HIV抗體初篩試驗

HIV抗體篩查試驗山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗科郭先鋒

HIV抗體檢測的目的和要點目的診斷血液篩查監(jiān)測要點根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略!嚴(yán)格遵守實驗室SOP篩查試驗陽性—需做確證試驗篩查試驗陰性—不應(yīng)做確認(rèn)試驗篩查及確證試驗均應(yīng)做好咨詢工作HIV抗體篩查試驗試劑儲存溫度效期樣品血清血漿全血方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA化學(xué)發(fā)光或免疫熒光實驗快速檢測(RT)及其它檢測試驗

明膠顆粒凝集試驗（PA）免疫滲濾試驗免疫層析試驗免疫膠體金法（硒）免疫膠體金法陰性質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線陽性質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線檢測區(qū)（T）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線無效質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色反應(yīng)線HIV抗體篩查試驗HIV抗體篩查試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法類型

雙抗原夾心法測抗體雙抗體夾心法測抗原捕獲法測抗體間接法測抗體競爭法測抗原\抗體用于檢測HIV抗體的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物為抗原，應(yīng)用間接法原理檢測HIV抗體。如日本富士公司生產(chǎn)的HIV-PA試劑。第二代：使用在細(xì)菌或真菌中表達(dá)的人工重組或化學(xué)合成多肽HIV抗原，應(yīng)用間接法原理檢測HIV抗體?；蛑亟M通常易于在培養(yǎng)基中生產(chǎn)大量同源性抗原，產(chǎn)品為單一目的基因而非多樣性抗原混合，特異性高于第一代試劑。用于檢測HIV抗體的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少數(shù)用重組抗原），應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測HIV抗體。由于標(biāo)記HIV抗原可同時檢測血清中HIV-1IgG、IgM、IgA抗體，此類試劑的敏感性和特異性均優(yōu)于標(biāo)記抗人免疫球蛋白的間接法。高純度的HIV-1/-2型抗原待檢抗體酶標(biāo)記的HIV-1/-2型抗原用于檢測HIV抗體的ELISA法第四代此類試劑在第三代試劑盒基礎(chǔ)上，將針對P24抗原的抗體與HIV-1抗原一起包被固相載體，可同時檢測HIV-1IgG、IgM、IgA抗體和P24抗原。增加了敏感性和特異性檢測HIV抗體的ELISA試劑試劑種類必須使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)，批批檢合格的HIV抗體檢測試劑使用在有效期內(nèi)且保存條件符合要求的試劑存放試劑的冰箱溫度2-8℃，使用前要放置室溫平衡檢測HIV抗體的ELISA試劑完整的ELISA試劑盒包含以下各組分

已包被抗原或抗體的固相載體酶標(biāo)記的抗原或抗體

酶的底物

陰性對照品和陽性對照品定性測定

標(biāo)本（和結(jié)合物）的稀釋液

洗滌液

酶反應(yīng)終止液ELISA檢測試劑固相載體

固相載體材質(zhì)

聚苯乙烯

固相載體形狀

微量滴定板

檢測HIV抗體的ELISA試劑結(jié)合物（酶標(biāo)記的抗體或抗原）辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)底物

四甲基聯(lián)苯胺(TMB)反應(yīng)后顯藍(lán)色，終止后呈黃色，最適吸收波長為450nm

檢測HIV抗體的ELISA試劑洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水終止液HRP常用強(qiáng)酸，最常見2mol/L硫酸

ELISA試驗

標(biāo)本的采取和保存加樣孵育洗滌顯色與終止酶標(biāo)儀測定標(biāo)本的采取和保存

避免溶血紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色

避免污染血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)保存一周內(nèi)2～8℃一周以上-20℃標(biāo)本送檢信息姓名外螺旋蓋（帶膠墊）血清管

√×接收樣本時，必須填寫樣本接收記錄單建立樣本的唯一性編碼

登記有關(guān)信息受檢者姓名、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期

樣本的接收樣本的接收認(rèn)真核對樣本與送檢單提供的信息是否相符、樣本有無破損和滲漏。如發(fā)現(xiàn)滲漏的，立即將尚存的樣本移出，對樣本管及包裝進(jìn)行消毒，同時報告主管領(lǐng)導(dǎo)和有關(guān)專家檢查樣本的物理性狀。并做好記錄。如果樣本不符合試驗的要求，應(yīng)將樣本安全廢棄，同時立即通知送樣人樣本的接收實驗室工作人員在打開樣本容器時，須小心，防止內(nèi)容物崩濺。樣本處理時，須穿戴防護(hù)衣，在生物安全柜中操作，同時應(yīng)戴一次性口罩、防護(hù)眼鏡，防止皮膚、粘膜污染。用后的包裝要進(jìn)行消毒檢測方法必須按照試劑盒說明書（sop）中規(guī)定的要求進(jìn)行操作包括進(jìn)行檢測的實驗條件如陽性對照和陰性對照的設(shè)置、試劑、標(biāo)本加樣量、孵育時間、反應(yīng)溫度、洗滌程序和次數(shù)等

標(biāo)本質(zhì)量

冷凍樣品實驗前需解凍并混勻，血清或血漿樣品如溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況，可能會對試驗產(chǎn)生影響

加樣

移液器(包括單頭和多頭移液器)是實驗室中重要的基本器具，一年至少校準(zhǔn)一次準(zhǔn)確加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡，加入后及時放入孵箱檢測方法檢測方法

孵育孵育的溫度要控制好，時間要掌握好，嚴(yán)格按照說明書操作注意封板，避免蒸發(fā)反應(yīng)板不宜疊放，反應(yīng)板至水面下的1/3處，以保證各板的溫度都能迅速平衡，保證溫度的均一性檢測方法

洗滌各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象按孔的大小調(diào)節(jié)好洗液的量孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡檢測方法

顯色與終止顯色劑不用過期顯色劑加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生較多氣泡，則會導(dǎo)致假陽性酶標(biāo)儀測定每天（每次）核對酶標(biāo)儀濾光片波長查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象每周清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件，不沾灰塵每月洗滌時檢查各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提℃℃℃ELISA洗板機(jī)與酶標(biāo)儀(推薦方法)結(jié)果報告分析結(jié)果及發(fā)出檢測報告前，應(yīng)在試劑盒和外部質(zhì)控品結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進(jìn)行分析，試劑盒及外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測，復(fù)核人對檢測結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)復(fù)核并對結(jié)果提出結(jié)論，簽發(fā)人對試驗結(jié)論進(jìn)行審核、分析、總結(jié)、簽字

結(jié)