spe選擇使用指南課件

SPE選擇使用指南目錄SPE基本內涵SPE的裝置及操作SPE柱固定相的介紹SPE柱的選擇SPE(solidphaseextraction)基本原理利用固定相將液體樣品中的待測組分吸附，與樣品中基體和干擾組分分離，然后用洗脫液洗脫，達到分離或富集待測組分目的。有時候，可以讓感興趣的組分（分析物）直接通過固定相而不被保留，同時大部分干擾物被保留在固定相上，從而得到分離。固相萃取過程固相萃取過程注意事項SPE柱預處理/平衡淋洗和洗脫過程淋洗溶劑必須洗掉盡量多的干擾組分，但不能強到可以洗脫任何一個分析物的程度。洗脫劑強度要合適，洗脫溶劑用量一般0.5-0.8ml/100mg固定相固相萃取技術的重要用途目標物的萃取，樣品的凈化。微量目標物的富集?；|的轉換－如將目標物從水相轉換為有機相。除鹽－特別是在蛋白質純化過程中。衍生化－分析物吸附在SPE柱上進行衍生，然后洗脫。分組－按照目標物的不同性質分步洗脫。SPE與HPLC比較SPE的基本原理和HPLC相同但目的不同。HPLC是要在短時間內將各化和物分離并保持好的峰形。SPE是要從母液中分離人們感興趣的化合物并將其濃縮。目前用的最廣泛的是鍵合硅膠柱(BONDEDSILICACOLUNM)及聚合物柱。SPE與HPLC分辨率比較SPE的固定相吸附型固定相：采用極性較強的硅膠、硅藻土和氧化鋁等吸附劑作為固定相填料。鍵合硅膠固定相：通過化學反應的方法把各種有機官能團共價鍵合到硅膠表面的游離羥基上。有機聚合樹脂及其鍵合固定相：有機聚合物吸附劑多為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，聚甲基丙烯酸甲酯等，也可將某些官能團鍵合到樹脂上，如－SO3H，－COOH。鍵合硅膠固定相正相：鍵合基團為CN(腈基)、DIOL（二醇基）、NH2（氨基）可作為正相的固定相。正相固定相是極性的，用來保留極性物質。反相：C18（十八烷基）、C8（辛烷基）、C2（乙基）、CH（環(huán)己烷基）、PH（苯基）都是反相固定相。反相固定相用來保留非極性或弱極性的分析物。離子交換：鍵合基團為丙磺酸基（PRS）、SCX(苯磺酸基)、二乙基丙基胺（DEA）、三甲基丙基胺（SAX）可作為離子交換固定相。鍵合硅膠非極性固定相萃取柱硅膠鍵合C18柱（octadecyl-silica，ODS）可以從強極性的溶劑中吸附非極性到中等極性的化合物應用：中等極性到非極性化合物,如抗生素、咖啡因、藥物、染料、芳香油、脂溶性維生素、殺菌劑、除草劑、農藥、碳水化合物、苯酚、類固醇、表面活性劑、茶堿等。非極性吸附能力最強，選擇性較差。由于樣品中的鹽在C18柱上沒有保留，因此可作為優(yōu)秀的除鹽柱。常用非極性固定相C8：與C18相似，適合于非極性到中等極性的化合物，對非極性化和物的保留較C18稍弱。-苯基（PH柱）：與C8類似，但選擇性更好，保留時間更短。-C4：疏水性弱，適合于多肽和蛋白質的萃取。-環(huán)己基（CH柱）：與苯基柱類似?；衔锏臉O性和吸附劑的極性越接近，產生的吸附越強。C8材料的吸附作用鍵合硅膠極性固定相萃取柱-NH2（氨基）：較強的氫鍵結合能力，對某些多官能團化合物如甾體、強心甙等有較好的分離能力。

a)正相萃取:適用非極性樣品溶液中吸附極性化合物。

b)弱陰離子交換萃取:適用于水溶液樣品中碳水化合物、弱陰離子和有機酸化合物。-CN（氰基）：a)正相萃?。哼m用非極性樣品溶液中吸附極性化合物，如酚類，類固醇、b)反相萃取：適用于水溶液樣品中等極性的化合物。-Diol(二醇基):正相萃取，適用于分離有機酸、甾體和蛋白質。形成氫鍵的強弱:-NH2>-CN>Diol小結

主要由極性作用力起作用，包括：氫鍵,偶極力/偶極力,誘導偶極力,如：-OH,-NH3,-SO3,羰基,芳香環(huán)及含氧,氮,硫,磷等雜原子的基團。非極性環(huán)境有利于吸附劑和分析物之間的極性作用力。極性環(huán)境有利于破壞吸附劑和分析物之間的極性作用力。環(huán)境離子強度大也不利于吸附劑和分析物之間的極性作用力。硅膠鍵合離子交換柱填充劑為硅膠基質的離子交換官能團有：季胺、氨基、二氨基、苯磺酸基、羧基等。對于酸性化合物，如有機酸、無機陰離子、酸性蛋白等，一般采用陰離子交換SPE柱。對于堿性化合物，如有機胺、金屬離子、兒茶酚胺和堿性蛋白等，采用陽離子交換SPE柱。主要的硅膠鍵合離子柱SAX柱（季銨鹽柱）：是最強的陰離子交換劑，，pKa>14，這種填料在溶液中總是帶正電，對于弱陰離子是很好的SPE填料，如羧酸類化合物。WAX柱（伯銨鹽柱）：是弱陰離子交換劑，適用于強陰離子和弱陰離子的分離回收。SCX柱（丙基苯磺酸基柱）：是強陽離子交換劑，具有很低的pKa值（<<1），主要作用力是非極性、陽離子交換，目標化合物可以用一種能夠同時破壞非極性及離子作用力的溶劑洗脫。如甲醇/HCl。WCX柱（羧甲基柱）：是弱陽離子交換劑，適用于強陽離子和弱陽離子的分離回收。小結具有可離子化功能團的化合物可以通過離子交換劑從低離子強度（<0.1M）的水溶液中萃取出來。pH值對離子作用力影響很大。環(huán)境的離子強度對目標化合物的吸附影響很大。選擇SPE萃取機理反相柱非極性化合物正相柱極性化合物離子交換柱可生成陽離子/可生成陰離子化合物

在選擇了萃取機理后，就要選擇SPE填料。對一個分析，常常有多于一種SPE填料可以選用。為了縮短建立方法的時間，可以平行進行多種同類的SPE柱萃取，如C18、C8、CN、苯基柱，以找出最佳的填料。選擇SPE柱PH對SPE的影響反向SPE柱：如果要吸附分析物，柱子及樣品的pH應該調節(jié)到有利分析物被吸附的范圍。相反，也可以調節(jié)pH使雜質被吸附在SPE柱上，而分析物則通過SPE柱沒有保留。正相SPE柱：由于正相SPE柱使用的都是有機溶劑，所以pH在