實驗五+血液生化指標的測定

血液生化指標的測定實驗五甘平講師

2002年畢業(yè)于上海醫(yī)科大學，獲碩士學位

2002年-今，昆明醫(yī)科大學

2016年，畢業(yè)于云南大學生命科學學院，獲博士學位

2004-2005年，新加坡國立大學醫(yī)學院訪問學者

2009-2010年，葛蘭素史克中國上海研發(fā)中心訪問學者

聯(lián)系方式：

電話qq：1957178100；

郵箱：ganping_yeow@一、實驗目的(ExperimentalObjectives)1.掌握GOD-PAP酶法測定血清葡萄糖的原理和方法；2.掌握脲酶法測定血清尿素氮的原理和方法。3.熟悉分光分析技術的原理、應用及其操作步驟。4.了解血糖及血清尿素氮測定的臨床意義。實驗一GOD-PAP法測定血糖（一）實驗原理

葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫；在過氧化物酶（peroxidase，POD）的催化下，過氧化氫氧化4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine）和酚（phenol）縮合為紅色醌類化合物其最大吸收峰為505nm。紅色醌類化合物的生成量在一定范圍內與葡萄糖含量成正比，與同樣處理的葡萄糖標準液進行比較，即可求得血糖含量。葡萄糖氧化反應（Trinder反應）反應簡式葡萄糖＋O2

＋H2OGOD葡萄糖酸＋H2O2

H2O2

＋4-氨基安替比林＋酚POD

醌亞胺(紅色)＋H2O尿素在脲酶的作用下產(chǎn)生氨離子和二氧化碳，氨離子在堿性介質中與酚顯色劑生成藍色物質，其最大吸收峰為640nm。藍色化合物的吸光度值在一定范圍內與反應體系中的尿素濃度成正比，與同樣處理的尿素標準液作比較，可對血清中的尿素作定量分析。實驗二:脲酶法測定血清尿素反應式CO(NH2)2+H2O→2NH3+CO2材料、主要儀器和試劑（一）材料：血清（二）儀器：722S型分光光度計、恒溫水浴箱、渦旋混勻器（三）試劑：1.葡萄糖測定試劑盒（葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法）實驗材料、主要儀器和試劑

(Equipments,MaterialsandReagents)主要組成成分為：（1）R1：苯酚。（2）R2：磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、4-氨基安替比林、POD、GOD、NaN3。（3）標準液（5.55mmol/L）：1×1ml。三、實驗材料、主要儀器和試劑3.脲酶法測定血清尿素（1）脲酶儲備液及脲酶稀釋液（2）酚顯色劑（3）堿性次氯酸鈉（4）尿素標準液（10mmol/L）操作步驟(OperatingProcedure)

（一）血糖測定1、待測樣品：血清；2、配制工作液:等量混合R1與R2；3、取三支試管，按下表操作：血糖測定操作步驟

4.各管混勻，置37℃水浴15分鐘，于505nm波長處，以空白管調“零”點，測定各管吸光度（A）值。（試劑盒線性范圍：0~28mmol/L）

加入物空白管(B)標準管(S)樣品管(U)

樣本（μl）————15

標準液（μl）——15——

蒸餾水（μl）15————工作液（ml）1.51.5

1.5

血清尿素測定操作步驟1、待測樣品：血清2、取三支試管，按下表操作：

加入物（ml）空白管(B)標準管(S)樣品管(U)

蒸餾水0.02————

尿素標準液——0.02——

待測樣本————0.02

酶緩沖液0.250.250.25

充分混勻，37℃水浴10分鐘酚顯色劑111

堿性次氯酸鈉1113.各試管充分混勻，置37℃水浴中加熱10min，在640nm波長處，用空白管調零，分別測定標準管，測定管吸光度值。血清尿素測定操作步驟五、結果與分析

A測

A標葡萄糖測定尿素測定（一）實驗結果1.吸光度值血糖的結果與分析G(mmol/L)=A標A測×C標(5.55mM)G(mg/dl)=mmol/L

×18空腹血糖的正常范圍：3.9–6.1mmol/L

血糖測定的臨床意義1．正常人的血糖為什么能維持在一定水平?2.在那些情況下需做血糖含量的測定?血清尿素的結果與分析尿素（mmol/L）=

血清尿素正常值：2.9–8.2mmol/LA標A測×C標(10mM)血清尿素測定的臨床意義生理性：高蛋白飲食；年齡增加。病理性：1．血清尿素增加的原因可分為腎前、腎性及腎后三個方面：(1)腎前性：失水引起血液濃縮，導致腎血流量減少，腎小球濾過率降低使血尿素潴留，見于劇烈嘔吐、幽門梗阻、腸梗阻和長期腹瀉等。(2)腎性：急性腎小球腎炎、腎病晚期、腎功能衰竭、慢性腎盂腎炎、腎結核、腎動脈硬化、先天性多囊腎、腎腫瘤所致的尿毒癥等，使腎小球濾過率減少，導致血尿素增高。(3)腎后性：