血清型1培訓(xùn)資料

血清型1血清型的概念人類某些血清蛋白具有遺傳多態(tài)性，表型有個(gè)體差異，稱為血清型（serumtypes。血清型也稱為血清蛋白的多態(tài)性或遺傳標(biāo)記。血清型的發(fā)展

人們對(duì)免疫球蛋白型的研究較為深入。研究發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和功能，是血清蛋白質(zhì)中多態(tài)性最多的一種蛋白質(zhì)。 正常人的免疫球蛋白很不均一，難以研究分析其抗體結(jié)構(gòu)。采用電泳（淀粉電泳、丙烯酰胺電泳）和免疫學(xué)方法（免疫擴(kuò)散，血凝抑制）及免疫電泳相結(jié)合的方法，以檢出的血清蛋白型有觸珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、低密度脂蛋白等21個(gè)系統(tǒng)，137個(gè)抗原。免疫球蛋白人類免疫球蛋白已知有三類同種異型：Gm，Am和Km。免疫球蛋白同種異型遺傳標(biāo)記同種異型遺傳標(biāo)記是位于免疫球蛋白上反應(yīng)個(gè)體差異的遺傳標(biāo)記。一、免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)與分類氨基端羧基端

IgG(γ鏈）、IgA（α鏈）、IgM（μ鏈）、IgD（δ鏈）、IgE（ε鏈）

人類Ig根據(jù)其重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)和抗原特異性的不同，分為五類：根據(jù)IgG重鏈恒定區(qū)氨基酸排列不同及二硫鍵的數(shù)目和位置不同將IgG進(jìn)一步分為四個(gè)亞類:IgG1、IgG2、IgG3、IgG4根據(jù)輕鏈恒定區(qū)的不同可分為兩型：κ型和λ型二、Gm型與Km型的命名位于IgG1、IgG2、IgG3、IgA、IgE及κ輕鏈上的同種異型遺傳標(biāo)記分別以符號(hào)G1m、G2m、G3m、Am、Em、Km代表Ｇｍ同種異型Gm（Gammamarker）為IgG表現(xiàn)出來(lái)的同種異型。Gm同種異型的抗原性已發(fā)現(xiàn)三十種左右，分別表現(xiàn)在gamma鏈上。Gm系統(tǒng)中每對(duì)因子遺傳位點(diǎn)無(wú)基因內(nèi)組合，呈緊密連鎖的單倍型。Gm單體型在不同的種族人群中表現(xiàn)各異，人種差別較大。在我國(guó)漢族和其他少數(shù)民族單倍體基因型和單倍型表現(xiàn)不一。

由于各群體調(diào)查Gm因子的種類及個(gè)數(shù)不同，因而Gm因子單倍型中組合數(shù)目多寡也不同存在于IgG2亞類上的G2m(23）因子最早由Kunkel等發(fā)現(xiàn)。以后的研究表明，G2m(23）因子的分布有以下特點(diǎn)：(1)它是人類IgG2上唯一可檢出的同種異型遺傳標(biāo)記;(2)在黑人中，G2m(23）因子極少存在，故它是識(shí)別人種非“非洲來(lái)源”的重要標(biāo)記；(3）除人類外，它幾乎不存在于其他靈長(zhǎng)類動(dòng)物，提示它具有高度的種屬特異性。因此，G2m(23)因子作為人類免疫系統(tǒng)的特征，可用于研究人類進(jìn)化、種族特征、基因流動(dòng)以及自然選擇對(duì)人類免疫系統(tǒng)的作用等。Gm型的遺傳通過(guò)對(duì)Gm因子的廣泛群體遺傳學(xué)及家系調(diào)查，證實(shí)Gm因子的遺傳方式為常染色體共顯性單倍型遺傳。

抗Gm抗體的產(chǎn)生輸血：尤其是兒童患者，經(jīng)多次輸血后常?？蓽y(cè)到可識(shí)別特異性的抗體。在成人，至少經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的刺激,才能產(chǎn)生抗體。在經(jīng)產(chǎn)婦,單獨(dú)一次注射免疫球蛋白,不可能增加針對(duì)免疫球蛋白的抗體；妊娠：曾在孕婦中檢測(cè)到抗G1m（1）,后來(lái)她的嬰兒證實(shí)為G1m（1）。臍血血清中含有少量（1%或更少）的內(nèi)源性IgG,當(dāng)嬰兒的所載有的IgG決定簇與母親不同時(shí),母親即被免疫；嬰兒對(duì)母親IgG同種異型的免疫應(yīng)答吳國(guó)光等曾對(duì)上海2萬(wàn)名獻(xiàn)血者進(jìn)行抗Gm抗體檢測(cè)，共檢測(cè)出抗Gm抗體陽(yáng)性標(biāo)本9份，檢出率為0.045%；抗Gm抗體雖然可能引起輸血過(guò)敏反應(yīng)等，但反應(yīng)較輕微，因此輸血中無(wú)需常規(guī)檢測(cè)抗Gm。Am同種異型屬于IgA表現(xiàn)出來(lái)的同種異型。Am抗原存在于Alpha2重鏈的恒定區(qū)，例如IgA2亞型有A2m（1）和A2m（2）兩種同種異型，受控于兩個(gè)等位基因。二者在白人、黑人和黃種人中分布都不相同。臨床上IgA缺乏癥患者或少數(shù)IgA含量正?；颊咭蚨啻屋斞僧a(chǎn)生抗IgA抗體。體內(nèi)含有IgA抗體的患者輸注含有IgA的血液或制品時(shí)可發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致休克，甚至死亡。Km同種異型Kappamarker是IgG在Kappa鏈上的同種異型表現(xiàn)。Km系統(tǒng)有三個(gè)因子：Km（1）、Km（2）、Km（3），Km系統(tǒng)的等位基因有Km1、Km1，2和Km3三個(gè)，按常染色體共顯性規(guī)律遺傳此系各個(gè)抗原在白人、黑人和東亞人分別均不相同。

新生兒出生時(shí)帶有來(lái)自母體的IgG，此期間具有母體的同種型。出生后約6個(gè)月，新生兒產(chǎn)生自己的免疫球蛋白，表現(xiàn)出自己的同種異型。免疫球蛋白同種異型檢測(cè)的意義很多疾病和其密切相關(guān)，如重癥肌無(wú)力、慢性活動(dòng)性肝病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和特定的Gm單體型相關(guān)。種系調(diào)查親子鑒定輸血反應(yīng)5、法醫(yī)學(xué)意義Gm、Km系統(tǒng)個(gè)人識(shí)別率及非父排除率均高于已知的紅細(xì)胞血型、紅細(xì)胞酶型及其他血清型，且Gm與Km抗原在常溫下或堿性環(huán)境中很穩(wěn)定，溶血對(duì)抗原性無(wú)大影響，所以Gm、Km系統(tǒng)具有很高的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值免疫球蛋白同種異型與臨床輸血Gm病人體內(nèi)有抗Gm抗體，輸全血、血液成分或血液制品所引起的反應(yīng)一般較輕受血者體內(nèi)缺乏lgA完全缺乏：約有1/500的病人ABO血漿中幾乎完全缺乏lgA，輸入含有l(wèi)gA的血液或血液制品，刺激病人產(chǎn)生很強(qiáng)的抗lgA抗體，以后再輸入含有IgA血液或血液成分及血漿制品可發(fā)生嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)，甚至死亡。IgA完全缺乏的人，這種人即使從未輸血或未注射血液制品，特異性抗-IgA抗體也十分常見(jiàn)。據(jù)Schmide(1969)描述一名IgA完全缺乏的婦女，第一次輸血便發(fā)生十分嚴(yán)重的過(guò)敏性反應(yīng)，測(cè)定其抗-IgA效價(jià)為1750，第二次輸血后上升到17500。部分缺乏：病人缺乏lgA亞類，輸含lgA的血液或血反應(yīng)，因?yàn)槭茌斎肟贵w的刺激，于10天后可能產(chǎn)生針對(duì)lgA亞類抗體，以后再此類制劑會(huì)發(fā)生反應(yīng)，一般癥狀較輕，如蕁麻疹等。IgA缺乏癥由Vyas于1968年首次報(bào)道，是已知病因最為明確的一種輸血類過(guò)敏反應(yīng)?？笽gA抗體多為IgG型，抗原抗體反應(yīng)激活補(bǔ)體釋放C3a、C5a等致敏物質(zhì)，引起類過(guò)敏反應(yīng)類特異性抗-IgA，即aIgA：產(chǎn)生類特異性抗IgA的患者血清中檢測(cè)不到IgA，其產(chǎn)生的抗IgA與所有的IgA均可發(fā)生反應(yīng)，在患者血清中滴度高；限定特異性抗-IgA：產(chǎn)生限制特異性抗IgA的患者少見(jiàn)，其血清中可檢測(cè)到正常含量或偏低含量的IgA，但某一種IgA亞類缺乏，因此其產(chǎn)生的抗IgA具有限制性，僅與相應(yīng)缺乏的亞類IgA(如IgA1或IgA2)反應(yīng)，且在患者血清中滴度低。抗IgA抗體分類IgA缺乏癥患者必須輸注IgA缺乏的血液或制品。在國(guó)外的血液中心已普遍篩選IgA（—）的血液或制品冷凍保存以備急用。 因此開(kāi)展人群Ig同種異型研究，檢出人血清中抗Ig，對(duì)疾病及輸血反應(yīng)的診斷、預(yù)防和治療有積極意義。思考：對(duì)IgA缺乏或部分缺乏的病人，應(yīng)該如何輸血？1、IgA完全缺乏獻(xiàn)血員的全血或血漿（最理想）。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,IgA缺乏獻(xiàn)血員中,日本只有0.7/萬(wàn)人;芬蘭只有1～25/萬(wàn)人,有文獻(xiàn)報(bào)道在中國(guó)正常人群中,IgA缺乏患病率為2.4/萬(wàn)人。因此,要找IgA缺乏的獻(xiàn)血員十分困難。2、自體輸血；3、生理鹽水多次洗滌的紅細(xì)胞懸液；4、臍帶血？臍血中IgA極少主要是因?yàn)槌錾暗奶号c外界隔絕，B細(xì)胞尚未受到抗原的刺激,不能轉(zhuǎn)化為分泌抗體的漿細(xì)胞,除IgG外,其它IgM、IgA等大分子免疫球蛋白都不能過(guò)胎盤(pán),均由出生后不斷接觸病原而逐漸產(chǎn)生,IgA一般出生后2～4個(gè)月才開(kāi)始出現(xiàn)。9歲后接近成人水平。故胎兒娩出時(shí),臍血中IgA不存在或極少。思考IgA缺乏或者部分缺乏者，其體內(nèi)含有抗-IgA抗體，能否作為獻(xiàn)血者？研究方法：復(fù)查輸血記錄，找出有抗-IgA且IgA缺乏的血小板捐獻(xiàn)者，將他們的血小板與非IgA缺乏的血小板作輸血后比較。結(jié)果：4個(gè)有抗-IgA且IgA缺乏的血小板捐獻(xiàn)者共獻(xiàn)出血小板25份，輸給22個(gè)人，有1人發(fā)生了發(fā)熱反應(yīng)，經(jīng)確定與輸血無(wú)關(guān)。對(duì)照組60名獻(xiàn)血者共獻(xiàn)出78份血小板，輸給56名受者，其中1人發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。結(jié)論：輸入帶有IgA抗體的血液成分似乎不會(huì)增加輸血反應(yīng)率。IgA缺乏引起輸血反應(yīng)1例患者,男,65歲,O型血,因肝硬化住某醫(yī)院,3月2日輸O型血漿200ml,未見(jiàn)任何不良反應(yīng),3月24日再次輸入O型血漿200ml時(shí),患者出現(xiàn)了皮膚潮紅,出汗,血壓低,呼吸困難,惡心和會(huì)厭水腫等一系列過(guò)敏反應(yīng)癥狀。于是立即停止輸血,將患者血樣和所輸血漿送到血液中心進(jìn)行檢查。核對(duì)用血申請(qǐng)單、血袋標(biāo)簽、交叉配血試驗(yàn)記錄核對(duì)受血者及供血者ABO血型，Rh（D）血型。用保存于冰箱中的受血者與供血者血樣、新采集的受血者血樣、血袋中血樣，重測(cè)ABO血型、Rh（D）血型、不規(guī)則抗體篩選及交叉配血試驗(yàn)（包括鹽水相和非鹽水相試驗(yàn)）；

結(jié)果

對(duì)兩份標(biāo)本進(jìn)行血型血清學(xué)檢查,并對(duì)所輸血漿進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),均未發(fā)現(xiàn)任何異常情況。同時(shí)根據(jù)患者輸血情況及所出現(xiàn)癥狀以及患者即往史進(jìn)行分析,推斷其可能是由于患者血漿中缺乏IgA,因輸血漿產(chǎn)生抗體引起抗原抗體反應(yīng),進(jìn)而產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)癥狀。對(duì)患者血漿中IgA情況進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)患者血漿中IgA含量?jī)H為4.5mg/dl,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于同年齡組平均水平下限;而其抗IgA抗體效價(jià)為1:3000；同時(shí)對(duì)患者即往史調(diào)查發(fā)現(xiàn),患者平時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)呼吸道、消化道感染癥狀,進(jìn)一步證明了我們的推斷免疫球蛋白同種異型的其他應(yīng)用免疫球蛋白同種異型檢測(cè)意義——人類學(xué)研究中國(guó)人免疫球蛋白同種異型的研究：中華民族起源的一個(gè)假說(shuō)

趙桐茂（上海輸血研究所），遺傳學(xué)報(bào)，1989目前已知的免疫球蛋白同種異型有GmAm、Em和Km．等系統(tǒng)。Gm在免疫球蛋白lg的重鏈上，受控于第14號(hào)染色體，已檢出18種因子。這些Gm因子以比較固定的形式組成單體型遺傳。Km因子有3種，受控于第2號(hào)染色體。群體和家庭調(diào)查表明Gm單體型穩(wěn)定，發(fā)生交換的情況極少。不同種族間不但Gm單體型頻率明顯差異，而且還存在一些具有“人種特異性”的Gm單體型，因此在人類學(xué)研究中Gm是個(gè)很有用的遺傳標(biāo)記。

摘要：調(diào)查了我國(guó)24個(gè)民族、74個(gè)群體的免疫球蛋白同種異型Gm、Km分布。測(cè)定了9560例個(gè)體的Gm((1，2，3，5，21)因子和9611例個(gè)體的Km(1)因子。根據(jù)Gm單體型頻率計(jì)算了遺傳距離并繪制系統(tǒng)樹(shù)。Gm1，21分布Gm（1，3，5）分布這些群體可以分為南北兩大類型，被假設(shè)分別起源于黃河流域和長(zhǎng)江流域。北方類型包括居住在我國(guó)北方的漢族、維吾爾族、哈薩克族、東鄉(xiāng)族、鄂倫春族、蒙古族、朝鮮族、褡固族、滿族、藏族、回族、錫伯族和保安族。南方類型包括南方漢族、土家族、白族、彝族、苗族、布依族、水族、畬族、仫佬族、壯族、侗族和京族。

結(jié)果支持作者早前提出的有關(guān)中華民族起源于古代兩個(gè)不同群體的假說(shuō)。這兩個(gè)群體大致以北緯30度為界，分別居棲在黃河和長(zhǎng)江流域。不同人種間的差異，大于同一人種內(nèi)不同群體間的差異。與高加索人種關(guān)聯(lián)的Gm3，5單體型存在于中國(guó)西北地區(qū)的少數(shù)民族中，提示混有高加索人種血緣。很可能來(lái)源于中亞地區(qū)的高加索人，通過(guò)“絲綢之路”進(jìn)入中國(guó)。Km因子在所調(diào)查的74個(gè)群體中呈隨機(jī)分布。

Ig同種異型檢測(cè)方法免疫學(xué)方法：

微量血凝抑制試驗(yàn)ELISA等方法電泳(Electrophoresis):

SDSPCR抗原分型--紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)將稀釋的受檢血清與等量最適稀釋度抗Gm血清混合；室溫反應(yīng)30分鐘；加入已知Gm抗原致敏的指示紅細(xì)胞懸液；置室溫1小時(shí)后離心,觀察結(jié)果。如果受檢血清中含有某種Gm型免疫球蛋白，將抑制抗Gm凝集帶有Gm因子的抗體所致敏的紅細(xì)胞，使之呈陰性反應(yīng)?？乖中汀狤LISA技術(shù)：以檢測(cè)G3m(16)為例EL1SA包板抗原為稀釋的混合人IgG，第一抗體為抗G3m(16)因子單克隆抗體，第二抗體為稀釋兔抗鼠Ig辣根氧化酶標(biāo)記抗體；第一抗體加入測(cè)定板之前，預(yù)先加等體積稀釋好的待測(cè)血清，置室溫反應(yīng)2小時(shí)。然后再分別加入第一抗體和第二抗體；抑制率=(x—Y)／x式中x為未經(jīng)待測(cè)血清抑制的單克隆抗體的吸光度；Y為經(jīng)待測(cè)血清抑制后的單克隆抗體的吸光度。抑制率大于50％為陽(yáng)性，抑制率小于或等于50%為陰性。瓊脂糖電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）等電聚焦電泳：是一種根據(jù)樣品的等電點(diǎn)不同而使它們?cè)趐H梯度中相互分離的一種電泳技術(shù)，分辨率比常規(guī)凝膠電泳高，能夠揭示許多普通電泳難以檢出的多態(tài)性。如維生素D結(jié)合蛋白普通電泳分為三種表現(xiàn)型，而等電聚焦技術(shù)分為六種。血清型分型技術(shù)——電泳方法

DNA分型技術(shù)也可用于血清型分型。個(gè)體差異的實(shí)質(zhì)是人類基因組編碼DNA的差異小結(jié)血清型概念：人類某些血清蛋白具有遺傳多態(tài)性，表型有個(gè)體差異，稱為血清型（serumtypes）；免疫球蛋白同種異型概念：是指同一種屬不同個(gè)體間的Ig分子抗原性的不同，主要反映在Ig分子上的CH和CL上一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸的差異。

血清型檢測(cè)在臨床輸血中的意義1、Gm不合引起輸血反應(yīng)的概率很低，且輸血反應(yīng)比較輕微；2、對(duì)缺乏IgA的受血者，經(jīng)輸血或其他途徑產(chǎn)生抗IgA抗體后，再次輸入含IgA的全血、血漿或血液制品時(shí)，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的輸血過(guò)敏反應(yīng)。起病急（僅輸入1ml即可產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)），病情嚴(yán)重（嚴(yán)重的過(guò)敏性休克，甚至?xí)斐伤劳觯┙Y(jié)合珠蛋白型1、Hp的生化性質(zhì)與生物學(xué)功能

由肝臟合成，等電點(diǎn)為4.1－4.2，電泳屬于α2－球蛋白組分。含糖量為18.6％

結(jié)合珠蛋白是一種血漿糖蛋白，分子量約為90.000。能與紅細(xì)胞外血紅蛋白(Hb)結(jié)合形成緊密的非共價(jià)復(fù)合物Hb-Hp。每天降解的Hb約有10%釋入血循環(huán)中，成為紅細(xì)胞外游離的Hb，Hb與Hp結(jié)合成Hb-Hp復(fù)合物后分子量可達(dá)155,000，不能透過(guò)腎小球，從而防止游離血紅蛋白從腎臟丟失，避免Hb所含鐵的丟失。保證鐵再用于合成代謝。溶血性貧血患者血漿結(jié)合珠蛋白濃度下降。由于溶血時(shí)大量的Hb釋出，Hp與游離Hb結(jié)合成復(fù)合物而被肝細(xì)胞攝取、清除。此外，Hp也是一種急性期蛋白，患各種炎癥時(shí)其血漿中含量升高。2、Hp的分子結(jié)構(gòu)

Hp的分子結(jié)構(gòu)類似免疫球蛋白，即由兩條重鏈(β鏈)和兩條輕鏈（α鏈）組成四聚體，而Hp的多態(tài)性主要是輕鏈的遺傳變異造成。輕鏈有α1和α2二種。α1中又有α1S和α1F二種亞型，各由84個(gè)氨基酸組成，分子量約9100。兩者區(qū)別在于第54位氨基酸(α1F為賴氨酸，α1S為谷氨酸)，其余83個(gè)氨基酸殘基順序均相同，因此可以推斷這一區(qū)別是通過(guò)一次點(diǎn)突變形成。β鏈則由143個(gè)氨基酸組成，分子量約16000。Hpα1和α2肽鏈?zhǔn)怯梢粚?duì)等位基因Hpl和Hp2所決定，基因定位于16q22．1，呈共顯性遺傳，因此有三種基本基因型：Hpl-1型為Hpl／Hpl；Hp2．1型為Hp2／Hpl；Hp2-2型為Hp2／Hp2Hp1-1型由兩條α1鏈和兩條β鏈組成Hp2-1型由一條α1鏈、一條α2鏈和兩條β鏈組成Hp2-2型由兩條α2鏈和兩條β鏈組成。除上述三型外，僅還有其它的變異型，由此組合成人群中Hp的多種多樣的基因型和表現(xiàn)型如：Hp2—1M型；一部分無(wú)血管內(nèi)溶血者的血清中沒(méi)有Hp或含量甚微，即所謂的Hp0型。常見(jiàn)的三種Hp型別在不同人種中分布不同，Hpl和Hp2的基因頻率也各異，Hp2基因頻率以亞洲人中最高(0．75)，歐洲白人次之(0．60)，非洲人最低(0．30-一0．40)?？梢?jiàn)，研究Hp型別分布不僅在遺傳學(xué)上有意義，在人種學(xué)上也有一定價(jià)值。帶HP1基因者結(jié)合血紅蛋白較多，HP2基因者結(jié)合血紅蛋白較少，如1-1型平均結(jié)合血紅蛋白為118g血紅蛋白/L，1-2型為93g血紅蛋白/L，2-2僅為75g血紅蛋白/L。珠蛋白基因的多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致珠蛋白本身與血紅蛋白的結(jié)合能力、抗氧化能力、人體內(nèi)鐵的代謝循環(huán)和免疫能力發(fā)生改變。既往的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，珠蛋白基因的多態(tài)性對(duì)瘧疾的發(fā)生和人體內(nèi)紅細(xì)胞溶解有著重要的意義珠蛋白2-2基因型是瘧疾流行地區(qū)兒童貧血的危險(xiǎn)因素，從而提示攜帶Hp2-2基因型的人體在瘧疾引起紅細(xì)胞溶血后，其珠蛋白結(jié)合游離血紅蛋白的能力是下降的。

此外，胎兒血液中不易測(cè)出Hp，部分新生兒可測(cè)出，4個(gè)月的嬰兒Hp型別大部分可測(cè)出，個(gè)別情況直至15歲以后才能測(cè)出。胎兒及新生兒血中測(cè)不出Hp，不能稱為Hp0型，這一點(diǎn)在涉及胎兒及嬰幼兒的親權(quán)鑒定時(shí)要注意Hp型的分型原理及方法電泳前先使待測(cè)樣品與血紅蛋白形成Hp－Hb復(fù)合物。電泳完后可以利用血紅蛋白的過(guò)氧化物酶活性在過(guò)氧化氫存在時(shí)使聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，染色Hp與輸血Hp缺乏癥的患者多次輸入血漿制品可產(chǎn)生針對(duì)結(jié)合珠蛋白的抗體。日本紅十字對(duì)1993—2000年間4138例非溶血性輸血反應(yīng)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，在日本人群中，結(jié)合珠蛋白缺乏導(dǎo)致的抗結(jié)合珠蛋白抗體產(chǎn)生引起的類過(guò)敏反應(yīng)約比抗IgA引起類過(guò)敏反應(yīng)高6倍，且在這些病人血清中同時(shí)檢出IgE與IgG抗Hp抗體。擬膽堿酯酶：表現(xiàn)出遺傳多態(tài)性。轉(zhuǎn)鐵蛋白型：多種變異體，各人種基因頻率各不相同。α2球蛋白型：血漿銅藍(lán)蛋白：Ceruloplasmin堿性磷酸酶AKPΑ2巨球蛋白型紅細(xì)胞酶型酶：活細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有生物催化作用的有機(jī)物,它能使化學(xué)反應(yīng)迅速進(jìn)行，而本身性質(zhì)不變。酶型：酶所具有的遺傳多態(tài)性或遺傳標(biāo)記；同工酶的遺傳概念：若同一種酶在不同的個(gè)體中表現(xiàn)有遺傳差異，且根據(jù)這些差異可以把人群分為兩個(gè)或更多類型，在遺傳上把這種酶稱為同工酶。同工酶的生化概念：在人體的血液、組織和各種體液中所存在的能催化相同的化學(xué)反應(yīng)但蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)不相同的一類酶?；钚灾行模航Y(jié)構(gòu)相同非活性部分：結(jié)構(gòu)差異現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有多種同工酶。如6-磷酸葡萄糖脫氫酶、乳酸脫氫酶、酸性和堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酸、肌酸磷酸激酶、核糖核酸酶、過(guò)氧化酶和膽堿酯酶等紅細(xì)胞酶型紅細(xì)胞酶型：不同個(gè)體紅細(xì)胞酶的遺傳多態(tài)性。RBC表面酶型呈遺傳多態(tài)性，目前有20余種常用電泳方法進(jìn)行分析紅細(xì)胞酶型應(yīng)用：其多態(tài)性作為遺傳標(biāo)記在研究細(xì)胞來(lái)源、基因分析、法醫(yī)中的親子鑒定和個(gè)體識(shí)別。同工酶的分型方法（電泳分離、酶譜顯示）

（一）電泳分離

1、歷史1955年，發(fā)現(xiàn)了淀粉凝膠電泳法。1963年，應(yīng)用淀粉凝膠電泳法發(fā)現(xiàn)了第一種紅細(xì)胞多態(tài)性酶型：酸性磷酸酶。70年代，等電聚焦技術(shù)的應(yīng)用，多種酶型亞型的發(fā)現(xiàn)1972年，發(fā)現(xiàn)了磷酸葡糖變位酶PGM1的亞型2、同工酶的分型多采用區(qū)帶電泳或等電聚焦技術(shù)。

區(qū)帶電泳——利用酶蛋白分子的電荷密度的差異，不同酶蛋白分子在介質(zhì)中的遷移率不同，從而形成清晰的區(qū)帶；等電聚焦技術(shù)——根據(jù)酶蛋白分子的等電點(diǎn)不同，在pH梯度介質(zhì)中，酶蛋白分子聚焦在相應(yīng)的等電點(diǎn)pH位置上，形成狹窄而清晰的區(qū)帶。磷酸葡萄糖變位酶(PGM)

1、生物化學(xué)性質(zhì)與生物學(xué)功能

PGM是參與糖代謝的重要酶類PGM葡萄糖－1－磷酸鹽

葡萄糖－6－磷酸鹽

葡萄糖－1，6－二磷酸鹽

?分子量：PGM2：61KD>PGM3：53KD>PGM1:51KD。?熱穩(wěn)定性：PGM1>PGM2>PGM3?活性：PGM1：占組織中PGM酶活性的80％，紅細(xì)胞中50％PGM2：在人體組織中，其余的PGM酶活性來(lái)自PGM2。在紅細(xì)胞中兩者活性相當(dāng)，各占紅細(xì)胞酶活性的50％。PGM3：胎盤(pán)、精子、白細(xì)胞和毛根鞘細(xì)胞中PGM4：主要見(jiàn)于哺乳期婦女的乳汁中2、PGM1表型

PGM1的多態(tài)性首先由Spencer等在1964年發(fā)現(xiàn)。PGM1普通型

3種由普通凝膠電泳發(fā)現(xiàn)的表型：PGM11-1（a、c帶）PGM12-2（b、d帶）PGM11-2（a、b、c、d帶）等位基因：PGM1*1、PGM1*2

PGM1的稀有表現(xiàn)型:

稀有的表現(xiàn)型都是由一個(gè)普通型等位基因與一個(gè)稀有型等位基因（PGM1*3～PGM1*8）所形成的雜合子。3、PGM1的亞型聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦技術(shù)可區(qū)分10種亞型：PGM11+、PGM11﹣、PGM12﹣、PGM12+PGM11+2+、PGM11﹣2﹣、PGM11+2﹣PGM11﹣2+、PGM11+1﹣、PGM12+2﹣PGM1的10種亞型受控于4個(gè)共顯性等位基因：PGM1*1+、PGM1*1﹣、PGM1*2+、PGM1*2﹣4、群體遺傳學(xué)（一）普通型大多數(shù)群體以PGM1*1頻率最高，最高可達(dá)0.90左右。中國(guó)各民族的PGM1*1基因頻率在0.59～0.83之間，絕大多數(shù)民族的PGM1*1頻率與亞洲其他地區(qū)、美洲黑人、白人和歐洲多數(shù)群體之間無(wú)明顯差異。（二）亞型：

?PGM1亞型的基因頻率在各群體之間多無(wú)顯著性差異

5、PGM1的電泳分型和酶譜顯示。

普通型：淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳。電子轉(zhuǎn)移染料染色法亞型：聚丙烯酰胺等電聚焦法電子轉(zhuǎn)移染料染色法。谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）：又稱丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，是氨基酸代謝中的重要酶類。其多態(tài)性是1971年用垂直板淀粉凝膠電泳發(fā)現(xiàn)的1、生化特征GPT廣泛存在于各組織器官的細(xì)胞中，肝的含量最為豐富，其活性遠(yuǎn)比其他組織高。GPT以兩種形式存在于細(xì)胞中：一種存在于細(xì)胞漿中，稱為可溶性GPT（sGPT）；另一種存在于線粒體中，稱為線粒體型GPT（mGPT）血清GPT活性顯著升高是由于細(xì)胞壞死或病變細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)所致，故臨床上將血清GPT活性測(cè)定用于肝臟疾病的診斷GPT分子由兩個(gè)亞基構(gòu)成，相對(duì)分子質(zhì)量為100000。催化丙氨酸與谷氨酸的氨基互換2、遺傳多態(tài)性1971年采用淀粉凝膠電泳分離并經(jīng)特殊染色，首次確定可溶性GPT的三種常見(jiàn)表現(xiàn)型：GPT1、GPT2-1、GPT2，并確定該表現(xiàn)型由人類第8號(hào)染色體上的一對(duì)共顯性基因GPT1、GPT2所控制，其遺傳方式符合孟德?tīng)柖?。以后相繼發(fā)現(xiàn)了GPT基因座上的多個(gè)稀有等位基因GPT3－GPT8及沉默基因GPT0。中國(guó)人群中尚沒(méi)有檢出稀有基因的報(bào)道。瓊脂糖凝膠電泳檢出的GPT譜型：純合子1型和2型各有一條譜帶，2型帶泳動(dòng)較快，靠近正極；1型帶泳動(dòng)較慢，靠近負(fù)極；雜合子2－1型有三條譜帶，在1型和2型的譜帶中間還多一條帶3、群體遺傳學(xué)調(diào)查黃種人和白種人各人群GPT型的基因頻率分布差異不明顯。GPT1的頻率較GPT2略高。非洲黑種人GPT1的基因頻率高達(dá)0.85，與白種人及黃種人差異明顯。GPT屬高鑒別能力的酶型系統(tǒng)，在個(gè)人識(shí)別中極具實(shí)用價(jià)值。4、GPT的分型方法方法有：淀粉凝膠電泳、瓊脂糖凝膠電泳、乙酸纖維素膜及聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦等，其中較常用的是瓊脂糖凝膠電泳。GPT酶譜顯示方法為熒光染色；其原理為：GPT能催化α－酮戊二酸與L－丙氨酸反應(yīng)，分別生成谷氨酸和丙酮酸，后者轉(zhuǎn)化為乳酸，同時(shí)使NADH變?yōu)镹AD，NADH為熒光物質(zhì)，而NAD則無(wú)熒光性，故有GPT存在的部位不發(fā)熒光，屬于負(fù)顯影。

紅細(xì)胞酸性磷酸酶（EAP）1、生物化學(xué)性質(zhì)與生物學(xué)功能

酸性磷酸酶又稱為磷酸單酯磷酸水解酶或酸性磷酸酯酶（ACP)，是一組在酸性條件下，催化磷酸單酯水解的酶類，能催化磷酸單酯水解成磷酸和醇?？煞譃?大類：1、ACP1-紅細(xì)胞酸性磷酸酶（EAP）2、ACP2-細(xì)胞分泌的酸性磷酸酶，如精液ACP(SAP)、陰道液ACP(VAP)3、ACP3-組織細(xì)胞溶酶體中的ACP在這三類同工酶中，紅細(xì)胞酸性磷酸酶是具有遺傳多態(tài)性的同工酶。2、EAP表型

6種普通表型：EAPA、EAPB、EAPC、EAPBA、EAPCA和EAPCB2號(hào)染色體短臂上單一基因座的3個(gè)等位基因：EAP*A、EAP*B、EAP*C此外，EAP基因座存在稀有等位基因EAP*D、EAP*E、EAP*F、EAP*G、EAP*R、EAP*Tic-1及EAP*0等。3、EAP基因EAP基因位于人類2p25

4、群體遺傳學(xué)?各群體中EAP*B的頻率都明顯高于EAP*A，其中以黑人EAP*B的基因頻率最高，高達(dá)0.9以上，黃種人EAP*B基因頻率介于黑人和白人之間。?EAP基因頻率的分布有明顯的種族差異，稀有基因EAP*C多見(jiàn)于白