實驗五+血液生化指標(biāo)的測定

血液生化指標(biāo)的測定實驗五甘平講師

2002年畢業(yè)于上海醫(yī)科大學(xué)，獲碩士學(xué)位

2002年-今，昆明醫(yī)科大學(xué)

2016年，畢業(yè)于云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，獲博士學(xué)位

2004-2005年，新加坡國立大學(xué)醫(yī)學(xué)院訪問學(xué)者

2009-2010年，葛蘭素史克中國上海研發(fā)中心訪問學(xué)者

聯(lián)系方式：

電話qq：1957178100；

郵箱：ganping_yeow@一、實驗?zāi)康?ExperimentalObjectives)1.掌握GOD-PAP酶法測定血清葡萄糖的原理和方法；2.掌握脲酶法測定血清尿素氮的原理和方法。3.熟悉分光分析技術(shù)的原理、應(yīng)用及其操作步驟。4.了解血糖及血清尿素氮測定的臨床意義。實驗一GOD-PAP法測定血糖（一）實驗原理

葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫；在過氧化物酶（peroxidase，POD）的催化下，過氧化氫氧化4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine）和酚（phenol）縮合為紅色醌類化合物其最大吸收峰為505nm。紅色醌類化合物的生成量在一定范圍內(nèi)與葡萄糖含量成正比，與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進行比較，即可求得血糖含量。葡萄糖氧化反應(yīng)（Trinder反應(yīng)）反應(yīng)簡式葡萄糖＋O2

＋H2OGOD葡萄糖酸＋H2O2

H2O2

＋4-氨基安替比林＋酚POD

醌亞胺(紅色)＋H2O尿素在脲酶的作用下產(chǎn)生氨離子和二氧化碳，氨離子在堿性介質(zhì)中與酚顯色劑生成藍色物質(zhì)，其最大吸收峰為640nm。藍色化合物的吸光度值在一定范圍內(nèi)與反應(yīng)體系中的尿素濃度成正比，與同樣處理的尿素標(biāo)準(zhǔn)液作比較，可對血清中的尿素作定量分析。實驗二:脲酶法測定血清尿素反應(yīng)式CO(NH2)2+H2O→2NH3+CO2材料、主要儀器和試劑（一）材料：血清（二）儀器：722S型分光光度計、恒溫水浴箱、渦旋混勻器（三）試劑：1.葡萄糖測定試劑盒（葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法）實驗材料、主要儀器和試劑

(Equipments,MaterialsandReagents)主要組成成分為：（1）R1：苯酚。（2）R2：磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、4-氨基安替比林、POD、GOD、NaN3。（3）標(biāo)準(zhǔn)液（5.55mmol/L）：1×1ml。三、實驗材料、主要儀器和試劑3.脲酶法測定血清尿素（1）脲酶儲備液及脲酶稀釋液（2）酚顯色劑（3）堿性次氯酸鈉（4）尿素標(biāo)準(zhǔn)液（10mmol/L）操作步驟(OperatingProcedure)

（一）血糖測定1、待測樣品：血清；2、配制工作液:等量混合R1與R2；3、取三支試管，按下表操作：血糖測定操作步驟

4.各管混勻，置37℃水浴15分鐘，于505nm波長處，以空白管調(diào)“零”點，測定各管吸光度（A）值。（試劑盒線性范圍：0~28mmol/L）

加入物空白管(B)標(biāo)準(zhǔn)管(S)樣品管(U)

樣本（μl）————15

標(biāo)準(zhǔn)液（μl）——15——

蒸餾水（μl）15————工作液（ml）1.51.5

1.5

血清尿素測定操作步驟1、待測樣品：血清2、取三支試管，按下表操作：

加入物（ml）空白管(B)標(biāo)準(zhǔn)管(S)樣品管(U)

蒸餾水0.02————

尿素標(biāo)準(zhǔn)液——0.02——

待測樣本————0.02

酶緩沖液0.250.250.25

充分混勻，37℃水浴10分鐘酚顯色劑111

堿性次氯酸鈉1113.各試管充分混勻，置37℃水浴中加熱10min，在640nm波長處，用空白管調(diào)零，分別測定標(biāo)準(zhǔn)管，測定管吸光度值。血清尿素測定操作步驟五、結(jié)果與分析

A測

A標(biāo)葡萄糖測定尿素測定（一）實驗結(jié)果1.吸光度值血糖的結(jié)果與分析G(mmol/L)=A標(biāo)A測×C標(biāo)(5.55mM)G(mg/dl)=mmol/L

×18空腹血糖的正常范圍：3.9–6.1mmol/L

血糖測定的臨床意義1．正常人的血糖為什么能維持在一定水平?2.在那些情況下需做血糖含量的測定?血清尿素的結(jié)果與分析尿素（mmol/L）=

血清尿素正常值：2.9–8.2mmol/LA標(biāo)A測×C標(biāo)(10mM)血清尿素測定的臨床意義生理性：高蛋白飲食；年齡增加。病理性：1．血清尿素增加的原因可分為腎前、腎性及腎后三個方面：(1)腎前性：失水引起血液濃縮，導(dǎo)致腎血流量減少，腎小球濾過率降低使血尿素潴留，見于劇烈嘔吐、幽門梗阻、腸梗阻和長期腹瀉等。(2)腎性：急性腎小球腎炎、腎病晚期、腎功能衰竭、慢性腎盂腎炎、腎結(jié)核、腎動脈硬化、先天性多囊腎、腎腫瘤所致的尿毒癥等，使腎小球濾過率減少，導(dǎo)致血尿素增高。(3)腎后性：