微生物采抽樣要求課件

微生物采抽樣要求2013年12月1樣本是進(jìn)行一切實(shí)驗(yàn)室檢測的基礎(chǔ)所有實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果都依賴于樣本質(zhì)量

樣本采集管理的重要性直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室檢測的準(zhǔn)確性與效率影響到處置事件的評(píng)估與策略制定疫情處理：疫情的判斷與防控策略的制定監(jiān)測與普查：流行狀況的評(píng)估病例診斷：治療方案制定、病人預(yù)后、疾病負(fù)擔(dān)保證樣本質(zhì)量的第一要素

責(zé)任第一責(zé)任心不強(qiáng)，對(duì)所有事情都敷衍或答應(yīng)對(duì)標(biāo)本的接受不加思索為照顧各種關(guān)系，放棄了提出合理要求的權(quán)利擁有權(quán)力的人必須支持、尊重實(shí)驗(yàn)室按制度辦事必須要把對(duì)象利益放在第一位對(duì)所需要技術(shù)范圍不了解，工作的盲目性造成樣本浪費(fèi)微生物檢測采抽樣技術(shù)微生物檢測病原微生物樣本：人工采集的、含有病原微生物的體液、組織、排泄物、污染物等物質(zhì)衛(wèi)生微生物樣本：產(chǎn)品（食用品）及環(huán)境物品等微生物檢測采抽樣技術(shù)要素?zé)o菌操作技術(shù)生物安全防護(hù)專業(yè)技術(shù)微生物檢測采抽樣技術(shù)微生物檢測采抽樣技術(shù)要素

★無菌操作技術(shù)

★生物安全防護(hù)

★專業(yè)技術(shù)樣本采集

樣本采集程序確定采樣目的、類型、對(duì)象，制定采樣要求試劑耗材準(zhǔn)備、現(xiàn)場人員場所準(zhǔn)備制定詳細(xì)的采樣記錄表格展開采樣，規(guī)范標(biāo)記樣本樣本現(xiàn)場處理與保存樣本運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室掌握事件重點(diǎn)與相應(yīng)的操作規(guī)程

質(zhì)量關(guān)鍵點(diǎn)

標(biāo)本采集1標(biāo)記包裝記錄2樣本保存運(yùn)送3一、樣品采集具體要求食品樣本采集血液樣本采集糞便、肛拭子樣本采集①平均樣品：糧：按三層（表、中、下）五點(diǎn)采樣法，油：抽取表層與底層油、混樣檢測。②正常樣品與異常樣品：除采正常樣品外，如發(fā)現(xiàn)有異常樣本時(shí)，應(yīng)分別進(jìn)行檢測。③樣本數(shù)量：一般采集中樣，中樣：即從食品的各部分取混合樣品，一般200g。有些樣品可達(dá)500g。如糧食可分3層5點(diǎn)，充分混合后取500g。小樣：也稱檢樣，一般25g。④避免外源性污染：各種采樣器、樣品容器嚴(yán)格滅菌，無菌操作，盡可能采未開啟的樣品。⑤防止樣品中細(xì)菌的菌量及菌相的變化：時(shí)間：不得超過3h溫度：0℃~4℃，冷凍樣品仍應(yīng)需保持在冷凍狀態(tài)⑥標(biāo)簽明確：樣品名、來源、數(shù)量、采樣地點(diǎn)、采樣人、采樣年月日及采樣地點(diǎn)，必要時(shí)注明采樣溫度、濕度及現(xiàn)場衛(wèi)生狀況，是否無菌操作血液樣本的采集

（1）血液樣本中可能有的細(xì)菌金色葡萄球菌、鏈球菌、單核李斯特菌、炭疽桿菌，腦膜炎奈瑟菌、傷寒及副傷寒沙門菌，綠膿桿菌，氣單胞菌，鼠疫耶爾森菌、布魯菌、鉤端螺旋體等（2）樣本采集及應(yīng)注意事項(xiàng)①采血時(shí)期及次數(shù)發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰用抗菌藥物前，已用藥而不能中止的病人，應(yīng)在下次用藥前采集，用藥前24h內(nèi)采集采集3-4次血液標(biāo)本，檢出率可達(dá)90%以上③一般不用抗凝劑，EDTA，枸櫞酸鈉等抗凝劑可能對(duì)細(xì)菌有抑制作用，肝素抗凝尚未見對(duì)細(xì)菌有影響。培養(yǎng)基中加入0.03-0.05%聚茴香腦碘酸鈉（SPS），有抑制血清中殺菌物質(zhì)的作用，并且對(duì)氨基糖苷類及多肽類抗生素有滅活效果，有利于檢出細(xì)菌。病人已用抗生素時(shí)磺胺類藥：100ml培養(yǎng)基加對(duì)氨基苯甲酸5mg青霉素：100ml培養(yǎng)基加200u青霉抗生素：

培養(yǎng)基中常加入硫酸鎂，以中和鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗菌藥物血培養(yǎng)1.血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS，可以起到抗凝、抗吞噬、抗鰲合的作用；還含有樹脂、炭顆粒，可吸收血液中的抗生素，提高細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率。2.血量>13ml時(shí)，將血分別放入兩個(gè)血培養(yǎng)瓶，若瓶子裝血太多將降低降低陽性率。糞便樣本的采集（1）糞便中可能發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌

葡萄球菌、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、結(jié)核分技桿菌、傷寒、副傷寒及其他沙門菌、志賀菌、變形桿菌、綠膿桿菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、假絲酵母菌等（2）樣本的采集①糞便：取有膿血、粘液部分的糞便2～3g，液體糞便取絮狀物，盛于滅菌的廣口瓶或蠟紙盒中，及時(shí)送檢和接種②直腸拭子：插入肛門4～5cm深處（小兒2～3cm），輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，擦取直腸表面的粘液，盛入無菌試管或保存液中送檢。

③標(biāo)本立即送檢拖延送檢可致病原菌數(shù)目迅速減少或雜菌過度生長，影響檢出率不能及時(shí)送檢，標(biāo)本置于保存液或運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢國內(nèi)、外最新生產(chǎn)、銷售的運(yùn)送培養(yǎng)基Stuarts,Cary-Blair,Amies,STGG四種主要的運(yùn)送培養(yǎng)基實(shí)例介紹：細(xì)菌性食物中毒采樣要求樣品采集流程樣品采集與送檢流程無菌采樣方法采集及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣送檢申請(qǐng)單詳細(xì)填明檢樣名稱、來源、送檢時(shí)間、中毒情況、患者主要臨床癥狀、檢驗(yàn)項(xiàng)目等樣品采集注意事項(xiàng)采樣用的試管、瓶子、盛器、剪/鑷子、棉拭等均應(yīng)無菌采樣用的生理鹽水、卡里運(yùn)送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合所需試劑量，卡里運(yùn)送培養(yǎng)基為5ml/管為宜肛拭、食品和環(huán)節(jié)等采樣，其采樣量須滿足必須開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，食品采樣應(yīng)盡量多于25g（ml）以上采樣的同時(shí)，應(yīng)及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗(yàn)室，并有交接手續(xù)各類樣品采集方法可疑食物、水樣：將殘余食物或水樣用滅菌鑷子或匙采取后置于滅菌容器中。體積較大的魚、肉應(yīng)在表面消毒后取內(nèi)部檢樣。罐頭樣品可直接送檢環(huán)鏡樣品：炊事用具如鍋、碗、刀、抹布、操作人員的手等用棉拭涂擦采樣，菜墩用刀刮取表面后將刮取物放入滅菌容器中各類樣品采集方法從業(yè)人員：

根據(jù)食物中毒的情況要求，可采取售貨員或制作食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關(guān)人員肛拭檢樣，特別對(duì)那些在事件發(fā)生前或現(xiàn)正患有腸炎、發(fā)燒、化膿性及可疑帶菌者進(jìn)行采樣樣品送檢檢樣采取后立即由專人在2小時(shí)內(nèi)送區(qū)縣疾病預(yù)防控制中心或（和）市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)送檢檢樣時(shí)，應(yīng)附送采樣送檢申請(qǐng)單，并按要求注意冷藏樣品送檢人員應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室收樣或檢驗(yàn)人員履行樣品交接手續(xù)

腹瀉標(biāo)本的采集方法糞便或嘔吐物標(biāo)本-----5g或5-10ml，新鮮送往實(shí)驗(yàn)室。肛拭子標(biāo)本----僅適合于目標(biāo)相對(duì)明確的腹瀉病原檢索，否則應(yīng)采集多份肛拭子----使用不同的運(yùn)送培養(yǎng)基及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室檢測。肛拭子采樣的注意事項(xiàng)必須醫(yī)務(wù)人員負(fù)責(zé)采集！拭子應(yīng)插入肛門括約肌約3cm輕輕旋轉(zhuǎn)拭子至少一周拭子應(yīng)看到有糞便標(biāo)本黏附除非目標(biāo)明確，否則不推薦肛拭子采樣。肛拭子標(biāo)本一般不適用于毒素測定及病毒腹瀉病原檢測。采樣與送檢水體：水體的采樣一般要求用滅菌的500ml水樣瓶采集相對(duì)靜止的表層水（30cm以內(nèi)）500ml，加蓋密封后在室溫（20-25℃）下送實(shí)驗(yàn)室檢測。采樣時(shí)應(yīng)選擇在水流平穩(wěn)或靜止處吸取。每個(gè)采樣點(diǎn)應(yīng)相距數(shù)米采集不少于2瓶做為平衡檢測。非疫情狀態(tài)下的監(jiān)測采樣時(shí)間一般在清晨時(shí)，此時(shí)水體未受人群活動(dòng)等因素影響。采樣與送檢水產(chǎn)品：通常選取活的或新鮮的水生動(dòng)物為采集對(duì)象，有時(shí)也應(yīng)考慮冰凍的水生動(dòng)物，以無菌操作采集合適的部位，如鰓部和/或腸內(nèi)容物等，置采樣瓶（管）或食品采樣袋密封，在常溫下送檢。有條件的采樣點(diǎn)可將水生動(dòng)物整體采回實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行相關(guān)處置。同時(shí)要求以無菌棉簽涂抹五只（條）以上的同類水生動(dòng)物體表、鰓及肛門，置堿性蛋白胨水送檢，每管堿性蛋白胨水作一份樣品看待。海水產(chǎn)品采集注意問題市場上的不要過分強(qiáng)調(diào)只采可疑的水產(chǎn)，要有交叉污染的意識(shí)；整體與涂抹相結(jié)合，擴(kuò)大數(shù)量彌補(bǔ)因雜菌競爭抑制等因素造成的不足；整體樣品要注意保濕，霍亂弧菌在干燥狀態(tài)下，很快死亡。盡快送檢，一般不主張冷凍、冷藏海水產(chǎn)品采集注意問題盡量集中在重點(diǎn)市場進(jìn)行高密度、多品種采樣；市場里的桌面、砧板等等污染物也應(yīng)考慮。病毒樣本的采集

1.流行性感冒病毒樣本采集時(shí)間：發(fā)病后頭3d，越早越好，發(fā)病后7d雖然還能分離到病毒，但隨時(shí)間延長，分離率大大地下降標(biāo)本種類：較好為鼻腔洗液，但病人不易接受，尤其是小孩，故常用咽喉拭子、鼻拭子或咽喉漱液疑似流感死亡的病例：取肺，氣管粘膜和血。標(biāo)本運(yùn)送：4℃冰壺，送到實(shí)驗(yàn)室，越快越好，如48h內(nèi)未能接種，放低溫（最好-70℃）保存。鼻腔或咽部洗液標(biāo)本：充分振蕩，打碎粘液，4℃，5～10min，自然沉淀，取上清液3ml，加青霉素1000u/ml，鏈霉素1000μg/ml，4℃2h，接種。鼻咽拭子標(biāo)本：棉拭子在管壁反復(fù)擠壓取出，加青、鏈霉素處理。器官組織標(biāo)本：用滅菌的乳缽磨碎，生理鹽水配成200g/L懸液，離心沉淀，取3ml上清液加青、鏈霉素處理。2.脊髓灰質(zhì)炎病毒樣本（一）標(biāo)本采集盡快采集，發(fā)病7d內(nèi)采集，4℃送檢，-25℃保存。標(biāo)本：

-糞便：最常用。4～8g

-腦脊液：2～3ml-肛拭子與咽拭子：放入1～2ml無菌營養(yǎng)液或Hank液中送檢，保存。-尸體解剖標(biāo)本：中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別是頸和腰部的脊髓灰質(zhì)、橋腦和降結(jié)腸標(biāo)本，置于滅菌容器內(nèi)，保存送檢（二）標(biāo)本處理糞便：-2g加Hank液10ml，3000r/min，30min

-取上清4～5ml，加活性炭200mg混勻，4℃1h，3000r/min，30min

-上清加雙抗（終濃度1000u青霉素、1000μg鏈霉

素/ml，）4℃靜置4h后接種，處理好的標(biāo)本-20℃

保存肛拭子標(biāo)本：同糞便標(biāo)本處理相同。咽拭子標(biāo)本：只需加抗生素處理，無菌試驗(yàn)陰性，即可-20℃保存。尸體解剖標(biāo)本：

1g標(biāo)本加Hank液5ml，研磨成懸液，3000r/min，30min，取上清加雙抗，4℃過夜，離心，上清-20℃保存。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（作業(yè)指導(dǎo)書）制定采抽樣作業(yè)指導(dǎo)書（SOP）操作規(guī)程要點(diǎn)：采集人員所需的全部指示信息，有的放矢不同處置事件，采樣目的、采樣內(nèi)容、采樣對(duì)象均不相同采樣過程每一步都必須計(jì)劃好，制定采樣要求：采樣目的、采樣對(duì)象、采集時(shí)間、采集部位、標(biāo)本量、無菌要求、標(biāo)本采集后特殊處理、標(biāo)本保存與運(yùn)輸條件有可能根據(jù)現(xiàn)場實(shí)際情況進(jìn)行必要的調(diào)整樣本采集與運(yùn)輸方法；實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目列表與方法；聯(lián)系與記錄信息：實(shí)驗(yàn)室名稱、地址、聯(lián)系人特殊處理標(biāo)本，特殊保存與運(yùn)輸條件，額外說明，明確標(biāo)注所有實(shí)驗(yàn)室人員必須理解和掌握該作業(yè)指導(dǎo)書的內(nèi)容，并遵照?qǐng)?zhí)行。人員、場所、試劑耗材準(zhǔn)備與現(xiàn)場人員協(xié)調(diào)，安排妥當(dāng)，避免混亂

采樣對(duì)象做好準(zhǔn)備，安排好采樣場所按照采樣要求一一準(zhǔn)備用品

例：血液采集：各種不同的采血管不同增菌液、保存液低溫運(yùn)輸設(shè)備標(biāo)本包裝與標(biāo)識(shí)人員防護(hù)與消毒用品

避免過度防護(hù)現(xiàn)場采樣注意問題嚴(yán)格按照指定采樣要求進(jìn)行攜帶適量物品進(jìn)入現(xiàn)場，避免污染樣本采集無菌要求嚴(yán)格無菌

血液、腦脊液、胸水、腹水、組織活檢、尸檢標(biāo)本

尸檢標(biāo)本中，所有尸檢操作者必須隨時(shí)具備無菌意識(shí)，尤其打開胸、腹腔后，各個(gè)臟器的采集必須嚴(yán)格無菌操作糞便等標(biāo)本采集時(shí)的無菌要求則相對(duì)較低

需要避免不同標(biāo)本之間的交叉污染二、記錄（樣品標(biāo)識(shí)、包裝）樣本采集記錄表格——識(shí)別、記錄標(biāo)本的唯一憑證建立標(biāo)本追蹤系統(tǒng)的第一環(huán)節(jié)樣本采集記錄表病人基本情況，保障能夠順利回訪到病人偏遠(yuǎn)的農(nóng)村，方言溝通、文化程度很低，困難樣本唯一編號(hào)：致命的、無法彌補(bǔ)的錯(cuò)誤編注流水號(hào)，編號(hào)反復(fù)從開始，導(dǎo)致序號(hào)混亂，無法辨識(shí)病人臨床癥狀信息、人口學(xué)信息采樣人信息，保證標(biāo)本能夠隨時(shí)追溯到采樣者，核實(shí)其他現(xiàn)場信息額外信息記錄：在現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)額外的重要信息，及時(shí)記錄，特殊標(biāo)記在采樣前印刷備齊，現(xiàn)場及時(shí)填寫，杜絕采樣后補(bǔ)填在采樣結(jié)束后，立即錄入為電子版，原版表格封存?zhèn)洳椴蓸尤罩荆簶?biāo)本采集表的匯總記錄，一直記錄到標(biāo)本交接到實(shí)驗(yàn)室

標(biāo)本辨識(shí)的唯一標(biāo)識(shí)使用最可靠的標(biāo)記方法在標(biāo)本容器表面、蓋上同時(shí)標(biāo)記高質(zhì)量的記號(hào)筆，耐水、腐蝕、低溫字跡清楚有條件的情況下使用條碼標(biāo)簽與記錄表格一一對(duì)應(yīng)樣本現(xiàn)場處理與保存床前接種血液標(biāo)本處理：不同采血管要求：室溫孵育、及時(shí)搖動(dòng)不明原因疾病標(biāo)本無菌、無抗生素保存管用于細(xì)菌檢測：避免盲目增菌、轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基（污染標(biāo)本：切忌無選擇性增菌）用于病毒檢測：病毒保存液保存運(yùn)輸溫度用于病毒檢測：低溫（-20℃）用于細(xì)菌檢測：4℃或室溫（弧菌），禁零下樣本交接與核對(duì)樣本交接

填寫交接表格，包括送樣、接受的日期、時(shí)間、地點(diǎn)，雙方簽字采樣日志中標(biāo)注交接信息樣本核對(duì)

樣本標(biāo)記是否與采樣記錄單記錄一一對(duì)應(yīng)；包裝是否完整無泄漏；樣本種類是否符合檢測的要求樣本現(xiàn)場處理是否符合要求；標(biāo)本量是否足夠；保存與運(yùn)輸條件是否正確等挑出不合格標(biāo)本，記錄原因，進(jìn)行文字備案，進(jìn)行恰當(dāng)處理樣本檢測程序記錄對(duì)所接受樣本立刻建立樣本處理程序，并進(jìn)行文本記錄立即檢測樣本處理的程序稍后檢測樣本的處理

（實(shí)驗(yàn)檢測需要等待預(yù)處理時(shí)間或暫時(shí)沒有檢測條件，如：血漿/血清的存儲(chǔ)和分離）需要特殊處理樣本的程序文本記錄實(shí)際樣本處理所采用的程序、檢測進(jìn)度、檢測結(jié)果與樣本用量、樣本剩余量等不合格標(biāo)本處理明確樣本放棄準(zhǔn)則：未標(biāo)記的標(biāo)本，最主要的沒有檢測價(jià)值的標(biāo)本提供的標(biāo)本背景資料不清；標(biāo)本標(biāo)記與采樣記錄不符，并且無法追溯修正；采樣后處理錯(cuò)誤的標(biāo)本（如：用于血清學(xué)檢測的標(biāo)本出現(xiàn)了嚴(yán)重溶血；血象檢測標(biāo)本未抗凝等）；標(biāo)本量嚴(yán)重不足；保存與運(yùn)輸條件不當(dāng)或嚴(yán)重超出時(shí)限；以及其他未達(dá)到本次采樣實(shí)際要求的標(biāo)本不合格樣本處理在采樣日志上注明，寫清楚不合格的原因，妥善處理

采集到的樣品是非常珍貴的，尤其是疫情標(biāo)本，不能夠輕易拒絕或丟棄標(biāo)本，仍需要與采樣人員明確說明后妥善保存重大疫情采樣如果出現(xiàn)不合格樣本，應(yīng)該及時(shí)向上級(jí)匯報(bào)實(shí)驗(yàn)檢測進(jìn)行中發(fā)現(xiàn)的無法檢測的樣本分析無法檢測原因；判斷排查是樣本質(zhì)量問題還是保存問題；（如：樣本降解、嚴(yán)重污染等）保留相應(yīng)的書面證據(jù)對(duì)樣本做出妥當(dāng)