菌。此外，為了確保實(shí)驗(yàn)的有效性和可靠性，還需要設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

整個(gè)流程強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范的重要性以及對(duì)環(huán)境清潔度的要求，以避免交叉污染導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性的發(fā)生。同時(shí)，也指出了在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中可能遇到的問(wèn)題及其解決辦法，為從事相關(guān)領(lǐng)域工作的人員提供了詳細(xì)的指導(dǎo)。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2012-07-31 頒布
  • 2012-11-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
GB/T 28642-2012飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法_第1頁(yè)
GB/T 28642-2012飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法_第2頁(yè)
GB/T 28642-2012飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法_第3頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

ICS65120

B46.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T28642—2012

飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR法

()

RapiddeterminationofSalmonellasppinanimalfeedingstuffs—

.

PCRmethod

2012-07-31發(fā)布2012-11-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T28642—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC76)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位農(nóng)業(yè)部飼料質(zhì)量及畜產(chǎn)品安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心沈陽(yáng)

:()。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張秀芹張建勛杜柏林李欣南楊希國(guó)馬俊馳陳曉月

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28642—2012

飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)方法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR法

()

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中沙門(mén)氏菌的快速檢測(cè)的方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中沙門(mén)氏菌的定性篩選

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

飼料中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方法

GB/T13091

飼料采樣

GB/T14699.1

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T1193

食品中致病菌檢測(cè)方法實(shí)時(shí)法

SN/T1870PCR

3原理

利用沸水浴使菌體細(xì)胞破裂釋放基因組離心使細(xì)胞壁等有形物沉淀以上清液為模板進(jìn)行

,DNA,,

擴(kuò)增瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物

,PCR。

4試劑和材料

除另有規(guī)定外試劑為分析純或生化試劑試驗(yàn)用水符合的要求

,,GB/T6682。

41沙門(mén)氏菌檢測(cè)用引物對(duì)序列為

.():

SalF:5′-TCGCACCGTCAAAGGAACCGTAAAGC-3′

SalR:5′-GCATTATCGATCAGTACCAGCCGTCT-3′

42Taq緩沖液內(nèi)含Taq聚合酶2+

.Premix(2×):DNA1.25U/25μL,4mmolMg,dNTP

各

0.4mmol。

43瓊脂糖電泳級(jí)

.:。

44

.Marker2000。

45緩沖蛋白胨水見(jiàn)

.(BPW):A.1。

46大豆蛋白胨肉湯見(jiàn)

.(RVS):A.2。

47亞硒酸鹽胱氨酸增菌液見(jiàn)

.(SC):A.3。

48倍上樣緩沖液的溴酚藍(lán)丙三醇溶液的

.10(10×loadingbuffer):0.05%,50%,1%SDS。

49質(zhì)控菌株沙門(mén)氏菌陽(yáng)性標(biāo)

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