油鏡及熒光顯微鏡的原理及使用方法

光學顯微鏡的使用方法光學顯微鏡注意事項熒光顯微鏡的使用原理123第1頁/共22頁第一頁，共23頁。光學顯微鏡光學顯微鏡（OpticalMicroscope，簡寫OM）是利用光學原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細結(jié)構(gòu)信息的光學儀器。第2頁/共22頁第二頁，共23頁。光學顯微鏡的使用方法低、高倍鏡觀察進一步放大的部分移到視野的中心第3頁/共22頁第三頁，共23頁。光學顯微鏡的使用方法集光器上升到最高位置光圈開到最大第4頁/共22頁第四頁，共23頁。光學顯微鏡的使用方法轉(zhuǎn)換油鏡時，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油第5頁/共22頁第五頁，共23頁。光學顯微鏡的使用方法用左眼觀察目鏡，并慢慢轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。不出現(xiàn)物象目標不理想加油區(qū)外加油區(qū)內(nèi)低倍→高倍→油鏡低倍→油鏡油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。第6頁/共22頁第六頁，共23頁。光學顯微鏡注意事項1.持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢；2.水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，

如果沾污應(yīng)立即擦凈；3.放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡；

4.不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞；5.使用完畢后，必須復原才能放回鏡箱內(nèi)。第7頁/共22頁第七頁，共23頁。熒光顯微鏡的使用原理第8頁/共22頁第八頁，共23頁。什么是熒光？概念：物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時釋放出的光。即：物質(zhì)吸收短波光，發(fā)射出的長波光。自發(fā)性熒光分類誘發(fā)性熒光細胞內(nèi)的成分經(jīng)短波長照射后，可以發(fā)出熒光細胞內(nèi)的成分經(jīng)紫外線照射后不發(fā)熒光，但與熒光染料結(jié)合后可呈現(xiàn)一定顏色的熒光一般很微弱，如葉綠素。如吖啶橙，能使細胞內(nèi)的DNA呈綠色熒光；RNA呈紅色熒光。第9頁/共22頁第九頁，共23頁。熒光顯微鏡熒光顯微鏡(Fluorescencemicroscope)是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。第10頁/共22頁第十頁，共23頁。第11頁/共22頁第十一頁，共23頁。多采用200W的超高壓汞燈作光源。原理：電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。作用：它發(fā)射很強的紫外和藍紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。注意：超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。汞燈光源第12頁/共22頁第十二頁，共23頁。激發(fā)濾板紫外光激發(fā)濾板紫

外藍光激發(fā)濾板400nm紫外光紫藍光激發(fā)濾板400nm可見光300-450nm光350-490nm光根據(jù)光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發(fā)濾板，提供一定波長范圍的激發(fā)光。第13頁/共22頁第十三頁，共23頁。分光鏡分光鏡反射短波，透射長波。短波激發(fā)光在分光鏡處反射，由物鏡到熒光物質(zhì)，產(chǎn)生的長波長發(fā)射光經(jīng)物鏡返回，并透過分光鏡。第14頁/共22頁第十四頁，共23頁。壓制濾板壓制濾板的作用是完全阻擋激發(fā)光通過，提供相應(yīng)波長范圍的熒光。紫外光壓制濾板紫

外藍光壓制濾板紫藍光壓制濾板可見光紫外光>510nm>460nm第15頁/共22頁第十五頁，共23頁。

熒光顯微鏡的種類

落射式

透射式

第16頁/共22頁第十六頁，共23頁。熒光顯微鏡的主要部件

透射式汞燈光源激發(fā)濾版暗場聚光鏡壓制濾版

落射式汞燈光源激發(fā)濾版分光鏡壓制濾版第17頁/共22頁第十七頁，共23頁。300-490nm>510nm520-560nm第18頁/共22頁第十八頁，共23頁。熒光顯微鏡的使用方法1．打開燈源，超高壓汞燈要預熱幾分鐘才能達到最亮點。2．落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾版／分光鏡／壓制濾板。透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾版，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的壓制濾板。

3．用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。4．放置標本片，調(diào)焦后即可觀察。第19頁/共22頁第十九頁，共23頁。熒光顯微鏡的使用方法注意事項： 1.末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷； 2.用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊油鏡； 3.高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開，需經(jīng)5分鐘后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。第20頁/共22頁第二十頁，共23頁。ThankYou第21頁/共22頁第二十一頁，共23頁。感謝您的觀看！第22頁/共22頁第二十二頁，共23頁。內(nèi)容總結(jié)光學顯微鏡的使用方法。進一步放大的部分移到視野的中心。低倍→高倍→油鏡。油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。3.放置玻片標本時要對準通