動物棘球蚴病（包蟲?。┓乐渭夹g規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB1507/TXXXX—XXXX前言本標準依據(jù)GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草。請注意，本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準由呼倫貝爾市農(nóng)牧業(yè)局提出并歸口。本標準起草單位：呼倫貝爾市動物疫病預防控制中心本標準主要起草人：格根塔娜、余興邦、王冠玉、邱凱、王巍、田宗民、那仁滿都拉、連俊琪、李穎、賈長生、王志剛、許楊、木其熱、楊旭麗、孫紅霞、安冬動物棘球蚴?。òx病）防治技術規(guī)范范圍本標準規(guī)定了動物棘球蚴病（包蟲?。┑囊?guī)范性引用文件、術語和定義、診斷（病原及其形態(tài)、流行病學、臨床癥狀、剖檢變化、實驗室診斷、結果判定）、疫情報告、疫情處置、預防控制、人員防護和無害化處理。本標準適用于動物棘球蚴病（包蟲?。┑姆乐巍Ｒ?guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB36195-2018畜禽糞便無害化處理技術規(guī)范NY/T1466-2018動物棘球蚴病診斷技術病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范術語和定義下列術語和定義適用于本文件。棘球蚴病又名包蟲病(Hydatiddisease)。是棘球絳蟲的幼蟲寄生在牛、綿羊、山羊、豬及人的各臟器（主要是肝臟，其次是肺臟，或脾、腎、腦等）所致的一種人獸共患寄生蟲病。診斷病原及其形態(tài)棘球蚴?。òx病）病原為棘球蚴，是棘球絳蟲的幼蟲期。細粒棘球絳蟲成蟲：寄生在犬、狼、狐貍等肉食動物的小腸里，是一種很小的絳蟲，體長2.0～9.2mm。具有2～5個體節(jié)，多數(shù)3個體節(jié)。頭節(jié)有吻突,上具28～40個大鉤和小鉤，排列呈2圈。生殖孔位于體節(jié)一側的中央稍后處。睪丸32～65個，多數(shù)分布于生殖孔水平的前半部。陰莖囊長0.5毫米。卵巢瓣狀，呈馬蹄形。卵黃腺分瓣或塊狀。子宮在成熟體節(jié)呈管狀，直立中央，孕節(jié)子宮則呈囊狀,并有側枝,內含500～800個圓形或卵圓形的六鉤蚴蟲卵。幼蟲（棘球蚴）：寄生于家畜的肝臟、肺臟以及其他器官，呈包囊狀，從黃豆大到籃球大，囊內充滿液體。囊壁較厚不透明，分兩層，外層為角質層，內層為生發(fā)層。由生發(fā)層長出砂粒樣的小囊，稱為生發(fā)囊其內壁上有許多頭節(jié)（也叫原頭蚴）。另外，也可由生發(fā)層直接長出頭節(jié)。這些頭節(jié)和生發(fā)囊部分附著在囊壁生發(fā)層上，部分脫落在囊液中，眼觀呈細砂狀，故稱“棘球砂”。多房棘球絳蟲成蟲（多房棘球絳蟲）：寄生在犬等肉食動物的小腸里，外形和結構都與細粒棘球絳蟲相似，但蟲體更小，長僅為1.2～3.7mm，頭節(jié)、頂突、小鉤和吸盤等都相應偏小，頂突小鉤為13～34個。蟲體常有4～5個節(jié)片。成節(jié)生殖孔位于節(jié)片中線偏前，睪丸數(shù)較少，為26～36個，都分布在生殖孔后方。孕節(jié)子宮為簡單的囊狀，無側囊，內含蟲卵187～404個。幼蟲（泡球蚴）：寄生在野生嚙齒類動物體內。淡黃色或白色的囊泡狀團塊，囊泡圓形或橢圓形，直徑為0.1～0.7cm，內含透明囊液和許多原頭蚴，或含膠狀物而無原頭蚴。囊泡外壁角皮層很薄且常不完整，整個泡球蚴與宿主組織間無纖維組織被膜分隔。泡球蚴多以外生性出芽生殖不斷產(chǎn)生新囊泡，長入組織，少數(shù)也可向內芽生形成隔膜而分離出新囊泡。一般1～2年即可使被寄生的器官幾乎全部被大小囊泡占據(jù)。呈葡萄狀的囊泡群帶可向器官表面蔓延至體腔內，猶如惡性腫瘤。流行病學易感動物綿羊最易感，其次為山羊、牛、豬等草食和雜食動物，人亦感染。傳染源帶棘球絳蟲蟲卵的犬糞便（感染中間宿主）、被棘球蚴感染的家畜內臟（感染終末宿主）。傳播途徑棘球蚴?。òx病）感染是經(jīng)過消化道途徑，在中間宿主家畜和終末宿主犬科動物之間循環(huán)傳播。終末宿主犬、狼、狐貍等犬科動物把含有棘球絳蟲的孕卵節(jié)片和蟲卵隨糞便排出體外而污染牧草、牧地和水源。當中間宿主羊、牛等通過吃草飲水吞下蟲卵后，卵膜因胃酸作用被破壞，六鉤蚴溢出，鉆入腸黏膜血管，隨血流達到全身各組織，逐漸生長發(fā)育成棘球蚴，最常見的寄生部位是肝臟和肺臟。當終末宿主吃了含有棘球蚴的臟器，經(jīng)兩個半月到三個月時間在腸道內發(fā)育成細粒棘球絳蟲，再隨糞便排出體外感染中間宿主，如此循環(huán)傳播感染。流行特點棘球蚴?。òx病）多流行于牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)，其他地區(qū)多為散發(fā)。多宿主間循環(huán)傳播是造成該病流行的重要因素，畜犬混養(yǎng)和內臟喂犬等傳統(tǒng)飼養(yǎng)習慣加劇了棘球蚴病（包蟲?。┑牧餍小＜胰腥韭矢?、驅蟲質量無法保障等因素一定程度上增加了棘球蚴病（包蟲?。┑姆揽仉y度。臨床癥狀棘球蚴在家畜（羊、牛、駱駝、豬）和人寄生過程中，會壓迫所寄生的臟器及周圍組織，引起組織萎縮和機能障礙。肝臟寄生時能導致消化失調，出現(xiàn)黃疸，肝區(qū)壓痛明顯；肺臟寄生時會出現(xiàn)咳嗽、喘息和呼吸困難。代謝產(chǎn)物被吸收后，使周圍組織發(fā)生炎癥和全身過敏反應，嚴重者可致死。棘球絳蟲對犬的致病作用不明顯，一般情況不表現(xiàn)臨床癥狀。剖檢變化剖檢法見附件1。在家畜臟器（主要是肝和肺）表面或內部發(fā)現(xiàn)白色、半透明、表面光滑、觸之堅韌、壓之有彈性、叩診時有震顫感的典型包囊，切開時有囊液流出，將囊液沉淀后用肉眼或在顯微鏡下看到許多生發(fā)囊與原頭蚴。實驗室診斷鏡檢將采集的疑似包囊病灶樣品,以4%福爾馬林鹽水固定,采用常規(guī)組織學技術染色檢測。顯微鏡下觀察，結締組織下出現(xiàn)過碘酸雪夫氏(PAS)陽性無細胞結構的角質層,內層為具有細胞核結構的生發(fā)膜,即可視為棘球蚴的特征性結構?？捎覂然蚣蛏爸谐霈F(xiàn)原頭蚴也是棘球蚴病（包蟲?。┎≡脑\斷特征。病原學診斷家畜棘球蚴?。òx病）臟器檢查重點檢查肝、肺和腎等實質器官，發(fā)現(xiàn)包囊，可判定為棘球蚴病（包蟲病），檢查方法參見附件1。若肉眼不能鑒別的疑似包囊病灶樣品，需經(jīng)病理切片檢查或DNA檢查確認包囊性質。犬科動物棘球絳蟲檢查檢查犬科動物小腸內的棘球絳蟲及其感染程度。剖（割）檢和蟲體檢測方法見附件2。犬糞抗原檢測對棘球蚴?。òx病）流行區(qū)終末宿主（家/牧羊犬）糞便樣品用抗體夾心ELISA方法進行檢測，陽性結果表明該樣品中含棘球絳蟲蟲體代謝物（分泌物）、破碎物或蟲卵等抗原。操作方法參見附件3。血清學診斷間接紅細胞凝集試驗（IHA）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）上兩述檢測方法按照《動物棘球蚴病診斷技術》（NY/T1466-2018）要求進行操作。分子生物學診斷按照《動物棘球蚴病診斷技術》（NY/T1466-2018）要求進行操作。結果判定根據(jù)4.5.1鏡檢結締組織下出現(xiàn)過碘酸雪夫氏(PAS)陽性無細胞結構的角質層,內層為具有細胞核結構的生發(fā)膜，4.5.2.1發(fā)現(xiàn)有棘球蚴包囊、囊液有原頭蚴、4.5.4分子生物學診斷陽性病例，即可確診為棘球蚴?。òx病）病例。根據(jù)4.5.2.2犬科動物棘球絳蟲檢查出蟲體，可確診為犬棘球絳蟲病例。根據(jù)4.5.2.3可判定為犬疑似感染棘球絳蟲病。根據(jù)4.5.3.1，4.5.3.2檢測陽性時，可判定為疑似感染棘球蚴?。òx病）病例。疫情報告任何單位和個人發(fā)現(xiàn)疑似病例后,應當及時向當?shù)貏游镆卟☆A防控制機構報告。動物疫病預防控制機構接到疫情報告并確認后,按《動物疫情報告管理辦法》有關規(guī)定及時上報。并及時向同級獸醫(yī)行政主管部門報告。應準確報告疫情發(fā)生的時間、地點，感染動物種類、數(shù)量、病理變化、診斷情況，流行病學和疫源追蹤情況，已采取的控制措施，疫情報告單位、負責人、報告人及聯(lián)系方式等。疫情處置疫情確認棘球蚴?。òx病）疫情由縣級以上獸醫(yī)主管部門根據(jù)疫病流行特點、臨床癥狀、病理變化和實驗室檢測結果予以確認。病畜、病變臟器、污染物品及環(huán)境的處理對病畜立即隔離，限制移動。對病變臟器采用高溫、焚燒或化制等方式進行無害化處理。對羊舍、活動場地、器具、墊料、飼草和糞便等應用10%的氫氧化鈉溶液噴灑或火焰消毒處理。感染犬只、污染物品及環(huán)境的處理對患病犬或者檢測陽性犬隔離，按每公斤體重25～30mg的劑量，每天一次，連續(xù)五天投喂，收集糞便并進行無害化處理。對犬舍、活動場地、器具、墊料、飼料和糞便等應用10%的氫氧化鈉溶液噴灑或火焰消毒處理。預防控制堅持預防為主，綜合防治，建立政府主導，部門配合，全社會共同參與的防治機制。犬只的防控犬只驅蟲按犬只每公斤體重5～10mg的劑量一次性口服吡喹酮，重點旗市區(qū)每4～6周驅蟲一次，一年8～12次，非重點旗市區(qū)一年驅蟲不少于4次。投藥前家犬應禁食12小時，然后將藥片夾在食物中（如饅頭、肉等，或用含誘食劑的吡喹酮）進行投喂，確認犬吞服后進行犬只驅蟲登記。犬只登記管理完善家犬登記管理，全面推行家犬拴養(yǎng)，因地制宜實施限養(yǎng)。應及時撲滅陽性犬及流浪犬，嚴格管控犬只數(shù)量。犬只驅蟲后糞便的處理收集犬只驅蟲后5天內的糞便，采用深埋、焚燒或10%的氫氧化鈉溶液消毒等方式進行無害化處理，防止蟲卵污染環(huán)境。免疫疫苗選擇采用羊包蟲病疫苗（含細粒棘球蚴Eg95抗原）進行羊免疫。疫苗的保存、運輸在2～8℃下保存，避免高溫和陽光直射，忌劇烈搖蕩。疫苗稀釋后，如不能當日用完，可在-20℃凍存，但只能凍融1次，不可反復凍融使用。疫苗的接種對新生家畜進行兩次抗細粒棘球蚴病疫苗接種，間隔一個月。以后每年進行一次強化免疫，強化免疫半個月后開展免疫抗體合格率評價。免疫要求接種的羊必須臨床表現(xiàn)健康，疫苗注射當天早晨應禁飼。疫苗使用前要逐瓶檢查，藥瓶應無破損、真空包裝完整，瓶簽上疫苗的名稱、批號、有效日期、檢驗號碼等必須清楚。包裝破損、破乳分層、顏色改變等現(xiàn)象的疫苗不得使用。疫苗使用前應置于室溫（22～25℃）2小時，使用時充分搖勻，保持勻質。疫苗啟封后，24小時內用完。按瓶簽注明的頭份，用滅菌生理鹽水稀釋，每只羊頸部皮下注射1mL。免疫效力評價包蟲免疫21天后采血，檢測羊的免疫抗體水平，評價免疫效果。不良反應處置出現(xiàn)不良反應要及時在羊皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素1mL，視病情緩解程度，20分鐘后重復注射相同劑量1次；肌肉注射鹽酸異丙嗪100mg，地塞米松磷酸鈉10mg（孕羊不得使用）。監(jiān)測監(jiān)測對象綿羊、山羊、牛等中間宿主，犬只等終末宿主。監(jiān)測方法對家畜按4.5.2.1、4.5.3、4.5.4進行監(jiān)測。對犬等終末宿主可按4.5.2.2，4.5.2.3進行監(jiān)測。初次監(jiān)測應進行流行病學調查。監(jiān)測范圍、時間及數(shù)量依據(jù)每年的《呼倫貝爾市動物疫病監(jiān)測與流行病學調查計劃》要求進行采樣監(jiān)測。監(jiān)測結果處理及時向當?shù)貏游镆卟☆A防控制機構報告監(jiān)測結果。判斷為患病動物或檢測陽性動物時，按6.1、6.2和6.3進行處置，以及按7.1、7.2和7.3進行預防控制。檢疫監(jiān)管加強對屠宰檢疫監(jiān)管，牛羊等牲畜實行定點屠宰。對完善屠宰場點無害化處理設備設施建設，感染棘球蚴?。òx病）家畜的臟器采取無害化處理，禁止將病變內臟直接喂犬和隨處丟棄。宣傳培訓在開展驅蟲、免疫工作前對專業(yè)技術人員進行培訓，提高專業(yè)人員的技術水平；加強對棘球蚴?。òx?。┓乐沃R、政策和主要措施等內容的宣傳。人員防護在接觸終末宿主糞便、棘球絳蟲蟲體時，應穿戴連體工作服、膠靴，帶一次性口罩、手套。連體工作服、一次性口罩、手套用后應煮沸或銷毀，膠靴用10％次氯酸浸泡或高溫、高壓殺滅蟲卵。無害化處理上文中提到的病死畜、病變臟器、污染物品及環(huán)境的處理依據(jù)《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)［2017］25號）、《畜禽糞便無害化處理技術規(guī)范》（GB/T36195-2018）要求進行無害化處理。附件1：剖檢法檢查家畜棘球蚴（包蟲）病操作方法附件2：犬科動物細粒棘球絳蟲的蟲體檢查（測）方法附件3：犬科動物細粒棘球絳蟲糞抗原檢測方法附件1：剖檢法檢查牛羊棘球蚴（包蟲）病操作方法1剖檢法國際公認的剖檢法，對牛羊屠宰后進行棘球蚴病感染調查。2檢查用品大搪瓷盤、解剖刀、剪刀、手術刀、平皿、記號筆、醫(yī)療垃圾袋、尸體袋、水桶。3檢查方法3.1被檢牛羊登記、編號3.2剖檢3.3內臟檢查檢查前做好個人安全防護。取出剖檢被檢牛羊的胃、腸等消化器官，仔細檢查體腔內心、肝、肺、腎及脾等臟器外表面，有無包囊或小白點形的囊狀物。將帶包囊和小白點狀物的臟器從體腔內取出，用清水冼去血污，置入瓷盤上。3.4檢囊首先肉眼逐區(qū)觀察臟器表面，對于表層明顯可見的包囊先切開，看其結構。然后，用手逐區(qū)觸摸臟器，發(fā)現(xiàn)臟器實質內囊狀物時，切開深層囊，觀其結構。幼年羊包囊處于發(fā)育初期，其形態(tài)和大小不同于成年羊包囊，呈小白點狀，囊徑小于0.5cm，不易觀察，生長在臟器表面和內部。檢查辦法應先肉眼仔細逐區(qū)觀察臟器表面，將表面所有可疑小白點囊狀物"#"字型切下，放入平皿。然后，將被檢臟器按順序切成2～5mm的薄片，逐片用手觸摸，肉眼檢查，發(fā)現(xiàn)囊狀物，用"#"字型切下，放入平皿。4判定結果4.1包囊判定4.1.1包囊位于臟器的實質內，周圍由宿主結締組織包圍，呈灰白色，有半透明感。4.1.2囊壁粉皮樣白色，切開囊壁，可見囊腔，囊液透明無色。含囊砂(原頭蚴)和子囊或無。4.1.3幼齡羊大多形成0.5cm以下小白點狀的包囊，具以下特征：4.1.3.1小囊外觀呈珠狀，表面光澤，位于臟器包膜之下，有很強的觸感，質地堅韌有彈性；4.1.3.2將囊沿中軸切開，具明顯囊腔，其內含少量透明囊液，壁白色。4.2包囊計數(shù)根據(jù)上述特征結構，按不同臟器進行包囊計數(shù)，測囊徑范圍，登記。5被檢物處理被檢臟器查完后煮沸或焚燒做無害化處理。附件2：犬科動物細粒棘球絳蟲的蟲體檢查（測）方法1材料的采集和保存動物死亡后盡快取下小腸，將兩端扎緊，放入巳編號的塑科袋或金屬容器內，盡快送往實驗室。長距離運輸時，可將材料袋擱置于冰塊上，或將小腸扎好浸泡在固定液內（4-10%的甲醛溶液），也可將固定液注入腸腔內。未固定的材料要盡快檢查或冷凍待檢。蟲卵對低溫的抵抗力較強，固定液不能殺死蟲卵。但在70℃條件下，24h能將蟲卵殺滅。2蟲體檢查與計數(shù)新鮮腸管分成均等的幾段，浸泡在37℃的溫生理鹽水中待檢，附著在腸壁上的蟲體可用放犬鏡進行觀察和計數(shù)。為了精確計算感染強度，將未固定的小腸分成4-6段，每段腸管縱向切開，浸泡在37℃的溫生理鹽水30min，待蟲體釋放到鹽水中，腸壁用刮鏟刮一下，將腸內容物用鹽水沖洗幾遍，所有材料煮沸，過篩（80-100目）濾洗，除去絕大部分有色顆粒材料。濾洗后的腸內容物和刮取物均放在黑色淺皿內，用放大鏡或體式（立體）顯微鏡觀察計數(shù)。3蟲體的固定與染色固定時，用吸管吸掉容器中的上清液，注入冷甲醛液（約5℃）或F.A.A固定液浸沒絳蟲，絳蟲應在固定液中固定至少12h。染色時，蟲體在水中洗滌15min，然后直接置于邁耶爾氏副卡紅（Mayer，sParacarmine）中染色12-24h。染色后，將蟲體浸泡在0.5-1%鹽酸溶液中數(shù)秒，洗去過多的染色劑。將染過色的蟲體連續(xù)置于濃度遞增(40%，50%，70%，85%，95%，99%)的酒精溶液中脫水，每一濃度至少脫水15min，其中l(wèi)00%酒精溶液脫水2次。4標本制作脫水后，將蟲體置于二甲苯中10分針，然后取出用甲基水楊酸酯（冬青油）透明。最后用加拿大樹膠等標本封固液制成標本。F.A.A固定液：95%乙醇80ml福爾馬林（37—40%甲醛）lOml冰醋酸5ml邁耶爾氏副卡紅（Mayer，sParacarmine）染色液：卡紅酸1.0g，氯化鋁0.5g氯化鈣4.0g，乙醇lOOml（加熱混合，直至配料溶解，然后過濾）。附件3：犬科動物細粒棘球絳蟲糞抗原檢測方法1材料準備聚苯乙烯塑料反應板、離心機、50ml離心管、10ml離心管、2（5）ml離心管、一次性筷子、防水記號筆、包被液、酶結合物、封閉液、底物液、終止液、陰性對照糞液、移液器、移液器（垂）吸頭、恒溫箱、恒溫水浴鍋等。1.1抗體包被反應扳用包被液將第一抗體按要求稀釋。每孔lOOul加入聚苯乙烯塑料反應板孔中。將包被好的反應板置濕盒內4℃冰箱過夜。次日取出反應板，甩凈孔中液體，然后用洗板機洗滌3次，每次3min，每次每孔加洗滌痕300ul。最后將板在毛巾或吸水紙上甩凈拍干。每孔加300ul封閉液，置濕盒內37℃溫箱溫育lh。取出反應板，甩凈孔中液體，同前洗板3次，每次3min，最后甩凈拍干。包被好的反應板可以立即使用，也可以置-20℃凍存?zhèn)溆谩?.2糞樣的收集前1天將犬拴好，次日清晨，挑選新排出的糞便l-2g裝