電融合儀操作手冊

Multiporator?電轉(zhuǎn)化儀使用說明書1目 錄簡介 1\l“_TOC_250001“應用范1\l“_TOC_250000“安全警1儀器介紹包裝 24.2開頭………………4.3電擊杯插槽……………………4.4鍵區(qū)………………4.5鍵及鍵組合………………………4.6屏幕顯示…………4.7真核細胞和細菌／酵母的電轉(zhuǎn)化………………4.7.1連接外接電極〔電轉(zhuǎn)化/電融合〕插件……4.8細胞融合〔可選擇〕……………4.8.1優(yōu)化細胞融合〔鏡下監(jiān)測〕………………4.8.2清洗微融合杯………………4.8.3螺旋融合杯…………………4.8.4螺旋融合杯的上樣及置入…………………4.8.5融合及細胞懸液提取…………4.8.6螺旋融合杯的清洗和消毒…………………4.9打印連接／打印機〔可選擇〕…………………操作模式5.1真核細胞模式……………………5.2細菌和酵母模式〔可選擇〕……………………5.3細胞融合模式〔可選擇〕………5.3.1功能：細胞排列………………5.3.2細胞融合步驟…………………6……………7儀器的維護7.1消毒………………7.2清洗………………8……………9…………23簡介Multiporator?為真核細胞的電轉(zhuǎn)染而設計，由于由有多種模式可選，也可進展細胞融合試驗以及細菌和酵母的電轉(zhuǎn)試驗。該操作手冊包括該儀器的全部使用說明。Multiporator?的最大特點在于儀器內(nèi)部可以自動計算放電曲線從而維持真核細胞電轉(zhuǎn)化和細胞融合的參數(shù)。4應用范圍儀器的安全規(guī)章和工業(yè)的標準，儀器應用必需符合以下規(guī)定：――僅限于細胞技術(shù)領域的試驗應用應用范圍包括酵母、細菌和細胞的電轉(zhuǎn)化及細胞融合。――請使用Eppendorf的原裝零配件只能使用原始零配件。原裝零配件特地為保證Multiporator?的最正確性能所設計，在制造商的推舉下也可使用其他裝置。因使用儀器不當或承受非制造商推舉的配置造成的損壞，Eppendorf不擔當任何責任。5安全警示考慮到個人安全，必需留意以下幾點！認真閱讀操作手冊中的操作規(guī)程。必需遵守手冊中的規(guī)程！僅使用含有接地點的電源！使用Multiporator?儀器之前請保證使用正確電壓的電源！儀器應由授權(quán)的專業(yè)人員翻開！儀器內(nèi)可能有高壓。不要在暴露環(huán)境中拆開儀器！不要讓任何液體進入儀器或電擊杯座！該儀器僅限于體外試驗使用！僅限于儀器說明所供給范圍的使用。不要將其他未經(jīng)EppendorfAG成認的零部件、工具或物體放入電擊杯座，有高電壓！僅使用所列零部件。經(jīng)過EppendorfAG成認，并獲得安全證明其他零件也可使用。未在該操作手冊中提及的線路連接須事先得到制造商的允許。螺旋融合杯必需留神操作處理！松散或損壞的電極會對試驗操作造成較大程度的影響。在這種狀況下，螺旋融合杯不能使用！在融合過程為完畢前，不要翻開螺旋融合杯。微融合腔杯必需留神操作處理！留神參加細胞懸液！不要用槍頭觸及或移動電極以免造成損壞！在細胞排列／融合過程中，避開和電極的直接接觸！只有當微融合腔杯連接后才可進展細胞排列／融合！連接電線僅為微融合腔杯的連接所設計！不允許有其他連接！不要將插頭接觸液體！當該儀器被非EppendorfEppendorfAG對上述行為所造成的損壞不負任何責任。上述狀況不會影響作為EppendorfAG的銷售和運輸中保修和責任商定！在未得到EppendorfAG書面允許狀況下，操作手冊的任何內(nèi)容不能以任何形式進展復制。EppendorfAG保存對該產(chǎn)品的技術(shù)更改權(quán)力！67儀器介紹該產(chǎn)品有四種不同層次的型號：最根本的是供真核細胞電轉(zhuǎn)染所用。可以升級為用于細次。Multiporator?具有簡易直觀的鍵區(qū)和視屏界面，并且電擊杯的插槽就位于鍵區(qū)的旁邊。1：Multiporator?儀器，前面觀。8包裝根本配置：可進展真核細胞電轉(zhuǎn)染的Multiporato儀器〔包括主要電線電擊杯座；電擊杯〔2m／4電轉(zhuǎn)染低滲和等滲緩沖液；操作手冊和根本應用手冊。選擇“細菌模式”配置：整合有細菌模式的根本裝置；額外的電擊杯〔電極間距為1m。選擇“細胞融合模式”配置：整合有細胞融合模式的根本裝置；螺旋融合杯〔電極間距為0.2螺旋融合杯插槽；微融合杯〔0.2mm〕和專用插槽；低滲和等滲細胞融合緩沖液。選擇“融合和細菌模式”配置：整合有融合和細菌模式的根本裝置。9開頭Multiporator?電源插座在，保險絲，電源開關在儀器前方。將電源插入儀器前方的插座，再接好電源即可。撳一下電源開關即翻開了儀器。2：Multiporator?儀器，后面觀。電源連接口〔左〕打印機連接口〔右〕電擊杯座電擊杯座位于儀器正面的鍵區(qū)旁邊。將電擊杯座拔出后即可取出電擊杯。插入的電擊杯器可檢測杯座是否有電擊杯。在搬運儀器時，確保電擊杯中沒有電擊杯，或者單獨搬運電擊杯座。有專用于“細胞融合”融合杯插槽。10鍵區(qū)鍵區(qū)用于設置參數(shù)、選擇電轉(zhuǎn)模式以及啟動電轉(zhuǎn)化。依據(jù)儀器的模式層次，一至四種模式可供選擇。鍵組合不僅可用于設置聲音信號凹凸的設置，也可設置日期和時間。3.帶鍵區(qū)和屏幕的掌握面板鍵及鍵組合SETSET鍵用于選擇預定的參數(shù)。屏幕中此參數(shù)有下劃線標識。撳動SET鍵適宜的次數(shù)，可SETMODE或START按鈕均可完畢SET〔留意：MODE鍵可轉(zhuǎn)入另一個模式〕上下箭頭鍵可進展參會跳到最低值。MODEMODE即包括真核細胞模式在內(nèi)最多有三種模式可供選擇。相關符號消滅在屏幕上：11⊙：真核細胞的模式模式水平：根本使用脈沖：指數(shù)衰減波○：細菌和酵母的模式模式水平：細菌模式使用脈沖：指數(shù)衰減波：細胞融合的模式模式水平：融合模式使用脈沖：方波脈沖12START撳動SATRT按鈕即啟動程序操作。Arrowkeys箭頭鍵用于轉(zhuǎn)變預設的參數(shù)〔下劃線標識。SettingthedateSETMODE按鈕即可進入日期和時間的設置狀態(tài)。再次撳動SET按鈕，屏幕上日期和時間的下劃線會從左移至右，然后用上下箭頭鍵進展改動。重復撳動SET鍵直到屏幕上的下劃線消逝即完畢日期和時間的設定。或者撳動MODESTART〔留意：MODE鍵可轉(zhuǎn)入另一個模式〕Settingthevolumeoftheacousticsignals同時撳動MODE和START鍵即可進入聲音信號音量的調(diào)整狀態(tài)。在屏幕的最底部消滅”VOLUME”以及百分比數(shù)值。百分比數(shù)值表示音量凹凸和音調(diào)類型，轉(zhuǎn)變上下箭頭鍵可以轉(zhuǎn)變音量和音調(diào)。撳動SET、MODE、或START按鈕即可完畢聲音的設定〔留意：MODE鍵可轉(zhuǎn)入另一個〕“VOLUME”即從屏幕上消逝。Reset關閉電源總開關即完畢了試驗，Reset鍵與電源總開關功能全都。13屏幕顯示24而日期和時間地消滅在第一行。選擇的模式以一個符號消滅在最低行的右側(cè)：⊙：真核細胞的模式模式水平：根本○：細菌和酵母的模式模式水平：細菌模式：細胞融合的模式模式水平：融合模式“VOLUME”或試驗剩余時間同樣消滅在這一行。圖：設置提示信號音量屏顯試驗中和試驗完畢后，屏幕轉(zhuǎn)為顯示該次試驗設置的相關信息。真核細胞和細菌／酵母的電轉(zhuǎn)化試驗承受一次性的電擊杯，生物學樣品放在電極間的縫隙中。樣品體積遵照電擊杯上的標示體積。雖然電極上的液體不會明顯影響試驗，但總體效率會下降。電擊杯的磨砂窗可供作記號。電擊杯的塑料突起可保證杯子按正確方向插入電擊杯座中。杯蓋可蓋住杯子。但是，安全方向，以免樣品漏出。4：電擊杯的構(gòu)造圖抓住突出把手取出電擊杯。加樣后電擊杯中不能有氣泡。完全插好電擊杯的轉(zhuǎn)化槽才可插至儀器底部進展試驗。14轉(zhuǎn)化槽可儲存于低溫環(huán)境中。在搬運儀器途中，請留意沒有電擊杯的轉(zhuǎn)化槽會從儀器中滑落。連接外接電極〔電轉(zhuǎn)化／電融合〕的插件非標準零部件〔見訂購信息〕含有一個插件，連接外接電極。轉(zhuǎn)變功能鍵〔P/F〕的位置，插件可連接外接電極進展電轉(zhuǎn)化〔符號：⊙〕和細胞融合〔符號：。4mm安全插頭連接外接電極。連接插座，火線〔紅色〕連接插座，地線〔黑色〕當用外接電極進展細胞電融合試驗時，由于插頭連接，一個50歐姆的電阻與電極并聯(lián)。用者必需對全部連接的設備負責！細胞融合〔可選擇〕優(yōu)化細胞融合〔鏡下監(jiān)測〕為了優(yōu)化細胞融合參數(shù)，有必要借助特別的微融合杯在顯微鏡下觀看監(jiān)測細胞排列和融合。微融合杯通過專用的連接線〔將近1米長〕與微融合插口相連。輕拿輕放微融合杯！留神加好細胞懸液！不要用槍頭觸及或移動電極，防止損壞！細行！――微融合杯緊緊連接Multiporator?。――將微融合杯〔50ul的細胞懸液〕放在顯微鏡下。在電極四周留神滴加細胞懸液增加電極間的細胞數(shù)。――夾片可以在顯微鏡平臺上固定微融合杯，也可用于固定玻片。15――將微融合杯和專用連接線連接起來。――聚焦電極和細胞。――撳動START按鈕按預先設定的參數(shù)進展細胞排列／融合?？梢栽阽R下加以監(jiān)測。200ul。已經(jīng)確定的參數(shù)可直接用于螺旋融合杯。清洗微融合杯用洗瓶中的雙蒸水沖洗微融合杯內(nèi)部〔清洗過程中必需保持電極間距不變〕70％酒精清洗以加速枯燥過程。螺旋融合杯大量細胞的融合可承受螺旋融合杯。螺旋融合杯的構(gòu)造螺旋融合杯由一個杯子和一個由并列斷裂鉑絲圍繞的中心部件兩局部組成。鉑絲即為電250ul的樣品。螺旋融合杯通過共軸的接頭與融合插口相連。16斷裂鉑絲電極間距大約為200μ。5：鏡下螺旋融合杯電極觀留神處理螺旋融合杯！松動或損壞電極會極大影響操作程序，這種狀況下杯不能使用！螺旋融合杯的上樣及置入螺旋融合杯可容納250ul潮濕，否則會負面影響樣品參加螺旋融合杯中。氣泡也會降低試驗的效率。細胞懸液被迫上升。擰緊核心時，確保沒有氣泡形成。直到融合完成前，保證螺旋融合杯豎直放置在共軸連接器上！17融合及細胞懸液提取――將融合插入槽穩(wěn)定地插入儀器中。――將密封好的螺旋融合杯連接到融合共軸插口上，旋轉(zhuǎn)90度后鎖緊。――按預先設定的參數(shù)進展融合〔見5.3局部。――90度松動后取下螺旋融合杯。――垂直方向留神翻開腔室。――留神擰開核心。――用小量適當?shù)呐嘤聪潞诵纳险掣降募毎麘乙?。――杯中的細胞懸液和洗下的懸液收集后按需要作進一步處理。螺旋融合杯的清洗和消毒防止細胞和緩沖液干后粘附，需在試驗后用去離子水清洗杯子和核心。假設污染嚴峻，必需用超聲〔可能的話用EdisoniteSuper〕干凈螺旋融合杯，或者用格外絲電極會導致螺旋融合杯不能使用。用70％酒精清洗消毒。清洗后豎直放在無菌無灰的環(huán)境中枯燥，枯燥后螺旋融合杯可重復使用。打印連接／打印機〔可選擇〕Multiporator?可輸出每個試驗打印報告。打印報告不僅含有設定的參數(shù)以及試驗的日期和時間，還可列出緩沖液、濃度、細胞株等其他的數(shù)據(jù)信息。出錯時，出錯信息也會被打印出來。不同打印應用例子列舉如下：18串聯(lián)打印機可以接于儀器前方的打印機接口。也可通過PC閱讀全部的試驗數(shù)據(jù)，這需要一個無調(diào)制解調(diào)器的線纜〔9-in插槽，貨號：0013610.525〕EppendorfAG供給以下熱敏打印機。為兼容IBM打印機的DIP轉(zhuǎn)換裝置也列舉如下：1920操作模式真核細胞模式這種模式的符號為⊙。――設定參數(shù)――依據(jù)需要，撳MODE鍵轉(zhuǎn)入真核細胞狀態(tài)。――SET鍵選擇預設參數(shù)〔選擇的參數(shù)會有下劃線消滅。――用上下箭頭鍵按要求改動參數(shù)的大小。――依據(jù)需要撳SET鍵和箭頭修改其他參數(shù)。――停頓參數(shù)設定，當時設定的參數(shù)有效，不必儲存。真核細胞電轉(zhuǎn)化模式屏顯舉例。相關參數(shù)以大斜體形式消滅。U：電壓，單位：V?？梢?V20-100V范圍內(nèi)增減；或者以10v20—100V范圍內(nèi)增減，以100V增幅在1,000—1,200V范圍內(nèi)增減。τ：時間，單位：us〔微秒?？梢?us增幅在15—500us范圍內(nèi)增減。n：1991分鐘。輸入的參數(shù)自行維持放電曲線〔指數(shù)衰減曲線。融合模式應用的是方波脈沖〔見5.4局部。――開頭電轉(zhuǎn)化――START鍵開頭電轉(zhuǎn)化。――“Charge”〔充電〕消滅在屏幕 第三行。――充電過程完畢后，開頭放電過程，屏幕第三行會有一個閃動加以提示。――假設設定了多于一個的脈沖，“Wait”和剩余時間將消滅在屏幕上。21試驗完畢后，儀器會發(fā)出兩聲提示，屏幕回復到預先設定和已使用的界面。從試驗完畢開頭的延長時間會以分秒的形式消滅在最底行，超過99分鐘或撳動任何按鈕，這個信息會從屏幕上消逝。細菌和酵母模式〔可選擇〕這種模式的符號為○。――設定/修改參數(shù)――依據(jù)需要，撳MODE鍵轉(zhuǎn)入細菌和酵母操作狀態(tài)。――SET鍵選擇預設電壓〔U〕參數(shù)〔選擇的參數(shù)會有下劃線消滅。――用上下箭頭鍵按要求改動參數(shù)的大小。――停頓參數(shù)設定，當時設定的參數(shù)有效，不必儲存。細菌和酵母電轉(zhuǎn)化模式屏顯舉例。相關參數(shù)以大斜體形式消滅。U：電壓，單位：V10V200-1000V100v1000—2500V范圍內(nèi)增減。τ：連續(xù)時間，單位：ms〔毫秒5.0ms。――開頭電轉(zhuǎn)化――START鍵開頭電轉(zhuǎn)化。――“Charge”(充電消滅在屏幕第三 行。――Uaτa消滅在屏幕第三行。Ua：實際測量的使用電壓，單位：伏特〔V〕a：實際使用脈沖時間，單位：ms〔毫秒，時間s記為0.8ms。從試驗完畢開頭的延長時間會以分秒的形式消滅在最底行，超過99分鐘或撳動任何按鈕，這個信息會從屏幕上消逝。22細胞融合模式〔可選擇〕功能：細胞排列細胞排列功能分別在屏幕其次行和第四行以符號U~〔脈沖前〕和U~〔脈沖后〕表示。――設定參數(shù)――依據(jù)需要，撳MODE鍵轉(zhuǎn)入細胞融合狀態(tài)。――SET鍵選擇預設參數(shù)〔選擇的參數(shù)會有下劃線消滅。U／U參數(shù)設為0這樣使得U~／U~可單獨或依次激活而不需要激活融合脈沖。――停頓參數(shù)設定，當時設定的參數(shù)有效，不必儲存。不激活脈沖U和U~激活，以U~進展細胞排列屏顯舉例。相關參數(shù)以大斜體形式消滅。U~／U~：溝通電壓，單位：V0V0.1V1.0-10V范圍內(nèi)增減。t：排列持續(xù)時間，單位：s〔秒5s0—95s范圍內(nèi)增減。U：電壓〔方波脈沖?？梢栽O為1V增幅在5-100V10V100-300V范圍內(nèi)增減。t：脈沖持續(xù)時間，單位：us〔微秒5us0-30us增減。n99次。――開頭細胞排列――撳START鍵觸發(fā)細胞排列電壓 U~。――“ ”消滅在屏幕第四行，溝通電壓作用。試驗完畢后，儀器會發(fā)出兩聲提示，屏幕回復到預先設定和已使用的界面。從試驗完畢開頭的延長時間會以分秒的形式消滅在最底行，超過99分鐘或撳任何按鈕，這個信息會從屏幕上消逝。細胞融合步驟――設定/轉(zhuǎn)變參數(shù)――SET鍵選擇預設參數(shù)〔選擇的參數(shù)會有下劃線消滅。――用上下箭頭鍵按預先要求改動參數(shù)大小。依據(jù)選擇的參數(shù)U~和U~／融合可以在無細胞排列的狀況下進展，也可與一個或兩個選擇的排列功能結(jié)合進展。――停頓參數(shù)設定，當時設定的參數(shù)有效，不必儲存。23具有U~／U~激活細胞排列的電融合模式屏顯舉例。無排列電壓脈沖U~細胞融合模式屏顯舉例。相關參數(shù)以大斜體形式消滅。U：電壓，單位：V010V5—100V10V增100—300V范圍內(nèi)增減。t：脈沖持續(xù)時間，單位：us〔微秒5us0—300us范圍內(nèi)增減。U~／U~：溝通電壓，單位：V00.1V1.0—10V范圍內(nèi)增減。n99次。――開頭細胞融合――START鍵觸發(fā)細胞融合。――“Charge”――執(zhí)行操作期間溝通電壓U~作用，溝通電壓以符號～表示〔正弦波。――細胞排列時間〔0－95秒〕后即開頭放電，這時會在屏幕第四行有個閃動。假設設定的次n11秒后會再次執(zhí)行放電。――放電完畢后，溝通電壓U

作用－99秒，整個試驗所剩時間顯示在屏幕最底行?！囼炌戤吅?，儀器會發(fā)出兩聲提示，屏幕回復到預先設定和已使用的菜單界面。從試驗完畢開頭的延長時間會以分秒的形式消滅在最底行，超過9分鐘或撳任何按鈕，這個信息會從屏幕上消逝。24~ 當U／U設為0~ 錯誤提示出錯時，Multiporator?儀器會發(fā)出鳴聲提示，屏幕上也會消滅錯誤提示或通過打印機打印1－4，9可能發(fā)生于細菌模式試驗，1－7可能發(fā)生于真核細胞模式，錯誤1－8發(fā)生于細胞融合試驗。編碼 錯誤信息NoDisplayNoRTC/NVRAMHighCurrentNoCuvetteTimeoutCharge

緣由顯示器壞了儀器內(nèi)時鐘的電子有問題在放電過程電流太高未插入電擊杯在安排的時間內(nèi)電容分壓器不能工作

解決方法與供給商聯(lián)系。與供給商聯(lián)系。降低使用溶液的傳導性；檢查選用的電擊杯是否正確。插入電擊杯；重啟動儀器；將電擊杯槽插到底。與供給商聯(lián)系。06070809細菌模式

TimeoutCharge 在兩個脈沖間無法工作Shortτ τ是否能執(zhí)行。元件的有限性在于電容分壓器而不是脈沖調(diào)整器。LowResistance 電壓。Timeout Measuring 細菌模式中τ測量終止ττa=0.8 ms, Ua is ――電擊杯中有火花considerably lowerthantheparameterU ――在放電過程電流太高whichhasbeenset.

降低使用溶液的傳導性；檢查選用的電擊杯是否正確。降低使用溶液的傳導性；檢查選用的電擊杯是否正確。降低使用溶液的傳導性。與供給商聯(lián)系。――使用電極間距較大的電擊杯。――降低使用溶液的傳導性。――技術(shù)錯誤 ――與供給商聯(lián)系。儀器的維護儀器不需要常常維護，儀器經(jīng)銷商負責保修和售后效勞。消毒消毒前首先切斷電源。Multiporator?儀器全部局部，包括零部件和連接線必需擦拭消毒。內(nèi)部。清洗清洗Multiporator?儀器前切斷電源。保證沒有液體進入儀器，防止造成電路短路和儀器腐蝕。用嚴峻清潔劑擦拭噴漆和鋁制部位，然后用干布擦干。制止使用任何具有腐蝕性、有機的或摩擦性的去污劑或上光劑。25技術(shù)數(shù)據(jù)電壓/頻率: 100-240V10%,50-60Hz保險: T0,1.0A-5*20mm(2pcs)功率: 60W過壓類型: II保護級別: I污染程度: 2以下模式電壓范圍:真核模式: 1,000-1,200V,100V1分鐘細胞融合: 兩次脈沖間隔:1秒溝通電壓: V,增幅0.1V細菌: V,增幅10V100V無屢次沖電容: 10uF,2,500V脈沖放電電阻: 600并聯(lián)56s串聯(lián)充電時間: 30秒脈沖次數(shù)(n): 0-99放電時間:真核細胞: 15-500us,增幅5us,指數(shù)衰減波細菌: 默認5ms,帶一3.3k0.8-6.0ms排列時間: 0-95s,增幅5s脈沖時間:細胞融合: 0-300us,增幅5us,方波RS232接口環(huán)境溫度: 最高40℃相對濕度: 最大.80%重量: 最多5.5kg(依儀器模式而定〕大小: 寬:25.2cm深:34.2cm高:12.0cm該儀器經(jīng) 認證并由UL和CSA授權(quán)cUL:E15808。訂購信息名目號4308000.015 Multiporator?basicversion,foreukaryoticcells,100-240V,50-60Hz264308000.023Multiporator?,eukaryoticcells,andmodificationlevel“bacteriamode”4308000.031Multiporator?,eukaryoticcellsandmodificationlevel“cellfusion”4308000.040Multiporator?,eukaryoticcellsandmodificationlevel“bacteriamode”and“cellfusion”附件緩沖液4308070.501Hypo-osmolarbufferforelectroporation(PH),100ml4308070.510Iso-osmolarbufferforelectroporation(PI),100ml4308070.528Hypo-osmolarbufferforcellfusion(FH),100ml4308070.536Iso-osmolarbufferforcellfusion(FI),100ml電擊杯4307000.5691mmgapwidth,aluminum,sterile,50pcs.4307000.5932mmgapwidth,aluminum,sterile,50pcs.4307000.6234mmgapwidth,aluminum,sterile,50pc