醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)二抗酸染色

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.實(shí)驗(yàn)一結(jié)果的觀察和分析；

2.細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)技術(shù)；

3.抗酸染色；

4.實(shí)驗(yàn)考試。第1頁/共14頁第一頁，共15頁。一、實(shí)驗(yàn)一結(jié)果的觀察和分析

空氣中細(xì)菌

咽喉部細(xì)菌第2頁/共14頁第二頁，共15頁。二、內(nèi)毒素的檢測(cè)技術(shù)

（鱟試驗(yàn)）

1.內(nèi)毒素檢測(cè)方法

家兔發(fā)熱法，鱟試驗(yàn)。第3頁/共14頁第三頁，共15頁。2.鱟試驗(yàn)原理3.材料鱟試劑，內(nèi)毒素試劑，鱟試劑專用溶解水，無菌無熱源質(zhì)吸管

內(nèi)毒素（LPS）

激活

凝固蛋白原凝固蛋白（溶解狀態(tài)）

（凝膠狀態(tài)）凝固酶原凝固酶第4頁/共14頁第四頁，共15頁。4.方法步驟（每4個(gè)人一組，兩支鱟試劑，一支實(shí)驗(yàn)一支對(duì)照）（1）取兩支鱟試劑打開，分別加入0.1ml鱟試劑溶解水，使之溶解。（2）其中一支加入0.1ml內(nèi)毒素，標(biāo)記上實(shí)驗(yàn)組，另一支加入0.1ml溶解水，作為對(duì)照。（3）垂直放入37℃溫箱，20-30min觀察結(jié)果。5.結(jié)果及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)凝固，對(duì)照組不出現(xiàn)凝固第5頁/共14頁第五頁，共15頁。

三、抗酸染色

Acidfaststain第6頁/共14頁第六頁，共15頁。（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握分枝桿菌抗酸染色的操作方法和意義。

2.熟悉抗酸染色的原理。（二）實(shí)驗(yàn)原理

分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來促使其著色，同時(shí)分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。

齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。第7頁/共14頁第七頁，共15頁。

1.細(xì)菌：卡介苗（BCG）。

2.抗酸染液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、堿性美蘭溶液。

3.其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片，玻片夾等。（三）實(shí)驗(yàn)材料第8頁/共14頁第八頁，共15頁。（四）方法與步驟1.細(xì)菌涂片的制備

涂片干燥固定

2.染色1）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2~3滴，在火焰高處（2~10cm）徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開，加熱3~5min，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：3%鹽酸酒精脫色30s~1min；用水沖洗。3）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1min；用水沖洗。4）玻片用吸水紙吸干，油鏡觀察。第9頁/共14頁第九頁，共15頁。（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果未染色

初染后脫色后復(fù)染后初染脫色復(fù)染石炭酸復(fù)紅鹽酸酒精堿性美蘭紅色為抗酸染色陽性；藍(lán)色為抗酸染色陰性。第10頁/共14頁第十頁，共15頁。

結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝狀生長(zhǎng)；背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。第11頁/共14頁第十一頁，共15頁。（六）注意事項(xiàng)1.無菌操作；2.染色要充分，掌握好時(shí)間；3.初染時(shí)加熱勿使染液沸騰，干涸。第12頁/共14頁第十二頁，共15頁。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1.內(nèi)毒素的檢測(cè)（鱟試驗(yàn)）原理，材料，方法及結(jié)果。

2.抗酸染色的原理，材料，方法和結(jié)果（畫圖）。

實(shí)驗(yàn)考試第13頁/共14頁第十三頁，共15頁。感謝您的觀看。第14頁/共14頁第十四頁，共15頁。內(nèi)容總結(jié)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。一、實(shí)驗(yàn)一結(jié)果的觀察和分析。第2頁/共14頁。溶解水，使之溶解。實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)凝固，對(duì)照組不出現(xiàn)凝固。2.抗酸染液：石炭酸復(fù)紅液、