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選擇葡萄沖洗:選擇葡萄沖洗:用清水沖洗葡萄1～2遍除去污物，留意不要反復(fù)多次沖洗，以免洗掉菌種。先沖洗后去枝梗,以免微生物污染果肉。酒精發(fā)酵果酒榨汁：對(duì)發(fā)酵瓶,紗布,榨汁機(jī),盛葡萄汁的器皿等試驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水反復(fù)沖洗幾次,再用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精擦拭消毒，晾干待用醋酸發(fā)酵果醋原理:酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖:C6H12O6+6O2→6CO2+6H20在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵，C6H12O6→2C2H5OH+2C02發(fā)酵條件:18℃一25℃。在缺氧，呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。發(fā)酵裝置發(fā)酵時(shí)間10—12d發(fā)酵檢驗(yàn)：可以檢驗(yàn)酒味,酒精的含量,進(jìn)行酵母菌的鏡檢等工作。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色進(jìn)氣口：先通入氧氣，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖；再密封，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置裝瓶體積為2/3出氣口：及時(shí)排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置，如瓶子，每天要擰松瓶蓋2～4次，進(jìn)行排氣。安裝裝水彎曲玻璃管，可防止雜菌和氧氣進(jìn)入。出料口：取樣檢測(cè)原理：醋酸菌是-種好氧性細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣足夠時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。變酸的酒的表面視察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。試驗(yàn)表明，醋酸菌對(duì)氧氣的含量特殊敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通人氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣,糖源都足夠時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的果糖分解成醋酸,當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿酑2H5OH+02→CH3COOH+H20發(fā)酵條件溫度：30－35℃空氣：足夠的氧發(fā)酵裝置發(fā)酵時(shí)間：7～8d左右發(fā)酵檢驗(yàn)進(jìn)氣口：連接氣泵，輸入氧氣（無菌空氣）出氣口：排氣出料口：取樣檢測(cè)制作流程制作原理:多種微生物參加了豆腐的發(fā)酵如青霉,酵母,曲霉,毛霉等。其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一種絲狀真菌，具有發(fā)達(dá)的白色菌絲。新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。讓豆腐長(zhǎng)出毛霉:將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的溫度限制在15～18℃。傳統(tǒng)腐乳的生產(chǎn)中，豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，而現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在無菌條件下，將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣可以避開其他菌種的污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量加鹽腌制：分層加鹽，并隨層加高而增加鹽量，在瓶口表面鋪鹽厚些。加鹽腌制的時(shí)間約為8天左右。加鹽可以析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會(huì)過早酥爛。同時(shí)，鹽能抑制微生物的生長(zhǎng)，避開豆腐塊腐敗變質(zhì)。加鹵湯裝瓶：將黃酒,米酒和各種香辛料，按口味不同而配制成鹵湯。酒精含量限制在12％左右。加酒可以抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，也具有防腐殺菌的作用。密封腌制制作原理：乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，在無氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。制作流程選擇原料（簇新？）修整洗滌晾曬切分稱取食鹽配置鹽水（比例4：1）泡菜鹽水（煮沸消毒）加調(diào)味料裝壇（留意）發(fā)酵：將壇口水封，防止外界空氣進(jìn)入，進(jìn)行乳酸發(fā)酵。白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。成品測(cè)定亞硝酸鹽含量試驗(yàn)留意事項(xiàng)①鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味。②鹵湯中酒的含量應(yīng)限制在12%左右。酒精含量過高，腐乳成熟的時(shí)間將會(huì)延長(zhǎng)；酒精含量過低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。=3\*GB3③用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。=4\*GB3④裝瓶時(shí)，操作要快速當(dāng)心。整齊地?cái)[放好豆腐,加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水。當(dāng)人體攝入的亞硝酸鹽總量達(dá)到0.3～0.5g時(shí)，會(huì)引起中毒，達(dá)3g時(shí)會(huì)引起死亡。比色法：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，再與N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合生成玫瑰紅色染料。將經(jīng)過反應(yīng)顯色后的待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)液比色，即可估算出樣品中的亞硝酸鹽含量。物理狀態(tài):液體培育基——擴(kuò)大物理狀態(tài):液體培育基——擴(kuò)大培育；固體培育基（凝固劑瓊脂）——微生物分別純化菌落視察計(jì)數(shù)功能：鑒別培育基，選擇培育基——微生物篩選分別純化過程培育培育基分類組成成分：組成成分：培育培育基養(yǎng)分構(gòu)成：一般都含有水,碳源（牛肉膏）,氮源（蛋白胨,牛肉膏）和無機(jī)鹽。還須要滿意微生物生長(zhǎng)對(duì)pH,特殊養(yǎng)分物質(zhì)以及氧的要求制備制備培育基計(jì)算計(jì)算稱量稱量溶化：溶化：連同稱量紙一起放入燒杯。加瓊脂后攪拌防糊底燒杯裂開。調(diào)pH：調(diào)pH：細(xì)菌培育基pH中性或偏堿性，霉菌培育基呈酸性。分裝分裝滅菌滅菌：高壓蒸汽滅菌法，100kPa,121℃維持15～30min，將未接種的培育基在恒溫箱中保溫1～2天。倒平板：倒平板：平板倒置的目的是防止培育皿蓋上的水珠滴落到平板上造成污染；避開水分蒸發(fā)，以利微生物生長(zhǎng)滅菌，消毒：滅菌，消毒：蛋白質(zhì)凝固變性滅菌：滅菌則是指運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。灼燒滅菌法,干熱滅菌法,高壓蒸汽滅菌法(培育基等物體的滅菌)。消毒：消毒指運(yùn)用較為溫柔的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。煮沸消毒法,化學(xué)藥物消毒法,紫外線消毒法接種打算平板劃線法：平板劃線法：第一次劃線（殺死接種環(huán)上原有的微生物，避開污染培育物）及每次劃線（殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目削減）之前和劃線結(jié)束（避開細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者）都須要灼燒接種環(huán)滅菌。平板劃線法為什么要把第一次以后的每一次劃線的起點(diǎn)放在上一次劃線的末端：目的是使每一次劃線后菌體數(shù)目削減，培育之后形成的菌落是由單個(gè)菌體繁殖而成。灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。接種接種稀釋涂布平板法（稀釋涂布平板法（無菌技術(shù)）使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。菌落形態(tài)：形態(tài)菌落形態(tài)：形態(tài),大小,隆起程度和顏色。依據(jù)菌落的特征可以推斷是哪一種菌。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)菌種保藏（1）對(duì)于頻繁運(yùn)用的菌種臨時(shí)保藏的方法：固體斜面培育基上4℃的冰箱中保藏。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種簡(jiǎn)單被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于須要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采納甘油管藏的方法。將1mL培育的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與1mL滅菌甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。結(jié)果尿素分解菌尿素分解菌分別的原理：配制選擇培育基，把尿素作為培育基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)，其他微生物則不能在此培育基上生長(zhǎng)，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成NH3，使培育基堿性增加，pH上升，酚紅指示劑變紅。。原理土壤取樣：土壤取樣：距地表3-8cm樣品稀釋樣品稀釋試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)接種培育：稀釋涂布平板法選擇選擇菌落鑒定鑒定剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理:剛果紅纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理:剛果紅纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培育基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培育基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培育基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透。明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。原理土壤取樣土壤取樣富含纖維素的環(huán)境選擇培育用選擇選擇培育用選擇培育基培育，以增加纖維素分解菌數(shù)量試驗(yàn)設(shè)計(jì)樣品稀釋樣品稀釋接種接種培育將樣品涂布于鑒別培育基上選擇選擇菌落選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落發(fā)酵產(chǎn)酶發(fā)酵產(chǎn)酶試驗(yàn)無菌技術(shù)：獲得純凈培育物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要留意以下幾個(gè)方面：①對(duì)試驗(yàn)操作的空間,操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。

②將用于微生物培育的器皿,接種用具和培育基等器具進(jìn)行滅菌。

③為避開四周環(huán)境中微生物的污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。

④試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸。菌落計(jì)數(shù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推想出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果精確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落。為使結(jié)果接近真實(shí)值，要設(shè)置重復(fù)組，取其平均值?？蓪⑼幌♂尪鹊臉悠方臃N到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布,培育計(jì)算出菌落平均數(shù)。設(shè)置比照可解除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度。專題三植物的組織培育技術(shù)課題1菊花的組織培育原理(全能性)：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的實(shí)力。脫分化：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為脫分化，又叫去分化。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織接著進(jìn)行培育，又可以重新分化成根或芽的過程。愈傷組織：愈傷組織是通過細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化呈無定形態(tài)態(tài)的薄壁細(xì)胞。外植體愈傷組織長(zhǎng)出叢芽生根移栽成活外植體：外植體：植物的種類,材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。簡(jiǎn)單進(jìn)行無性繁殖的植物簡(jiǎn)單進(jìn)行組織培育。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的緣由是嫩枝生理狀態(tài)好，簡(jiǎn)單誘導(dǎo)脫分化和再分化。養(yǎng)分：養(yǎng)分：常用的培育基是MS培育基，其中含有的大量元素是N,P,S,K,Ca,Mg，微量元素是Fe,Mn,B,Zn,Cu,Mo,Cl,Ni,I,Co，有機(jī)物有甘氨酸,煙酸,肌醇,維生素,蔗糖等。MS培育基中還需添加植物激素。激素激素：生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂,脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。二者濃度,運(yùn)用的先后依次,用量的比例等都影響結(jié)果其他條件環(huán)境條件：PH，溫度，光照。其他條件環(huán)境條件：PH，溫度，光照。過程配制配制培育基：1.配置各種母液（大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，維生素等有機(jī)物和激素按1mg/mL單獨(dú)配置），2.配置培育基，3.滅菌（連同其他器械高壓蒸汽滅菌）外植體消毒外植體消毒：流水沖洗后，放入裝有清水的培育皿中，加入少許洗衣粉，用毛筆輕輕刷洗，后用流水沖洗20min，無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入70%的酒精中，輕輕搖動(dòng)2-3次，持續(xù)6-7s，用無菌水漂洗干凈。無菌吸水紙將外植體表面水分吸干，然后放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的HgCl2溶液中浸泡1-2min，取出，用無菌水漂洗至少3次，漂凈消毒液。無菌操作:無菌操作:用70％的酒精消毒工作臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈。留意全部接種工作都必需在酒精燈旁進(jìn)行，器械運(yùn)用前后都要用火焰灼燒滅菌。方向:接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上接種留意方向:接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上接種留意事項(xiàng)培育培育：菊花組培所需PH為5.8，溫度為18-22℃，光照條件為每日用日光燈照耀12小時(shí)。在無菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒移栽,移栽,栽培課題2月季花藥培育一,原理花粉發(fā)育被子植物的花粉的發(fā)育要經(jīng)驗(yàn)

小孢子四分體時(shí)期，單核期和雙核期等階段。

在正常狀況下，一個(gè)小孢子母細(xì)胞可以產(chǎn)生8個(gè)精子；在一枚花藥中可以產(chǎn)生若干個(gè)花粉

單倍體植株產(chǎn)生途徑(取決于激素的種類和配比)花粉花粉花粉胚狀體愈傷組織從芽從芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)二,影響因素影響花粉植株勝利與否和勝利率的主要因素：材料選擇和培育基組成材料選擇

：材料選擇

：親本植株的生理狀況

和生長(zhǎng)條件,材料的低溫預(yù)處理及接種密度等對(duì)誘導(dǎo)勝利率有影響。①從花藥來看，應(yīng)當(dāng)選擇初花期的花藥；②從花粉來看，應(yīng)當(dāng)選擇單核期的花粉。；③從花蕾來看，應(yīng)當(dāng)選擇完全未開放的花蕾。

培育培育基組成：（水）大量元素，微量元素，有機(jī)物，植物激素。三,過程材料選?。哼x擇花藥時(shí)一般通過材料選?。哼x擇花藥時(shí)一般通過鏡檢確定花粉發(fā)育時(shí)期，此時(shí)須要對(duì)花粉細(xì)胞核進(jìn)行染色，最常用的方法是醋酸洋紅。不易著色需采納焙華青—鉻礬法。外植體消毒：外植體消毒：花蕾用V/V為70%的酒精浸泡30秒，無菌水清洗，無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）無菌水沖洗3~5次。接種（1）．剝?nèi)』ㄋ帲合竞蟮幕ɡ伲诮臃N（1）．剝?nèi)』ㄋ帲合竞蟮幕ɡ?，要在無菌條件下除去花萼,花瓣。在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥，否則接種后易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織；還要徹底除去花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（2）．接種花藥：剝?nèi)〉幕ㄋ幰⒓唇臃N到

培育基上，每個(gè)培育瓶接種7—10個(gè)花藥。

培育培育：（1）花藥培育利用的培育基是MS培育基中添加2,4—D,KT,IAA的培育基，pH為

5.8

，溫度為25

℃，幼苗形成之前不須要光照（2）培育20－30d后，花藥開裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體。前者還要轉(zhuǎn)移到分化培育基上進(jìn)行分化培育成再生植株；后者要盡快幼小植株分開并轉(zhuǎn)移到新的培育基上。篩選鑒定：篩選鑒定：通過愈傷組織形成的植株，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)染色體組的數(shù)目的變化，因而須要鑒定和篩選。專題六植物有效成分的提取自然香料的植物,動(dòng)物。不同植物的根,莖,葉,花,果實(shí),種子都可以提取芳香油。芳香油的提取方法：蒸餾（揮發(fā)性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的芳香油）水中蒸餾,水上蒸餾,水汽蒸餾。壓榨：原料不相宜于水中蒸餾，如柑橘,檸檬等易焦糊，有效成分簡(jiǎn)單水解。萃?。悍枷阌鸵兹苡谟袡C(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油品質(zhì)。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分困難，以萜類化合物及其衍生物為主。玫瑰精油的提取玫瑰油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾。蒸餾時(shí)間不能過短，溫度不能過高。鮮玫瑰花+清水（1:4）鮮玫瑰花+清水（1:4）水蒸氣蒸餾水蒸氣蒸餾：蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰冷凝：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的冷凝：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分別，削減玫瑰油揮發(fā)油水混合物油水混合物加入NaCl：加入NaCl：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分別分別油層分別油層分液漏斗分液漏斗分液除水除水加入無水Na2加入無水Na2SO4：：汲取油層中的水分，然后過濾玫瑰油玫瑰油(二)橘皮精油的提取石灰水浸泡：破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),分解果膠。防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼柑橘,檸檬等易焦糊，有效成分石灰水浸泡：破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),分解果膠。防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼漂洗漂洗壓榨：壓榨：小蘇打,硫酸鈉：促進(jìn)油和水的分別（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.25％和5％）過濾過濾：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分別出上層橘皮油。靜置靜置：將橘皮油在5～10℃冰箱中靜置5～7d，分別出上層澄清橘皮油，除去果蠟和水分再次過濾：再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并橘皮油橘皮油(三)胡蘿卜素的提?、?萃取劑的選擇水溶性的：乙醇,丙酮；水不溶性的：石油醚,乙