微生物的培養(yǎng)幻燈片

微生物的培養(yǎng)幻燈片第一頁，共三十頁，2022年，8月28日細菌主要是以二分裂的方式進行增殖（如右圖）2.細菌的繁殖3.細菌的菌落⑴.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。第二頁，共三十頁，2022年，8月28日幾種菌落及其形態(tài)第三頁，共三十頁，2022年，8月28日幾種菌落及其形態(tài)第四頁，共三十頁，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供微生物生長繁殖使用的營養(yǎng)基質。1.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內容)2.培養(yǎng)基的種類和用途3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。第五頁，共三十頁，2022年，8月28日劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質化學成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類、用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業(yè)生產培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第六頁，共三十頁，2022年，8月28日分離導入了目的基因的受體細胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基back第七頁，共三十頁，2022年，8月28日血清中含有：①多種蛋白質（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。第八頁，共三十頁，2022年，8月28日微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質是：㈡.微生物需要的營養(yǎng)物質及功能1.碳源2.氮源3.生長因子4.無機鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質和一些代謝產物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源第九頁，共三十頁，2022年，8月28日①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質。主要用于合成蛋白質、核酸及含N的代謝產物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見的生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第十頁，共三十頁，2022年，8月28日㈢.培養(yǎng)基（三）培養(yǎng)基配置原則1）目的要明確2)營養(yǎng)要協(xié)調3）PH要適宜第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日㈣.無菌技術(注意)1.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。⑴消毒定義：利用溫和的化學或物理方法，殺死部分微生物的過程。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別⑵滅菌的定義：以強烈的化學試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒：紫外照射30min，房間、儀器設備 （噴灑石碳酸和煤酚皂）⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是

消毒法；100℃煮沸5-6min（2）對一些不耐高溫的液體，則使用

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑

等溶液以增強消毒效果，然后使用

進行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用

進行消毒；（5）飲水水源用

進行消毒。第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是

煮沸消毒法；100℃煮沸5-6min（2）對一些不耐高溫的液體，則使用

巴氏

消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒效果，然后使用

紫外線進行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用75%酒精進行消毒；（5）飲水水源用氯氣進行消毒。第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用

滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用

滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

灼燒

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽

滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日二.實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化4.滅菌:

將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日倒平板操作第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法平板劃線的操作第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)則的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日第二十六頁，共三十頁，2022年，8月2