第三章 藥物的雜質(zhì)檢查

第三章藥物的雜質(zhì)檢查1.掌握雜質(zhì)檢查中限量的表示方法及計算。2.掌握一般雜質(zhì)與特殊雜質(zhì)的定義。3.掌握氯化物、重金屬、砷鹽檢查的原理、方法、條件及注意事項。4.掌握色譜法在特殊雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用。5.熟悉藥物中雜質(zhì)的來源和雜質(zhì)檢查方法。6.熟悉硫酸鹽、鐵鹽、殘留溶劑測定、干燥失重檢查、熾灼殘渣測定法。7.了解藥物純度的概念，明確藥物中雜質(zhì)檢查的意義；了解澄清度、溶液顏色、易炭化物檢查的原理及方法；了解特殊雜質(zhì)檢查的其他方法。第一節(jié)概述一、藥物純度的概念與要求雜質(zhì)？藥物的純度？藥物的純度與化學(xué)試劑的純度的不同？任何影響藥品純度的物質(zhì)。指藥物純凈程度。藥物的純度：從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性的影響來考慮化學(xué)試劑的純度：從可能引起的化學(xué)變化對使用的影響考慮，不考慮雜質(zhì)的生理作用二、雜質(zhì)的來源與種類㈠生產(chǎn)過程中引入1.在合成藥的生產(chǎn)過程中，未反應(yīng)完全的原料、反應(yīng)的中間體和副產(chǎn)物。如：阿司匹林

2.藥物在制成制劑過程中，可能產(chǎn)生新的雜質(zhì)。如：鹽酸普魯卡因注射液在高溫滅菌過程中，可能水解為對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇。

3.試劑、溶劑、催化劑類。如殘留溶劑

4.生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)。如：金屬雜質(zhì)必須重視異構(gòu)體和多晶型對藥物有效性和安全性的影響㈡貯藏過程中引入的雜質(zhì)在貯藏過程中由于受外界條件(溫度、濕度、日光、氧氣、微生物等)的影響，引起藥物結(jié)構(gòu)發(fā)生變化(水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶形轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等)而產(chǎn)生雜質(zhì)。易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等㈢雜質(zhì)的種類按來源分一般雜質(zhì)、特殊雜質(zhì)按毒性分信號雜質(zhì)、毒性雜質(zhì)按理化性質(zhì)分無機雜質(zhì)、有機雜質(zhì)、殘留溶劑特殊雜質(zhì)：指在特定藥物在生產(chǎn)工藝中引入的雜質(zhì)。一般雜質(zhì)：指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程容易引入的雜質(zhì)。如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等三、雜質(zhì)的限量

雜質(zhì)限量：在不影響療效和不發(fā)生毒性的前提下，對于藥物中可能存在的雜質(zhì)，允許有一定的量。藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量稱為雜質(zhì)限量。限量的表示方法：百分之幾(%)

百萬分之幾（ppm）雜質(zhì)限量（%）=雜質(zhì)最大允許量供試品量×100%雜質(zhì)檢查方法：限量檢查法、定量測定法限量檢查法分為：對照法、靈敏度法、比較法對照法：指取一定量的被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比較反應(yīng)結(jié)果，以確定雜質(zhì)是否超過限量。對照液供試液相同方法處理比較結(jié)果特點：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量L(%)=C×VS×100%雜質(zhì)限量(%)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度×標(biāo)準(zhǔn)溶液體積供試品量×100%靈敏度法：指在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)，從而判斷供試品中所含雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定。比較法：指取供試品一定量依法檢查，測定特定待檢雜質(zhì)的參數(shù)與規(guī)定的限量比較，不得更大。示例一奈苯海明中氯化物的檢查取本品0.30g置200ml量瓶中，加水50ml、氨試液3ml和10%硝酸銨溶液6ml，置水浴上加熱5min，加硝酸銀試液25ml，搖勻，再置水浴上加熱15min，并時時振搖，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，濾過，取續(xù)濾液25ml置納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀釋成50ml，搖勻，在暗處放置5min，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液(10gCl/ml)1.5ml制成的對照液比較，求氯化物的限量。L(%)=C×VS×100%25200=10×10-6×1.50.30××100%=0.04%示例二

谷氨酸鈉中重金屬的檢查取本品1.0g，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，依法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10gPb/ml）所呈顏色相比較，不得更深，重金屬不得超過百萬分之十。應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多少毫升？V=L×SC=10×10-6×1.010×10-6=1.0ml示例三

腎上腺素中酮體的檢查取本品0.20g，置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）溶解并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測定吸光度不得超過0.05，酮體的為435，求酮體的限量?！?00AC酮體＝＝435×1000.05＝1.15×10-6(g/ml)0.2C樣品＝100＝2×10-3(g/ml)L(%)=×100%=0.06%C酮體C樣品A=×C示例四

卡比馬唑片（規(guī)格：5mg）中甲巰咪唑的檢查取本品20片，研細(xì)，加三氯甲烷適量，研磨使卡比馬唑溶解，濾過，加三氯甲烷洗滌濾器，合并濾液與洗液，置10ml量瓶中，加三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取甲巰咪唑?qū)φ掌?，加三氯甲烷制成?ml含100g的溶液，作為對照品溶液，分別吸取上述兩種溶液各10l，點樣、展開、顯色。供試品溶液如顯與對照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點，其顏色與對照品主斑點比較，不得更深，求雜質(zhì)限量。L(%)=×100%=C雜質(zhì)C樣品10010000×100%=1.0%第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物檢查法原理利用Cl-在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀渾濁液比較，以判斷供試品中的氯化物是否符合限量規(guī)定。檢查方法供試液對照液稀硝酸暗處放置5min，置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較。硝酸銀試液1.0ml測定條件1.標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含50～80g的Cl所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液5～8ml。2.反應(yīng)需在硝酸酸性條件下進(jìn)行，且以50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜。目的：加速AgCl渾濁的形成并產(chǎn)生較好的乳濁；避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成。3.避光、暗處放置5min后比濁，因氯化銀見光易分解。二、硫酸鹽檢查法原理利用SO42-與氯化鋇在鹽酸酸性溶液中生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的渾濁液比較，以判斷供試品中的硫酸鹽是否符合限量規(guī)定。檢查方法供試液對照液25%氯化鋇溶液5ml放置10min，置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較。稀鹽酸測定條件1.標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液100gSO42-/ml，50ml溶液中含100g～500g的所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液1～5ml。2.反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進(jìn)行，且以50ml供試溶液中含稀鹽酸2ml為宜。干擾與排除1.供試品中如有不溶物，用濾紙濾過。2.供試品如有色，用內(nèi)消色法處理。三、鐵鹽檢查法硫氰酸鹽法Ch.pUSP巰基醋酸法BP硫氰酸鹽法原理鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色比較，以判斷供試品中的鐵鹽是否符合限量規(guī)定。H+檢查方法供試液對照液硫氰酸銨立即比色稀鹽酸、過硫酸銨測定條件1.標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液在(10g/ml)1-5ml范圍內(nèi)，色澤梯度明顯，易于區(qū)別。2.鹽酸酸性條件可防止Fe3+水解(50ml溶液含稀鹽酸4ml)。3.加入氧化劑過硫酸銨可氧化供試品中的Fe2+Fe3+，同時防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。干擾與排除1.若檢查葡萄糖、糊精等藥物中的鐵鹽，則需加硝酸處理，不再加過硫酸銨，但要加熱煮沸排除亞硝酸的干擾。2.為了提高靈敏度或供試管與對照管色調(diào)不一致時，可用正丁醇提取后，分取正丁醇層比色。四、重金屬檢查法重金屬：指在實驗條件下，能與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅及鎘等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會較多，鉛在體內(nèi)易蓄積中毒，所以檢查時以鉛為代表?！吨袊幍洹分亟饘贆z查法一共收載有四法第一法硫代乙酰胺法適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物原理硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5醋酸鹽緩沖液)條件下水解，產(chǎn)生的硫化氫與微量重金屬離子作用生成黃色到棕黑色的硫化物，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)處理后產(chǎn)生的顏色進(jìn)行比較。pH3.5檢查方法供試液對照液硫代乙酰胺試液2ml放置2分鐘，比較醋酸鹽緩沖液2ml測定條件1.標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(10g/ml)適宜目視比色的范圍為1-2ml。2.用2mlpH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為3～3.5，此時，硫化鉛沉淀較完全。3.酸度增大，重金屬與H2S呈色較淺或不呈色。干擾與排除1.供試品如有色，在對照管中加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液。2.若供試品中有微量Fe3+，會氧化H2S生成單質(zhì)硫，干擾比色，加入抗壞血酸還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾。第二法熾灼后硫代乙酰胺法適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機藥物供試品熾灼鹽酸供試溶液對照溶液醋酸緩沖液2ml硫代乙酰胺試液2ml放置2分鐘，觀察，比較注意1.熾灼殘渣加硝酸加熱處理，使有機物進(jìn)一步分解破壞完全，必須蒸干除盡氧化氮，否則可氧化硫化氫析出硫，影響比色。2.含鈉及氟的有機藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿(因可腐蝕瓷坩堝，帶入大量重金屬。)第三法硫化鈉法適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類原理將供試品堿性條件下溶解，以硫化鈉為顯色劑，Pb2＋和S2－作用生成PbS微粒的混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同樣處理后的顏色進(jìn)行比較。檢查方法供試液對照液硫化鈉試液1ml放置2分鐘，比較氫氧化鈉試液5ml第四法微孔濾膜法適用于含2～5g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查按第一法處理后用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集于濾膜，比較色斑。檢查方法供試液對照液硫代乙酰胺試液1ml醋酸鹽緩沖液2ml轉(zhuǎn)移至濾器過濾，取下濾膜，于濾紙上干燥，比較鉛斑的深淺。五、砷鹽檢查法砷為毒性雜質(zhì)，多由使用無機試劑引入。Ch.p兩種檢查方法㈠古蔡氏法原理利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的砷化氫氣體，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下所生成的砷斑比較，來判斷藥物中砷斑的含量。檢查方法供試液對照液酸性SnCl2KI試液供試品處理As3＋Zn粒AsH3↑HgBr2試紙PbAc2棉花砷斑比較測定條件

1.標(biāo)準(zhǔn)砷溶液臨用新配，1gAs/ml。

2.酸性氯化亞錫及碘化鉀的作用是：⑴還原As5+為As3+，加快反應(yīng)速度；⑵碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行；⑶可抑制微量Sb的干擾，在實驗條件下，100gSb存在不干擾。⑷在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化的作用。3.醋酸鉛棉花的作用是消除鋅粒及供試品中少量硫化物的干擾，醋酸鉛棉花60mg裝管高度60～80mm。4.鋅粒應(yīng)無砷。5.砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)立即觀察干擾與排除1.供試品若為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽時，加HNO3，△，使氧化成硫酸鹽，以除去干擾，如硫代硫酸鈉中砷鹽的檢查。2.供試品若為鐵鹽，需先加酸性氯化亞錫試液，將Fe3+還原為Fe2+。如枸櫞酸鐵銨中砷鹽的檢查。3.環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物，要先有機破壞后再檢查常用的有機破壞方法：堿破壞法：石灰法、無水碳酸鈉堿融法酸破壞法：如葡萄糖中砷鹽的檢查4.供試品若為含銻藥物，改用白田道夫法原理氯化亞錫在鹽酸中能將砷鹽還原成棕褐色的膠態(tài)砷。與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后進(jìn)行比較，判斷供試品中含砷量。本法靈敏度低(20gAs2O3/10ml)，加入少量二氯化汞能提高反應(yīng)靈敏度(2gAs2O3/10ml)。㈡二乙基二硫代氨基甲酸銀法[Ag-DDC法]原理砷化氫與Ag(DDC)吡啶溶液作用，使Ag(DDC)中的銀還原為紅色膠態(tài)銀。與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液相同條件下處理后進(jìn)行比較紅色檢查方法供試液對照液酸性SnCl2KI試液供試品處理As3＋Zn粒AsH3↑Ag-DDC吡啶溶液紅色膠態(tài)銀同置白色背景上目視比色或在510nm波長測吸收度，比較大小。銻化氫與Ag(DDC)的反應(yīng)靈敏度低，500g銻液不干擾測定六、溶液顏色檢查法控制藥物中有色雜質(zhì)限量的方法。第一法目視比色法與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較的方法檢查方法規(guī)定色調(diào)色號的標(biāo)準(zhǔn)比色液稀釋后供試溶液同置納氏比色管觀察、比較觀察方法：平視（顏色較深時）自上而下（顏色較淺時）標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制由三種有色無機鹽(比色用重鉻酸鉀0.8000mg/ml、比色用硫酸銅液62.4mg/ml和比色用氯化鈷液59.5mg/ml）配成。分別取不同比例的以上三種溶液，配成5個色調(diào)10個色號的標(biāo)準(zhǔn)比色液。第二法分光光度法取各藥品項下規(guī)定量的供試品，溶解后過濾，取濾液于規(guī)定波長測吸收度，不得超過規(guī)定值。第三法色差計法使用色差計測定供試品溶液與水的色差，與標(biāo)準(zhǔn)比色液與水的色差比較。七、易炭化物檢查法檢查藥物中遇硫酸易炭化或易被氧化呈色的微量有機雜質(zhì)。檢查方法供試品5ml硫酸比色管振搖、靜置，與比色液比較。比色液1.“溶液顏色檢查”項下的標(biāo)準(zhǔn)比色液；2.由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的對照液；3.高錳酸鉀液。注意事項1.置白色背景下平視比較；2.若供試品為固體，應(yīng)先研細(xì)；若不溶需加熱；3.按規(guī)定控制硫酸的濃度、反應(yīng)溫度與時間。八、澄清度檢查法檢查藥品溶液的渾濁程度是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)，用作注射劑的原料藥，應(yīng)作此項檢查。檢查方法濁度標(biāo)準(zhǔn)液稀釋后供試溶液同置比濁用玻璃管同置傘棚燈下，從水平方向觀察、比較。中國藥典規(guī)定用濁度標(biāo)準(zhǔn)液作為澄清度檢查的標(biāo)準(zhǔn)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制

1.00％硫酸肼溶液與10％烏洛托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液濁度標(biāo)準(zhǔn)原液濁度標(biāo)準(zhǔn)液（5個級號）稀釋稀釋原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。藥典中規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。注意事項1.光線和溫度對混懸液的形成有影響，因此，規(guī)定在251C制備濁度標(biāo)準(zhǔn)儲備液。2.溶劑：水、酸、堿、有機溶劑有機酸的堿金屬鹽類藥物強調(diào)用“新沸過的冷水”3.供制備注射用的原料藥物往往既要檢查溶液“澄清度”又要檢查“溶液顏色”。九、熾灼殘渣檢查法指有機藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)的硫酸鹽檢查方法規(guī)定量供試品置坩堝精密稱定，在電爐上熾灼至炭化冷至室溫，加硫酸0.5-1.0ml低溫加熱高溫電爐上熾灼至恒重計算熾灼殘渣%＝殘渣及坩堝重－空坩堝重供試品重×100%1.中國、美國、英國及日本四個國家的藥典對于熾灼殘渣恒重的要求不相同，對灼燒溫度要求也不一。2.供試品的取用量應(yīng)根據(jù)熾灼殘渣限量和稱量誤差決定。3.為避免供試品灼燒時驟熱膨脹濺出，坩堝可斜置，緩慢加熱直至灰化。4、在進(jìn)行高溫爐內(nèi)灼燒前務(wù)必將硫酸趕盡，以免硫酸腐蝕爐壁，造成漏電。十、干燥失重測定法指藥品在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，以百分率表示。主要是水分及其它揮發(fā)性物質(zhì)恒重：指供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后的重量差異在0.3mg以下的重量。熾灼至恒重的第二次以及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)熾灼30min后進(jìn)行。干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1h后進(jìn)行。（一）常壓恒溫干燥法適用于受熱穩(wěn)定的藥物供試品105℃干燥干燥至恒重的扁平稱瓶精密稱定精密稱定干燥至恒重干燥失重%＝稱量瓶與加入樣品重－恒重后稱量瓶與樣品重供試品重×100%注意事項1.干燥溫度：一般為105oC，含結(jié)晶水的藥物可提高溫度。2.樣品厚度：一般不超過5mm，如為疏松物質(zhì)，厚度不超過10mm；如為大顆粒結(jié)晶，應(yīng)研細(xì)至粒度約2mm。3.放入烘箱中時，應(yīng)將瓶蓋取下，放于稱量瓶旁，或?qū)⑵可w半開進(jìn)行干燥；取出時，須將瓶蓋蓋好，置干燥器中放冷至室溫，然后稱定重量。4.藥物含有較大量水分，熔點又較低，應(yīng)先在低溫干燥，使大部分水分除去后，再于規(guī)定溫度干燥至恒重。（二）減壓干燥法與恒溫減壓干燥法適用于熔點低，受熱分解的藥物采用減壓干燥器或恒溫減壓干燥箱時，除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa(20mmHg)以下。溫度為60℃。干燥器中常用的干燥劑：無水氯化鈣、硅膠、P2O5

恒溫減壓干燥箱中常用的干燥劑：P2O5

（三）干燥劑干燥法適用于受熱易分解或易升華的藥物常用的干燥劑：硅膠、濃硫酸、P2O5

。將供試品置于干燥器內(nèi)，利用干燥器內(nèi)放置的干燥劑，吸收供試品中的水分，干燥至恒重。（四）熱分析法在程序控制溫度下測量物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)與溫度關(guān)系的一類技術(shù)。1.熱重分析(thermogravimetricanalysis,TGA)記錄質(zhì)量隨溫度變化的曲線，從而準(zhǔn)確的測量物質(zhì)的質(zhì)量變化及變化速度。適用于：原料和藥品的濕度檢查，尤其是貴重或在空氣中易氧化藥物的干燥失重測定。如：草酸鈣2.差熱分析測量待測物與參比物間溫差與溫度關(guān)系一種技術(shù)。可研究在短時間內(nèi)樣品比熱發(fā)生較大變化的反應(yīng)，或體系與環(huán)境有較大熱交換的反應(yīng)。如果待測物與參比物熱容大致相同，被測物如發(fā)生熱效應(yīng)，在熱分析曲線上就會有峰出現(xiàn)。因此，差熱曲線上吸熱、放熱峰的個數(shù)、形狀、位置與相應(yīng)溫度可用于定性鑒別待測物質(zhì)或其多晶型；亦可檢查待測物純度。3.差示掃描量熱法測量傳輸給待測物與參比物的能量差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。分為功率補停型和熱流型兩種基本類型。適于：待測物質(zhì)的鑒別、晶型檢查、純度檢查、熔點和水分等的測定。較差熱分析法更適于測量物質(zhì)在化學(xué)變化和物理變化過程中焓的變化。十一、水分測定法包括結(jié)晶水和吸附水。Ch.p、USP及BP均收載了費休氏法和甲苯法費休氏法原理:利用碘氧化二氧化硫時需要一定量的水參加反應(yīng)。根據(jù)消耗碘的量可以測定出水分含量。試驗條件加入無水吡啶和無水甲醇，定量地吸收HI和SO3，形成氫碘酸吡啶和穩(wěn)定的甲基硫酸氫吡啶。十二、有機溶劑殘留量測定法有機殘留溶劑：指在合成原料藥、輔料或制劑生產(chǎn)過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機溶劑。中國藥典2000版僅對苯等7種有機殘留溶劑作出具體規(guī)定，2005版附錄對此進(jìn)行較大幅度修訂，殘留溶劑控制種類和限量與人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范的國際協(xié)調(diào)會一致。殘留有機溶劑按毒性程度分為三類：一類毒性大，限制使用；二類有一定毒性，限量使用；三類毒性較小，推薦使用，

三類溶劑的殘留量應(yīng)符合表(P62-63)中要求，對其它溶劑應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝制定相應(yīng)的限度。中國藥典2005規(guī)定檢查方法為GC，可采用填充柱亦可用毛細(xì)管柱，通常使用FID檢測器。對含鹵素殘留溶劑如三氯甲烷等，采用ECD檢測器靈敏度更高。

㈠中國藥典法1.系統(tǒng)適用性試驗⑴用待測物色譜峰計算，填充柱理論塔板數(shù)大于1000,而毛細(xì)管色譜柱則大于5000⑵色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰峰的分離度應(yīng)大于1.5。⑶以內(nèi)標(biāo)法測定時,對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,所得待測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5%;若以外標(biāo)法計算,所得待測物峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5%.

2.測定方法⑴毛細(xì)管頂空進(jìn)樣等溫法適于：檢查有機溶劑數(shù)量不多，且極性差異較小的情況頂空條件選擇：據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空溫度，同時應(yīng)避免供試品可能產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物對測定的干擾。不適于頂空法測定的殘留溶劑：甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基咯烷酮⑵毛細(xì)管頂空進(jìn)樣程序升溫法：檢查有機溶劑數(shù)量較多且極性差異較大的情況。⑶溶液直接進(jìn)樣法：采用填充柱或適宜極性毛細(xì)管柱。㈡靜態(tài)頂空進(jìn)樣法（自學(xué)）。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、色譜分析法㈠薄層色譜法：1.雜質(zhì)對照品法方法：據(jù)雜質(zhì)限量，其供試品溶液和一定濃度的雜質(zhì)對照品溶液，分別點樣同一硅膠薄層板上，展開、定位、檢查，供試品中所含雜質(zhì)的斑點，不得超過相應(yīng)雜質(zhì)的對照斑點。如：枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查。適用于已知雜質(zhì)并能制備雜質(zhì)對照品的情況。2.供試品溶液自身稀釋對照法適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不清，或無雜質(zhì)對照品的情況。僅限于雜質(zhì)斑點與主成分斑點顏色相同或相近情況下使用.如：吡羅昔康中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法：將供試品溶液按限量要求稀釋至一定濃度作為對照溶液，與供試品溶液分別點于同一薄層板上，展開、定位、檢查。供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點不得深于對照溶液所顯主斑點顏色。當(dāng)供試品中有多個雜質(zhì)存在時，可配制幾種限量的對照溶液，加以比較。3.雜質(zhì)對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法并用：適用于藥物中有多個雜質(zhì)，有的有對照品而有的無對照品的情形。如：硫酸奈替米星中有關(guān)物質(zhì)的檢查配制三種濃度的對照溶液，用供試品溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)溶液1、標(biāo)準(zhǔn)溶液2，取西梭米星對照品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液3，經(jīng)與供試品溶液一同點樣、展開、定位后，判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，其顏色與標(biāo)準(zhǔn)溶液3所顯主斑點相比不得更深；其它雜質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)溶液1所顯主斑點相比均不得更深，如有一個斑點超過，應(yīng)不深于標(biāo)準(zhǔn)溶液2主斑點。4.對照藥物法：當(dāng)無合適的雜質(zhì)對照品，尤其是供試品顯示的雜質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照藥物所含待檢雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。如，馬來酸麥角新堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法：用馬來酸麥角新堿樣品配制高低濃度溶液1、2，用其對照品配制溶液3，分別點于同一硅膠板，展開、定位。判定：溶液1與溶液3比較：主斑點顏色與位置應(yīng)一致，雜質(zhì)斑點顏色應(yīng)不深于3，并不能有3以外的雜質(zhì)斑點；溶液2除主斑點外，不得顯雜質(zhì)斑點。為保證薄層系統(tǒng)符合要求，中國藥典2005增加了系統(tǒng)適用性試驗：⑴檢測靈敏度：指雜質(zhì)檢查時，采用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照品溶液在規(guī)定色譜條件下，在同一薄層板上點樣、展開、檢視，前者應(yīng)顯示清晰的斑點。⑵比移值：可用比移值說明主斑點或雜質(zhì)斑點的位置。⑶分離效能：雜質(zhì)對照品用供試品自身稀釋對照溶液或同品種對照溶液溶解制成混合對照溶液的色譜圖中，顯示兩個清晰分離的斑點。㈡高效液相色譜法1.內(nèi)標(biāo)加校正因子測定法：用于有對照品的雜質(zhì)、能夠測定雜質(zhì)校正因子的情況。先進(jìn)樣加有內(nèi)標(biāo)物的對照品溶液，測定雜質(zhì)校正因子方法再進(jìn)樣加有內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液，求雜質(zhì)濃度2.外標(biāo)測定法：用于有對照品的雜質(zhì)，且進(jìn)樣量可精確控制的情況。方法配制雜質(zhì)對照品溶液和供試品溶液，分別取一定量注入色譜儀，測定對照品和供試品中雜質(zhì)的峰面積，按外標(biāo)法計算雜質(zhì)的含量。3.加校正因子的主成分自身對照法方法在方法建立時，采用雜質(zhì)對照品和藥物對照品配置一定濃度的溶液，進(jìn)行色譜分離、分析后，按下式計算所得:進(jìn)行雜質(zhì)檢查時，可不用雜質(zhì)對照品。但是建立方法時，需要利用雜質(zhì)對照品。測定雜質(zhì)含量時，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)濃度的溶液，作為對照溶液調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分色譜峰高約達(dá)滿量程的10%-25%，分別取供試品溶液和對照品溶液進(jìn)樣，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積，將這些峰面積分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算各雜質(zhì)的含量。4.不加校正因子的主成分自身對照法：用于單一雜質(zhì)含量較少、無法得到雜質(zhì)對照品因而無法獲得校正因子、雜質(zhì)結(jié)構(gòu)與主藥結(jié)構(gòu)相似,其響應(yīng)因子差別不會太大的情況下。①按規(guī)定，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)臐舛?，作為對照溶液。②分別取供試品溶液和對照品溶液進(jìn)樣，計算供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積及其總和，與對照溶液主成分峰面積比較，以確定雜質(zhì)是否超過限量。例：氧氟沙星中有關(guān)物質(zhì)的檢查。方法方法：取供試品溶液適量，進(jìn)樣，經(jīng)高效液相色譜分離、測定后，計算各雜質(zhì)峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不得超過限量。5.峰面積歸一法：粗略考察供試品中雜質(zhì)。在雜質(zhì)與主成分結(jié)構(gòu)差異較大時,存在測量誤差大缺陷，不宜于”微量雜質(zhì)”檢查。主峰雜質(zhì)1雜質(zhì)2雜質(zhì)3溶劑峰㈢氣相色譜法如：氯貝丁酯中對氯酚和揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查與高效液相色譜法相同的有內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定法、外標(biāo)法和峰面積歸一法測定法，不同的有標(biāo)準(zhǔn)加入法。該法是將一定量雜質(zhì)對照品溶液精密加入到供試品溶液中，據(jù)內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法測定雜質(zhì)的含量，再扣除加入的對照品溶液含量，即得供試品溶液中雜質(zhì)含量。除藥物中殘留溶劑外，一些揮發(fā)性特殊雜質(zhì)也可采用氣相色譜法檢查。二、光譜分析法㈠紫外分光光度法：當(dāng)雜質(zhì)在某一波長處有