選修3課件：222《動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體》

專題2細(xì)胞工程2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體掌握動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別和聯(lián)系。2.簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體制備的過(guò)程。3.了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用，并說(shuō)出其應(yīng)用實(shí)例。

通過(guò)復(fù)習(xí)植物體細(xì)胞雜交導(dǎo)入新課；首先直接闡明動(dòng)物細(xì)胞融合的概念，再提出動(dòng)物細(xì)胞融合的原理和誘導(dǎo)因素是什么？進(jìn)入相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的學(xué)習(xí)；接著由出動(dòng)物細(xì)胞融合的意義引出單克隆抗體的制備，通過(guò)讓學(xué)生閱讀資料，找出單克隆抗體的概念，再通觀看視頻讓學(xué)生對(duì)單克隆抗體的制備過(guò)程有一個(gè)初步的印象，然后結(jié)合教材上的圖片，對(duì)該過(guò)程進(jìn)行歸納和整理；接著講述單克隆抗體的有點(diǎn)和應(yīng)用；最后通過(guò)課堂總結(jié)及課堂檢測(cè)，完善內(nèi)化課堂知識(shí)。通過(guò)視頻展示單克隆抗體的制備過(guò)程，并結(jié)合形象的圖片對(duì)單克隆抗體的制備過(guò)程進(jìn)行分解和整理，加深學(xué)生對(duì)兩次篩選的目的以及單克隆抗體和雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)進(jìn)行區(qū)分，以此來(lái)突破單克隆抗體的制備這一重點(diǎn)和難點(diǎn)。雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性

細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合

受精作用

動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞

滅活的病毒有絲分裂兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞3.誘導(dǎo)方法：物理法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)

滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。4.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念。

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。用單個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞進(jìn)行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。提示1：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。提示3：有什么方法能使一個(gè)細(xì)胞同時(shí)具備產(chǎn)生抗體的能力和無(wú)限增殖能力呢？一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體

既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)單克隆抗體的制備過(guò)程雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體二、單克隆抗體的制備1.單克隆抗體的制備過(guò)程3.為何要進(jìn)行兩次篩選？4.如何進(jìn)行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞。第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。1.本過(guò)程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2.為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。2.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：3.單克隆抗體的應(yīng)用特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用

具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。兩個(gè)“過(guò)程”動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)重點(diǎn)1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）

A．動(dòng)物細(xì)胞融合

B．胚胎移植

C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D．核移植Ｃ２．在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的 B．雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同C．操作過(guò)程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ３.單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③CB體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案：（2）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？（4）圖中B為

過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承

的遺傳特性，既能

，又能