GB/T 5009.118-2003小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)

ICS67.040C53中華人民共和國國家標準GB/T5009.118一2003代替GB/T14933-1994小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）DeterminationofT-2toxininwheatwithenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA)2003-08-11發(fā)布2004-01-01實施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國國國家標準小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）GB/T5009.118-2003中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337、637874472004年8月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-21534版權(quán)專有浸權(quán)必究舉報電話：010)68533533

GB/T5009.118-2003前本標準代替GB/T14933—1994《小麥中T2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定方法(ELISA))。本標準與GB/T14933—1994相比主要修改如下：-修改了標準的中文名稱.標準中文名稱改為《小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)》：-按GB/T20001.4—2001《標準編寫規(guī)則第4部分：化學分析方法》對原標準的結(jié)構(gòu)進行丁修改。本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口本標準起草單位：衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所本標準主要起草人：陽傳和、羅雪云、計融。原標準于1994年首次發(fā)布，本次為第一次修訂

GB/T5009.118—2003小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）1范圍本標準規(guī)定了小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測定方法(ELISA)本標準適用于小麥及其制品中T2毒素的測定本方法的檢出限為1Pg/kg.第一法間接法2原理將已知抗原吸附在固相載體表面.洗除未吸附抗原.加人一定量抗體與待測試樣(含有抗原)提取液的混合液，竟爭溫育后，在固相載體表面形成抗原-抗體復合物。洗除多余抗體成分·然后加人酶標記的抗球蛋白的第二抗體結(jié)合物,與吸附在固體表面的抗原-抗體復合物相結(jié)合，再加人酶的底物。在酶的催化作用下，底物發(fā)生降解反應.產(chǎn)生有色產(chǎn)物，通過酶標檢測儀.測出酶底物的降解量，從而推知被測試樣中的抗原量。3試劑3.1甲醇。3.2石油醚3.3三氯甲烷。3.4無水乙醉。3.5乙酸乙酯。3.6二甲基甲酰胺、37四甲基聯(lián)茶胺（TMB）3.8吐溫-20。3.930%過氧化氫(30%H.0.)。3.10抗體：雜交瘤細胞系1D7產(chǎn)生的抗「-2毒素的特異性單克隆抗體。3.11抗原：T-2毒素與載體蛋白-牛血清白蛋白(BSA)的結(jié)合物。3.12免抗鼠免疫球蛋白與辣根過氧化酶的結(jié)合物(酶標二抗)。3.13ELISA緩沖液系統(tǒng)。3.13.1包被緩沖液為pH9.6的碳酸鹽緩沖液,稱取1.59g碳酸鈉(NaCO.）.2.93g碳酸氫鈉（NaHCO.），加水稀釋至1000mL。3.13.2洗液為含0.05%吐溫-20的pH7.4的磷酸鹽緩沖液(簡稱為PBS-T)。配制方法為：稱取0.2g磷酸二氫鉀(KH.PO,）.2.9g磷酸氫二鈉(NaHPO,·12H.O).8.0g氯化鈉(NaCl)0.2g氯化鉀(KCl).0.5mL吐溫-20,加水至1000mL.3.13.3底物緩沖液為pH5.0的磷酸-檸檬酸緩沖液，配制方法為：0.1mol/L檸檬酸(C,H.O，·H.O),即稱取檸檬酸19.2g.加水至1000mL,為甲液；0.2mol/L磷酸氫二鈉(Na.HPO,),即稱取磷酸氫二鈉71.7g.加水至1000ml,為乙液；取甲液