微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中藥與制藥

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中藥與制藥第一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日目的要求:1、了解微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備

2、了解空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法

3、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法實(shí)驗(yàn)一藥品的微生物限度檢查（一）實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌設(shè)備空氣和皮膚細(xì)菌檢查方法第二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日一.藥品的微生物限度檢查（一）1.口服藥物的微生物檢查:①大腸桿菌的檢查：②細(xì)菌總數(shù)的檢查2.外用藥物的微生物檢查:①綠膿桿菌的檢查：②金黃色葡萄球菌的檢查：

第三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日口服藥外用藥藥品的微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)方法（一）

1.藥品的預(yù)處理2克藥品加20毫升生理鹽水，研磨制成懸液

2.細(xì)菌培養(yǎng)外服藥口用藥藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液中藥品混懸液10毫升加入膽鹽乳糖增菌液中藥品混懸液10毫升加入亞碲酸鈉增菌液中37℃,24小時(shí)37℃,24小時(shí)第四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日

將剩余口服藥以10-110-210-310-4

進(jìn)行稀釋(以生理鹽水稀釋)

3.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定加溶化的瓊脂培養(yǎng)基中，混勻，冷卻后,置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)

。取三個(gè)中試管各管加9ml生理鹽水從剩余10ml懸液中取1ml加入第一個(gè)稀釋管中1ml10-110-410-210-39ml生理鹽水從上述三個(gè)稀釋管中各取1ml1ml10-110-410-210-3第五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日二.空氣、皮膚細(xì)菌檢查方法(驗(yàn)證)三.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌儀器設(shè)備：高壓蒸汽滅菌鍋消毒煮沸器G6玻璃濾菌器裝置潔凈工作臺(tái)移動(dòng)式紫外光燈鼓風(fēng)式干烤箱紫外線殺菌標(biāo)本。第六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日厭氧工作站催化劑（鈀粒）厭氧培養(yǎng)罐電熱恒溫培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱第七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日一、目的要求:1、了解細(xì)菌培養(yǎng)接種技術(shù)

2、掌握細(xì)菌基本形態(tài)

3、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.藥物的微生物限度檢查（二）2.空氣、皮膚細(xì)菌檢查結(jié)果測(cè)定。3.講授基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法（營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯）。4.培養(yǎng)基的種類(lèi)和用途普通培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基5.細(xì)菌在三種不同物理性狀培養(yǎng)基上的接種方法(基本技能)

液體培養(yǎng)基 平板培養(yǎng)基 斜面培養(yǎng)基 雙糖含鐵半固體斜面培養(yǎng)基6.顯微鏡下觀察

細(xì)菌的基本形態(tài):球菌、枯草桿菌、霍亂弧菌。特殊結(jié)構(gòu)：肺炎莢膜、變形鞭毛、破傷風(fēng)芽胞。實(shí)驗(yàn)二藥品的微生物限度檢查（二）細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查及培養(yǎng)接種技術(shù)第八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日一、空氣、皮膚的細(xì)菌檢查結(jié)果

1、記錄空氣微生物培養(yǎng)結(jié)果（要記錄本人所在實(shí)驗(yàn)臺(tái)的結(jié)果）菌落大小、邊緣、顏色、粗糙（光滑）2、記錄皮膚微生物培養(yǎng)結(jié)果（要記錄本人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果）比較消毒前后細(xì)菌菌落數(shù)，菌落特點(diǎn)。第九頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基分類(lèi)根據(jù)物理性狀分類(lèi)：液體培養(yǎng)基主要用于增菌半固體培養(yǎng)基用于檢測(cè)動(dòng)力及保存菌種固體培養(yǎng)基用于分離鑒定細(xì)菌根據(jù)用途分類(lèi)：基礎(chǔ)培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基血液瓊脂培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基SS培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基雙糖鐵培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基庖肉培養(yǎng)基第十頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備程序調(diào)配→矯正pH（7.0-7.6）→分裝→滅菌（121.3℃，20-30分鐘）→放入冰箱冷藏備用。因高壓之后pH值會(huì)下降0.1左右，所以矯正pH時(shí)應(yīng)比所需的pH高。鑒定是否有菌可將培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，然后觀察。第十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日方法1.平板劃線接種法（1）平行劃線法（2）分區(qū)劃線法2.瓊脂斜面的接種方法3.液體培養(yǎng)基接種法4.半固體接種法第十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日平行劃線法第十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日分區(qū)劃線法第十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日菌落第十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日斜面移種技術(shù)第十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日菌苔第十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日液體移種技術(shù)第十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日穿刺技術(shù)第十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日取出前次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)物觀察：

1.口服藥物1)細(xì)菌鑒定：在膽鹽乳糖增菌液中有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)：增菌液變混濁―――――有

-----接種在伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基上面。方法：分區(qū)劃線接種。

2)細(xì)菌總數(shù)測(cè)定：選擇30-300個(gè)菌落平板，細(xì)菌總數(shù)＝菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)藥物的微生物限度檢查方法（二）第二十頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日2.外用藥1)判定膽鹽乳糖增菌液培養(yǎng)物及亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)：增菌液變混濁―――有2)細(xì)菌鑒定：（1）將膽鹽乳糖增菌液培養(yǎng)物無(wú)菌接種在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上面。方法：斜面化線接種；（2）將亞碲酸鈉增菌液培養(yǎng)物，無(wú)菌接種在卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上面。方法：分區(qū)劃線接種。

37℃恒溫孵育箱24小時(shí)培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。第二十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌基本形態(tài)球菌桿菌螺形菌第二十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日葡萄球菌第二十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日鏈球菌第二十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日大腸埃希菌第二十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日枯草桿菌第二十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日霍亂弧菌第二十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)鞭毛莢膜芽孢第二十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日破傷風(fēng)梭菌spore第二十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日一、目的要求:1、了解細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察

2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.藥物的微生物限度檢查（三）2.細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察

1）液體培養(yǎng)基---沉淀、渾濁、表面生長(zhǎng)現(xiàn)象。

2）三葡、三鏈、大腸與副傷乙培養(yǎng)基的菌落特征、溶血環(huán)觀察。

3）雙糖含鐵培養(yǎng)基---動(dòng)力、氣體、硫化氫、分解乳糖觀察。

4）結(jié)核桿菌菌落的觀察。 3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)

1）中草藥---大蒜汁、黃連、黃芩、黃柏。

2）抗生素---青霉素、慶大、氨芐、新諾明、生理鹽水。實(shí)驗(yàn)三藥品的微生物限度檢查（三）微生物的形態(tài)學(xué)檢查及藥物的敏感性試驗(yàn)第三十頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日1）從伊紅美蘭瓊脂平板培養(yǎng)基上-----

挑取黑色帶有金屬光澤的濕潤(rùn)菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng)。

2）觀察外用藥物在16烷三甲基溴化胺瓊脂斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況。記錄被檢菌色素的溶解性質(zhì)、液化明膠的狀況及菌苔粘稠度等。

革蘭氏染色鏡下觀察其菌落形態(tài)。根據(jù)上述被檢菌落的生物性質(zhì)和狀況及細(xì)菌形態(tài)，確定該被檢菌的名稱(chēng)。

3）從卵黃高鹽瓊脂平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，挑取黃色的濕潤(rùn)菌落，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面，進(jìn)行細(xì)菌的純培養(yǎng)。藥物的微生物限度檢查（三）第三十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日2.細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象及代謝產(chǎn)物的觀察混濁生長(zhǎng)菌膜菌沉淀均勻渾濁對(duì)照第三十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日菌膜生長(zhǎng)第三十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日第三十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日第三十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日第三十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日腸道桿菌雙糖鐵培養(yǎng)基結(jié)果比較葡萄糖乳糖硫化氫大腸桿菌副傷寒桿菌痢疾桿菌第三十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日革蘭染色步驟

1.制片：取標(biāo)本（球桿混合物、牙垢）涂片、干燥、固定2.初染：結(jié)晶紫——1min——水洗3.媒染：碘液——1min——水洗4.脫色：95%酒精——30s——水洗5.復(fù)染：沙黃——1min—水洗、濾紙吸干6.油鏡觀察：第三十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日第三十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日1、制片

涂片、干燥、固定第四十頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日2.結(jié)晶紫初染1min——水洗第四十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日3.碘液媒染1min——水洗第四十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日4.95%酒精脫色30s——水洗第四十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日5.沙黃復(fù)染1min——水洗、濾紙吸干第四十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日第四十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日6.油鏡觀察

結(jié)果革蘭陽(yáng)性菌：紫色革蘭陰性菌：紅色第四十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日3.中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)第四十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日紙片法第四十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)四藥物的微生物限度檢查（四）病毒和細(xì)菌及其他病原微生物一、目的要求1、了解抗酸染色方法及各種病毒和細(xì)菌的菌落形態(tài)2、掌握藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序和方法二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、藥物的微生物限度檢查（四）1）將口服藥物中的細(xì)菌分別接種：①蛋白胨水培養(yǎng)基；②葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；③枸櫞酸鹽（西蒙氏）培養(yǎng)基。同時(shí)接種產(chǎn)氣桿菌于上述培養(yǎng)管做對(duì)照，以備進(jìn)行IMViC試驗(yàn)。2）取接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上面的外用藥物中細(xì)菌進(jìn)行血漿凝固酶檢測(cè),依據(jù)其反應(yīng)結(jié)果,確定該菌的性質(zhì)及名稱(chēng)。2、抗酸染色 3、真菌培養(yǎng)物的觀察------黑曲霉、木霉、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌絲，酵母菌菌落的觀察。4、記錄中草藥、抗生素抑菌試驗(yàn)結(jié)果5、觀察雞胚的結(jié)構(gòu) 第四十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日生化反應(yīng)管待檢細(xì)菌對(duì)照菌(產(chǎn)氣桿菌)蛋白胨水培養(yǎng)基2支管接種1支管接種1支管葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基4支管接種2支管接種2支管枸櫞酸鹽培養(yǎng)基2支管接種1支管接種1支管接種細(xì)菌的對(duì)應(yīng)生化反應(yīng)管第五十頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日血漿凝固酶試驗(yàn)

玻片法第五十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日抗酸染色原理:結(jié)核分枝桿菌含脂質(zhì)多,不易著色,若加溫或延長(zhǎng)時(shí)間使其著色后,再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色,稱(chēng)抗酸染色.經(jīng)此染色后,結(jié)核分枝桿菌呈紅色,其它呈藍(lán)色.

步驟２．抗酸染色第五十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸復(fù)紅初染（加熱、蓋濾紙片）5min---水洗；3％鹽酸酒精脫色（15S,水洗）；美蘭復(fù)染（1min，水洗）-濾紙吸干鏡檢?？顾崛旧襟E第五十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)核桿菌第五十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日抗生素體外抑菌試驗(yàn)（二）

記錄紙片法結(jié)果測(cè)量抑菌環(huán)直徑

第五十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日病毒的分離培養(yǎng)—雞胚接種動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒的培養(yǎng)方法：第五十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日病毒的分離培養(yǎng)—雞胚接種第五十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日病毒名稱(chēng)接種部位雞胚胚齡（天）痘類(lèi)病毒絨毛尿囊膜10～13流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9～11嗜神經(jīng)病毒卵黃囊5～8初次分離標(biāo)本羊膜腔10～12病毒的分離培養(yǎng)—雞胚培養(yǎng)第五十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，2022年，8月28日菌絲第五十九頁(yè)，共