標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 35901-2018 豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定了用于檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的熒光PCR方法的技術(shù)要求。該標(biāo)準(zhǔn)適用于豬只及相關(guān)樣品中PCV2核酸的定性檢測(cè),為獸醫(yī)診斷、疾病監(jiān)測(cè)及科學(xué)研究提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。
根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),整個(gè)檢測(cè)流程包括樣本采集與處理、核酸提取、引物探針設(shè)計(jì)、反應(yīng)體系構(gòu)建以及結(jié)果分析等步驟。首先,在樣本采集方面,應(yīng)按照規(guī)范操作獲取新鮮或冷凍保存的組織、血液或其他體液樣本,并確保在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過(guò)程中避免污染。其次,通過(guò)合適的商業(yè)化試劑盒或?qū)嶒?yàn)室自建方案從樣本中高效純化出總DNA,以作為后續(xù)擴(kuò)增模板使用。
對(duì)于關(guān)鍵的引物探針設(shè)計(jì)部分,《GB/T 35901-2018》推薦了幾組針對(duì)PCV2保守區(qū)域的高度特異性序列組合,這些序列經(jīng)過(guò)驗(yàn)證能夠準(zhǔn)確識(shí)別目標(biāo)病毒而不與其他常見(jiàn)病原交叉反應(yīng)。此外,還詳細(xì)描述了如何配制含有熱啟動(dòng)Taq酶、dNTPs、MgCl2等成分的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)混合物,以及如何設(shè)置恰當(dāng)?shù)难h(huán)條件來(lái)保證最佳擴(kuò)增效率。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2018-02-06 頒布
- 2018-09-01 實(shí)施
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ICS11220
B41.
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T35901—2018
豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)方法
Real-timePCRmethodfordetectionofporcinecircovirustype2
2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T35901—2018
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所中華
:、、
人民共和國(guó)深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院湖南圣湘生物科技有限公司
、、。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張強(qiáng)李健熊煒童光志趙和平花群義李樹(shù)清楊忠蘋李國(guó)新王巧全
:、、、、、、、、、、
王艷林穎崢蔡開(kāi)妹喻正軍吳紹強(qiáng)林祥梅
、、、、、。
Ⅰ
GB/T35901—2018
豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒型熒光檢測(cè)的操作方法
2PCR。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬圓環(huán)病毒型核酸檢測(cè)
2。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范
GB/T25172
3縮略語(yǔ)
下列縮略語(yǔ)適用于本文件
。
熒光熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
PCR:(real-timepolymerasechainreaction)
Ct值每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)量達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
:(cyclethreshold)
脫氧核糖核酸
DNA:(deoxyribonucleicacid)
Taq酶Taq聚合酶Taq
:DNA(DNApolymerase)
緩沖液緩沖液
TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)
豬圓環(huán)病毒
PCV:(porcinecircovirus)
4儀器設(shè)備
41熒光檢測(cè)儀
.PCR。
42高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)可控溫至離心速度可達(dá)以上
.:4℃、12000r/min。
43普通冰箱
.:2℃~8℃。
44普通冰柜以下
.:-20℃。
45超低溫冰箱可控溫至以下
.:-70℃。
46微量移液器并
.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL、100μL~1000μL,
配備與移液器匹配的吸頭
。
47高壓滅菌鍋
.。
5耗材
51
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