動物生理實驗-白細(xì)胞計數(shù)

動物生理學(xué)實驗2023/2/42實驗一

白細(xì)胞的計數(shù)思考題注意事項方法步驟材料設(shè)備基本原理實驗?zāi)康摹緦嶒災(zāi)康摹苛私獍准?xì)胞計數(shù)原理，學(xué)習(xí)其測定方法。2023/2/43【基本原理】白細(xì)胞簡介白細(xì)胞是血液中非常重要的一類細(xì)胞，通常被稱為免疫細(xì)胞，存在于血液、淋巴及血管、淋巴管以外的組織中。白細(xì)胞在人體中擔(dān)負(fù)許多重任，它具有吞噬異物并產(chǎn)生抗體的作用，機體傷病的損傷治愈能力，抗御病原體入侵的能力，對疾病的免疫抵抗力等。人身體有不適時，經(jīng)常會通過白細(xì)胞數(shù)量的顯著變化而表現(xiàn)出來。因此到醫(yī)院看病很多情況下需要化驗血常規(guī)，血常規(guī)檢查中最多用途的就是白細(xì)胞計數(shù)和分類。正常值范圍：（單位為10個/L）新生兒為（15-20）×109個/L6個月到2歲為（11-12）×109個/L4到14歲為8×109個/L成人為（4.0-10.0）×109個/L臨床意義：增多：常見于急性細(xì)菌性感染、嚴(yán)重組織損傷、大出血、中毒和白血病等。減少：鎮(zhèn)痛藥、磺胺類藥的服用；病毒感染；免疫系統(tǒng)衰弱；放化療的影響。2023/2/44實驗原理用特制的微量吸管吸取一定量的血液，經(jīng)稀釋后置于血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室內(nèi)，在顯微鏡下計數(shù)一定體積的血細(xì)胞數(shù)，再將所得的結(jié)果換算成每mm2或1L血液內(nèi)的血細(xì)胞數(shù)。在醫(yī)學(xué)臨床上已使用血細(xì)胞分析儀使血細(xì)胞計數(shù)工作自動化。血細(xì)胞計數(shù)板血細(xì)胞分析儀【方法步驟】2023/2/451、采血和稀釋用移液管吸取3.98mL的白細(xì)胞稀釋液至試管中備用；用酒精棉球消毒采血部位，干燥后，用消毒過的采血針刺破皮膚，使血液流出；第一滴血用干棉球拭去不要，當(dāng)?shù)诙窝e聚較多時，用微量毛細(xì)吸血管準(zhǔn)確吸取血液20μL，擦凈管外粘附的血液，然后將血液輕輕吹入盛有稀釋液的試管底部，并用上清液清洗吸血管2~3次，輕輕搖動試管使血液與稀釋液充分混勻。2023/2/462、血細(xì)胞計數(shù)板的構(gòu)造計數(shù)板為一長方形厚玻璃板，中間有四條平行槽溝，在中間的兩條槽溝之間，有一條橫槽溝，使其構(gòu)成兩個長方形的平臺；平臺幣整個玻璃板的平面低0.1mm，當(dāng)放上一塊蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間的距離為0.1mm；兩平臺中心部分各有一個計數(shù)室，劃分為9個大方格，每個大方格面積為1mm2，體積為0.1mm3，四角的大方格又分為16個中方格，用于白細(xì)胞計數(shù)。計數(shù)室只能用自來水和蒸餾水相繼沖洗，然后用絲絹輕輕拭凈，不能用酒精和乙醚洗滌。洗凈后在低倍鏡下熟悉計數(shù)室的構(gòu)造。2023/2/47血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室放大圖【方法步驟】2023/2/483、計數(shù)方法將計數(shù)室上的蓋玻片放妥并置于顯微鏡上，用潔凈的玻璃棒蘸取少量已稀釋并混勻的血細(xì)胞懸液，在計數(shù)室和蓋玻片交界處一次性滴入計數(shù)室，使之灌滿，滴入計數(shù)室的血細(xì)胞懸液不得過多或過少；靜置2~3min待血細(xì)胞下沉；在低倍鏡下檢查白細(xì)胞分布是否均勻，之后計數(shù)計數(shù)室四角的4個大方格中所有的白細(xì)胞總數(shù)。注意：顯微鏡的載物臺應(yīng)絕對平置，不能傾斜，以免血細(xì)胞一邊集中。光線不必過強?！痉椒ú襟E】2023/2/494、計算加20μL血液于0.38mL白細(xì)胞稀釋液中，血液被稀釋20倍。共計數(shù)4個大方格的白細(xì)胞總數(shù)，一個大方格的容積,0.1mm3，4個方格的總?cè)莘e為0.4mm3；白細(xì)胞數(shù)/mm3=4個大方格的細(xì)胞總數(shù)÷0.4×20。1L=1×106mm3正常值范圍：

成人為（4.0~10.0）×109個/L【注意事項】2023/2/410采血部位消毒后，涂一層凡士林可以使血液成滴便于吸收。吸血時將吸管下端開口放入血液中部，盡量利用毛細(xì)管現(xiàn)象使血液自動進(jìn)入吸管內(nèi)。血液加入試管后，須充分搖勻，動作要輕，避免出現(xiàn)氣泡和破壞血細(xì)胞。細(xì)胞懸液滴入計數(shù)室的液量要適當(dāng)。過多則混懸液溢出并流入兩側(cè)深槽內(nèi)，使蓋玻片浮起，導(dǎo)致計數(shù)不準(zhǔn)。滴入量過少則不能充滿計數(shù)室，反復(fù)充液可能造成計數(shù)室內(nèi)有氣泡，影響計數(shù)室體積，此時應(yīng)洗凈計數(shù)板，干燥后重做。計數(shù)室內(nèi)細(xì)胞分布要均勻。如果發(fā)現(xiàn)各大格的白細(xì)胞數(shù)目相差8個以上，表示血細(xì)胞分布不均勻，應(yīng)重做。所用吸管、試管、計數(shù)板等必須十分干凈，各種稀釋液嚴(yán)防混入雜質(zhì)或有細(xì)菌生長。計數(shù)板等用過之后，必須立即洗滌干凈?！緦嶒瀳蟾鏁鴮懸蟆?023/2/411題目實驗?zāi)康膶嶒炘聿牧显O(shè)備方法步驟實